P16聯合Ki-67免疫組化檢測在宮頸病理診斷中的應用*

王興民王鑫丹龐朗呂健勇楊晗

P16聯合Ki-67免疫組化檢測在宮頸病理診斷中的應用*

王興民①王鑫丹①龐朗①呂健勇①楊晗①

目的：采用免疫組化技術探討不同程度宮頸病變組織中P16、Ki-67的表達。方法：收集770例宮頸上皮內瘤變病理標本，進行常規病理診斷和免疫組化檢測，觀察P16、Ki-67在宮頸標本中的表達。結果：隨著宮頸疾病的加重，P16呈逐漸彌漫陽性表達，并且陽性表達率逐漸增加，同時Ki-67指數也同時升高。結論：宮頸病理標本進行P16聯合Ki-67檢測可以提高診斷準確率，減少誤診漏診。

宮頸上皮內瘤變； 病理診斷； 免疫組化

宮頸上皮內瘤變（CIN）是一組與宮頸浸潤癌密切相關的癌前期病變的統稱，是常見的婦科疾病。CIN的提出表明由宮頸炎發展到宮頸癌是一個連續過渡的過程，即由CINⅠ→CINⅡ→CINⅢ→早期浸潤癌→浸潤癌的一系列病理變化［1-4］。在我國宮頸癌是威脅女性生殖健康的常見惡性腫瘤之一，早期宮頸癌篩查對女性健康具有非常重要的意義。國家衛計委對中國廣大農村進行“兩癌篩查”專項扶持，并取得了顯著的成就，使宮頸癌成為一種可以有效防治的惡性腫瘤，因此提高宮頸上皮內瘤變診斷的準確性對有效防治宮頸癌具有重要的作用。近年來，隨著科技的進步，人們發現P16免疫組化染色可以提高宮頸上皮內瘤變的診斷準確率［5-7］。2014年WHO女性生殖系統分類中，在宮頸鱗狀細胞癌前病變中推薦使用P16免疫組化染色將鱗狀上皮內病變進行兩級分類，即低級別鱗狀上皮內瘤變（LSIL）和高級別鱗狀上皮內瘤變（HSIL），LSIL相當于CINⅠ，HSIL相當于CINⅡ和CINⅢ［8］。目前研究認為HSIL，與高危險型HPV，如HPV16、HPV18、HPV31、HPV33、HPV35、HPV39、HPV45、HPV51、HPV52、HPV56、HPV58、HPV59、HPV68有關，LSIL與低危險型HPV包括HPV6、HPV11、HPV42、HPV43、HPV44和一過性高危HPV感染有關［2-4］。臨床診療指南認為高級別鱗狀上皮內瘤變通過錐切治療可以降低宮頸癌的發生，低級別鱗狀上皮內瘤變保守治療即可，但已有研究發現有些CINⅡ經過保守治療后會轉變為CINⅠ，有些CINⅠ保守治療會進展到CINⅡ［8-10］。因此，認為2014年WHO女性生殖系統分類存在一定的局限性。本項研究采用免疫組化技術探討P16、Ki-67在宮頸上皮內瘤變的病理診斷中的作用，現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集2015年1-7月來柳州市婦幼保健院婦科就診的宮頸疾病患者活檢標本770例，平均年齡（29.8±6.4）歲，其中病理診斷結果為慢性炎529例，平均年齡（29.9±6.9）歲；CINⅠ級85例，平均年齡（29.0±5.3）歲；CINⅡ級47例，平均年齡（29.7±5.1）歲；CINⅢ級64例，平均年齡（28.8±8.2）歲；宮頸癌45例，平均年齡（31.5±6.9）歲。各宮頸疾病患者年齡比較，差異無統計學意義（F=0.262，P=0.901＞0.05）。

1.2方法

1.2.1常規組織病理操作 標本經10%福爾馬林溶液固定，病理取材，脫水機（thermo）常規過夜脫水，石蠟包埋，手搖切片機5 μm連續切片后行HE染色，由兩名經驗豐富的病理醫師進行病理診斷閱片。

1.2.2P16、Ki-67免疫組化染色 免疫組化使用VENTANA的P16、Ki-67一抗采用VENTANA全自動檢測法。石蠟切片后，65 ℃烤片2 h。上機開始免疫組化染色，染色結束后封片，兩名經驗豐富的病理醫師進行免疫組化閱片，結合常規病理與免疫組化染色進行診斷。

1.2.3宮頸上皮病變的治療 根據臨床診療指南，慢性炎和CINⅠ級臨床給予保守治療，CINⅡ級和CINⅢ級需要錐切；宮頸癌需要進行子宮切除手術治療。

1.3統計學方法 采用SPSS 20.0軟件對所得數據進行統計分析，計量資料用（±s）表示，計量資料采用方差分析法（ONE WAY ANOVO法），組間采用LSD雙重比較法進行統計分析；計數資料以率（%）表示，比較采用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1不同程度宮頸病變P16的表達 P16陽性為胞質、胞核共同表達。結果顯示，在正常鱗狀上皮和良性增生的鱗狀上皮P16呈陰性；在宮頸不成熟鱗化中呈不連續片狀或斑片狀分布，陽性強度較弱，陽性率＜5%；CINⅠ級既有陰性表達，也有彌漫的陽性表達；但CINⅡ～Ⅲ級、宮頸癌中呈連續彌漫強陽性，見圖1。同時P16陽性表達率由慢性炎的1.70%增加到CINⅠ級的95.12%和CINⅡ級、CINⅢ級、宮頸癌的100%（χ2=699.301，P=0.000＜0.01），見表1。

表1　不同程度宮頸病變P16得表達

2.2不同程度宮頸病變Ki-67的表達 Ki-67陽性為細胞核表達。結果顯示在正常或反應性增生的宮頸上皮陽性率＜10%，而且主要分布在基底層和副基底層；隨著宮頸上皮內瘤變級別的升高，Ki-67陽性細胞的分布不再局限于底層細胞，逐漸向中層和表層擴展蔓延，并且表達與病變程度基本一致，見圖1。Ki-67陽性指數也隨著疾病程度加重而增加，由慢性炎的＜10%（基層陽性）增加到宮頸癌的（90.50±5.24）%（F=182.55，P=0.000＜0.01），見表2。

表2　Ki-67陽性指數在宮頸病變中變化

3 討論

P16是1994年美國冷泉港實驗室Kamb等發現的新型抑癌基因，是一種周期依賴性蛋白激酶抑制劑，直接作用于細胞周期發揮負調控作用。已有研究證實P16與肺癌、乳腺癌、腦腫瘤、骨腫瘤、皮膚癌、膀胱癌、腎癌、卵巢癌、淋巴瘤、惡性黑色素廇的發病有關［11-13］。因此，有學者將P16比作細胞周期中剎車裝置，一旦失靈就會導致惡性腫瘤的發生。P16在宮頸癌及癌前病變高表達，這是由于HPV早期基因E7蛋白限制了Rb蛋白釋放轉錄因子E2F，誘導P16過表達。因此，P16被用作宮頸癌及癌前病變診斷的高敏感性的標記物，并用作宮頸癌及宮頸上皮瘤變的輔助診斷，是宮頸癌早期診斷的標記物。隨著研究的深入，P16在宮頸病變中的診斷作用日益突出，并寫入2014年WHO女性生殖系統腫瘤的病理診斷中［14-18］。大量研究證實宮頸癌和癌前病變P16陽性表達。在本項研究中，P16隨著病情加重表達逐漸增強，陽性表達率增加，在高級別上皮內瘤變（CINⅡ級、CINⅢ級）和宮頸癌中表達率達100%，但不能區分腫瘤類型，如鱗癌或腺癌，提示P16可以用于定性判定宮頸上皮內瘤變的病情，但不能用于鑒別診斷。

圖1　P16和Ki-67在宮頸疾病中表達

Ki-67是一種增殖細胞相關的核抗原，其功能與有絲分裂密切相關。Ki-67作為標記細胞增殖狀態的抗原，Ki-67表達范圍覆蓋除G0期以外的所有增殖周期細胞，可較好地用于檢測組織中的增殖細胞，但在靜止期細胞不表達。細胞增殖是一個被高度協調機制控制的基本生物過程，人體復雜的調控機制負責胚胎的正常發育、傷害和感染等的調控，一旦調控平衡被打破，就可能產生腫瘤。因此，腫瘤的發生、發展與細胞的異常增殖密不可分。有研究表明Ki-67增殖指數的高低與腫瘤的分化程度、浸潤轉移以及預后密切相關，陽性說明癌細胞增殖活躍，提示腫瘤更容易進展。Ki-67在低分化癌組織中的表達較在中高分化癌組織的表達明顯升高，表明Ki-67染色陽性程度與組織學分級的相關性，高Ki-67的患者生存時間明顯縮短［19-20］。目前，Ki-67可以被用作腫瘤發生發展及腫瘤細胞活性的指標。研究表明Ki-67陽性指數升高與乳腺癌的發生發展有關，對乳腺癌的診斷治療和預后評價具有重要的參考價值。Ki-67與大腸癌、甲狀腺癌、卵巢癌、膀胱癌等惡性腫瘤的進展也密切相關［21-22］。在本項研究中，Ki-67在宮頸慢性炎只是基層表達，隨著病情的加重表達陽性指數逐漸增加，宮頸癌Ki-67陽性指數達到（90.50±5.24）%，可以定量評價宮頸疾病的病情程度。

綜上所述，P16和Ki-67的表達與宮頸疾病的病情程度密切相關。正常的宮頸上皮通常P16表達陰性，Ki-67基層陽性表達。隨著病情加重，P16陽性表達逐步增強，其陽性表達率和Ki-67的陽性指數逐漸增加。在宮頸癌P16表達呈彌漫強陽性，Ki-67陽性指數大于80%。在病灶太小，臨床醫生取材太碎或過度鉗夾、燒灼等情況下，P16聯合Ki-67免疫組化檢測可以大大提升了診斷準確率，避免了漏診誤診。

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Value of P16 and K i-67 Immunohistochemical Detection in the Diagnosis of Cervical Pathological

WANG Xing-min，WANG Xin-dan，PANG Lang，et al.//Medical Innovation of China，2016，13（29）：048-051

Objective：To investigative the expression of P16 and Ki-67 in different degree of cervical lesion using immunohistochemistry.Method：A total of 770 patients with cervial intraepithelial neoplasia were chose and

routine pathological diagnosis and immunohistochemical detection of P16 and Ki-67.Result：P16 was gradually filled with positive expression and positive expression rate increased with higher Ki-67 index following the deterioration of cervical diseases.Conclusion：Immunohistochemical detection of P16 and Ki-67 might improve diagnistic accuracy and decrease misdiagnosis.

Cervical conization intraepithelial neoplasia； Pathological diagnosis； Immunohistochemistry First-author’s address：Liuzhou Matemity and Child Healthcare Hospital，Liuzhou 545001，China

10.3969/j.issn.1674-4985.2016.29.013

柳州市科學研究與技術開發計劃項目（2014J030418）

①廣西柳州市婦幼保健院 廣西 柳州 545001

王鑫丹

（2016-01-16） （本文編輯：程旭然）