CD103+T細胞在銀屑病皮損中的表達

郝志敏　欒　超　胡　煜　楊永紅　劉　毅　陳　敏　崔盤根

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·論著·

CD103+T細胞在銀屑病皮損中的表達

郝志敏欒超胡煜楊永紅劉毅陳敏崔盤根

目的：明確銀屑病患者皮膚CD103+T細胞的表達及其與銀屑病嚴重程度的關系。方法：免疫組化檢測29例銀屑病患者皮損和非皮損及6名健康對照皮膚中表皮及真皮CD103+T細胞的表達。結果：CD103+T細胞主要在真皮表達。銀屑病患者皮損和非皮損真皮中每個高倍視野CD103+T細胞百分率分別為(26.06±11.72)%和(12.82±4.50)%(P<0.05)；健康人對照皮膚真皮內CD103+T細胞百分率為(7.47±1.30)%，明顯低于銀屑病非皮損區(P<0.05)。銀屑病患者皮損中，CD103+T的表達與PASI值正相關(P<0.05)。 結論：真皮中CD103+T細胞可能與銀屑病的發病及嚴重程度有關。

銀屑病；CD103+T細胞；免疫組化

銀屑病是一種T細胞介導的慢性炎癥性皮膚病[1]。有研究認為：黏附分子，包括整合素，調節皮膚中T細胞的功能，從而影響銀屑病的發生和發展[2,3]。CD103是整合素αEb7的αE亞基，具有獨特的結構特點。它只表達于特定的免疫細胞，如上皮內T細胞、樹突狀細胞、肥大細胞、T調節細胞。并通過氨基酸148～337域，綁定到E-鈣黏素上[4]。其主要作用有：控制效應T細胞和記憶T細胞、介導移植物抗宿主反應、對抗腫瘤發生、控制T調節細胞(Treg)和樹突狀細胞的定位和作用[5]。有證據顯示，T細胞表達CD103不局限于經典的黏膜部位，而且在不同種類的上皮細胞中也表達，如肺和皮膚。近來有報道顯示在感染性皮膚病和皮膚腫瘤中CD103也起作用[6,7]。關于CD103在銀屑病發病機制中的作用，研究甚少，目前還未見文獻報道銀屑病真皮中CD103+T細胞的情況。我們通過免疫組化技術檢測銀屑病患者皮損、非皮損中CD103的表達，分析其與銀屑病皮損嚴重程度關系及臨床意義。

1　病例和方法

1.1病例資料臨床或組織病理學診斷為進行期尋常型銀屑病(斑塊狀)患者29例，男19例、女10例，年齡19～59歲，平均(39.2±10.0)歲，病程1周～20年，PASI評分5.2～46，平均17.1±10.6。患者近4周內未應用糖皮質激素或免疫抑制劑等系統治療，未合并其他皮膚病及自身免疫性疾病和腫瘤等病史。經本院倫理委員會批準并征得患者知情同意，皮膚鉆孔法活檢取材，除皮損外同時切取皮損臨近2 cm處正常皮膚作為非皮損組織(均取自背部)。健康人對照皮膚6名，取自我院外科整形手術多余的正常皮膚(取自背部)，其中男5例、女1例，年齡19～46歲，平均(32.2±8.6)歲。患者和健康對照組在性別和年齡上比較差異無統計學意義。

1.2試劑兔抗人CD103單克隆抗體均產自英國Abcam公司。磷酸鹽緩沖液(PBS)由美國Gibco公司生產。枸櫞酸抗原修復緩沖液、內源性過氧化氫酶抑制劑、非免疫動物血清(羊)、辣根過氧化物酶(HRP)標記抗兔IgG、蘇木素和中性樹膠均產自福州邁新生物技術有限公司。

1.3方法

1.3.1免疫組化在軀干皮損處按常規鉆孔取直徑約5 mm皮膚標本，經甲醛固定，將組織制成蠟塊后連續切成5 μm，免疫組化染色按照染色試劑盒操作說明進行，所有切片均在同一質控條件下進行，設陽性和陰性對照。染色為AEC染色，陽性為棕黃色。

1.3.2結果判定CD103陽性表達定位于細胞膜和胞質，結果為棕黃色顆粒。隨機選取真皮中5個顯微鏡高倍視野(×200)，計算陽性表達T細胞的平均百分比。

2　結果

29例銀屑病患者皮損和非皮損、6名正常人對照皮膚中均可見表達CD103+T細胞。29例銀屑病患者皮損中CD103+T細胞分布廣泛，包括表皮和真皮淺深層，主要分布在真皮，其中26例表皮內可見陽性細胞，數量少(未統計)。非皮損中CD103+T細胞主要分布在真皮內，16例表皮內可見陽性細胞，數量極少。6名健康人對照皮膚中CD103+T細胞主要分布于真皮淺層，1例表皮內可見陽性細胞(圖1)。

1a:皮損中，CD103+T細胞分布廣泛，包括表皮和真皮淺深層，主要分布在真皮(HE,×100)；1b:非皮損中， CD103+T細胞主要分布在真皮淺層(HE，×100)；1c:正常對照，皮膚中CD103+T細胞少量分布于真皮淺層(HE,×100)

圖1銀屑病皮損CD103連續切片染色結果表皮和真皮均有CD103+T細胞，見棕黃色顆粒

銀屑病患者皮損真皮每個顯微鏡高倍視野中CD103+T細胞平均百分率明顯高于非皮損，及健康人對照皮膚(表1)。銀屑病患者皮損中CD103+T細胞百分率與PASI評分呈正相關(r=0.43，P<0.05)(圖2)。

表1　銀屑病患者皮膚真皮CD103+T細胞百分率比較

注：a皮損組與非皮損組比較，t=7.19，P<0.05；b皮損組與健康對照組比較，t=2.84，P<0.05；c非皮損組與健康對照組比較，t=9.03，P<0.05

圖2　銀屑病患者皮損中CD103+T細胞百分率

3　討論

目前普遍認同，T細胞在銀屑病的發病機制中起了關鍵性的作用。活化的T細胞先從外周血管和淋巴管進入皮膚真皮，引起真皮炎癥，然后進入表皮導致角質形成細胞的增生[8]。有研究提示，CD103分子有助于T細胞與角質形成細胞的黏附[9-11]。Teraki等[3]研究發現，銀屑病患者非皮損中不表達CD103+T細胞，皮損表皮中CD103+T細胞明顯高于真皮，表皮CD8+CD103+T細胞明顯高于CD4+CD103+T細胞；另有研究表明，正常皮膚中，20%～30%表皮CD8+T細胞表達CD103，而在活動期銀屑病患者皮損表皮中，高達50% CD8+T細胞表達CD103[9]。以上研究主要闡述了銀屑病皮損表皮中CD103+T細胞的表達和功能，但目前對真皮中CD103+T細胞的研究尚不明確。在此項研究中，我們首次發現并指出，在銀屑病患者的皮損中，CD103不僅表達于表皮中T細胞，更重要的是也能在真皮活化的T細胞上大量表達。本段開頭我們已經討論過，活化的T細胞是由真皮進入表皮，引起表皮增生。我們研究發現，銀屑病患者皮損和非皮損真皮中CD103+T細胞的表達明顯高于正常對照，提示CD103+T細胞在銀屑病發病機制中起到重要作用。

銀屑病作為一種慢性炎癥性皮膚病，病程長，易反復，但其機制目前尚不清楚。炎癥階段高TGF-β(由成纖維細胞、肥大細胞、角質細胞分泌)或維A酸誘導下，T細胞與抗原相互作用，表達CD103[3，12]。CD103+T細胞在慢性炎癥狀態組織內高表達(如腫瘤、感染及一些自身免疫性疾病)，其主要功能可能是作為抵御腫瘤和炎癥的第一線[6,13,14]。本研究發現銀屑病皮損真皮中CD103+T細胞百分比明顯高于非皮損，再次證實了CD103+T細胞的數量與銀屑病皮損的形成有關。有趣的是，在我們另一篇已發表的相關研究中，我們發現在銀屑病患者皮損處，皮損消退前后CD103+CD69+T細胞數量無明顯統計學差異[15]，提示CD103可能與銀屑病的反復發作相關。

Eysteinsdottir等[11]曾研究發現銀屑病患者外周血中CD103+T細胞數目與PASI評分密切相關，但他們未研究皮損中CD103+T細胞的情況。在銀屑病活動期，大量表達IL-17A和IL-22的CD103+T細胞(包括CD4+T，CD8+T)遷移入皮損真皮和表皮。IL-17A具有募集炎癥細胞作用，而IL-22參與角質細胞激活以及棘細胞層增厚[9]。我們研究發現銀屑病皮損真皮中CD103+T細胞與PASI相關，和病情嚴重程度一致。進一步證實了CD103+T細胞參與銀屑病病情發展。并提示CD103+T細胞可以作為評估銀屑病病情嚴重程度的實驗室指標。

綜上所述，銀屑病患者皮損真皮中CD103+T細胞表達明顯高于非皮損及健康皮膚，并與銀屑病病情嚴重程度相關，真皮中的CD103+T細胞在銀屑病發病機制中起一定作用。由于免疫組化法同時檢測3種表面標記存在困難，我們尚未區別CD103+T細胞屬于CD4+T細胞還是CD8+T細胞亞群。在Pauls等[10]研究中，CD8+CD103+T細胞主要表達于銀屑病皮損表皮中，CD4+CD103+T細胞主要表達于真皮中。而CD4+CD103+T細胞屬于記憶T調節細胞，而且他們的調節能力與CD103 T細胞表達水平相關[16]，有文獻支持這一細胞與某些炎癥疾病慢性化有關[17]。推測真皮中CD103+T細胞主要為CD4+T細胞。但其功能、活化機制以及調節機制還有待進一步研究。

[1] Cosmi L, Liotta F, Maggi E, et al. Th17 and non-classic Th1 cells in chronic inflammatory disorders: two sides of the same coin[J]. Int Arch Allergy Immunol,2014,164(3):171-177.

[2] Rottman JB, Smith TL, Ganley KG, et al. Potential role of the chemokine receptors CXCR3, CCR4, and the integrin alphaEbeta7 in the pathogenesis of psoriasis vulgaris[J]. Lab Invest,2001,81(3):335-347.

[3] Teraki Y, Shiohara T. Preferential expression of alphaEbeta7 integrin (CD103) on CD8+T cells in the psoriatic epidermis: regulation by interleukins 4 and 12 and transforming growth factor-beta[J]. Br J Dermatol,2002,147(6):1118-1126.

[4] Berthelot JM, Le Goff B, Martin J, et al. Essential role for CD103+cells in the pathogenesis of spondyloarthritides[J]. Joint Bone Spine,2015,82(1):8-12.

[5] Hadley GA, Higgins JM. Integrin alpha Ebeta7: molecular features and functional significance in the immune system[J]. Adv Exp Med Biol,2014,819:97-110.

[6] Franciszkiewicz K, Le Floc' HA, Boutet M, et al. CD103 or LFA-1 engagement at the immune synapse between cytotoxic T cells and tumor cells promotes maturation and regulates T-cell effector functions[J]. Cancer Res,2013,73(2):617-628.

[7] Morgan EA, Pihan GA, Said JW, et al. Profile of CD103 expression in T-cell neoplasms: immunoreactivity is not restricted to enteropathy-associated T-cell lymphoma[J]. Am J Surg Pathol,2014,38(11):1557-1570.

[8] Kim J, Krueger JG. The immunopathogenesis of psoriasis[J]. Dermatol Clin,2015,33(1):13-23.

[9] Cheuk S, Wiken M, Blomqvist L, et al. Epidermal Th22 and Tc17 cells form a localized disease memory in clinically healed psoriasis[J]. J Immunol,2014,192(7):3111-3120.

[10] Pauls K, Schon M, Kubitza RC, et al. Role of integrin alphaE (CD103) beta7 for tissue-specific epidermal localization of CD8+T lymphocytes[J]. J Invest Dermatol,2001,117(3):569-575.

[11] Eysteinsdottir JH, Sigurgeirsson B, Olafsson JH, et al. The role of Th17/Tc17 peripheral blood T cells in psoriasis and their positive therapeutic response[J]. Scand J Immunol,2013,78(6):529-537.

[12] Rihs S, Walker C, Virchow JJ, et al. Differential expression of alpha E beta 7 integrins on bronchoalveolar lavage T lymphocyte subsets: regulation by alpha 4 beta 1-integrin crosslinking and TGF-beta[J]. Am J Respir Cell Mol Biol,1996,15(5):600-610.

[13] Gebhardt T, Mackay LK. Local immunity by tissue-resident CD8(+) memory T cells[J]. Front Immunol,2012,3:340.

[14] Ohmatsu H, Kadono T, Sugaya M, et al. α4β7 Integrin is essential for contact hypersensitivity by regulating migration of T cells to skin[J]. J Allergy Clin Immunol,2010,126(6):1267-1276.

[15] 欒超,楊永紅,王焱,等.銀屑病患者皮膚中原位記憶T淋巴細胞的檢測[J].中華皮膚科雜志,2014,47(11):800-802.

[16] Siewert C, Lauer U, Cording S, et al. Experience-driven development: effector/memory-like alphaE+Foxp3+ regulatory T cells originate from both naive T cells and naturally occurring naive-like regulatory T cells[J]. J Immunol,2008,180(1):146-155.

[17] Suffia I, Reckling SK, Salay G, et al. A role for CD103 in the retention of CD4+CD25+Treg and control of Leishmania major infection[J]. J Immunol,2005,174(9):5444-5455.

(收稿：2015-04-26修回：2015-10-29)

Expression of CD103+T cells in psoriatic lesions

HAOZhimin,LUANChao,HUYu,YANGYonghong,LIUYi,CHENMin,CUIPangen.

ChineseAcademyofMedicalSciencesandPekingUnionMedicalCollege,Nanjing210042,China

CHENMin,E-mail:drchenmin@126.comCUIPangenE-mail:pangencui@126.com

Objective: To detect the level of CD103+T lymphocytes in psoriatic lesions and to determine the relationship with the severity of psoriasis. Methods: CD103+T lymphocytes in dermis and epidermis of the lesions and non-lesional skin from 29 patients with psoriasis and skin from 6 healthy controls were detected by immunohistochemical staining. Results: CD103+T lymphocytes mainly distributed in dermis. The mean percentage of CD103+T lymphocytes in lesions, non-lesional skin and normal skin was (26.06±11.72)%, (12.82±4.50)% and (7.47±1.30)% and there were significant differences among the groups (P<0.05). There was a positive correlation between the level of CD103+T lymphocytes and the PASI score (P<0.05). Conclusion: CD103+T lymphocytes in the dermis may associate with the occurrence and severity of psoriasis.

psoriasis; CD103+T lymphocytes; immunohistochemical staining

衛生公益性行業科研專項經費項目(編號：201002016)

中國醫學科學院皮膚病醫院，江蘇省皮膚病與性病分子生物學重點實驗室，南京，210042

陳敏，E-mail:drchenmin@126.com

崔盤根，E-mail:pangencui@126.com