慢性自發性蕁麻疹血小板參數及P選擇素的檢測

馬一平　李誠讓　吳建兵　崔盤根　林　麟

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·論著·

慢性自發性蕁麻疹血小板參數及P選擇素的檢測

馬一平李誠讓吳建兵崔盤根林麟

目的：檢測慢性自發性蕁麻疹(CSU)患者血小板參數及P選擇素的表達水平,并分析與疾病嚴重程度的相關性。方法：對120例CSU患者和40名健康對照者進行血小板相關參數和可溶性P選擇素檢測，并分析與自身免疫血清實驗(ASST)結果、CSU疾病嚴重度評分(USS)的相關性。結果：CSU組平均血小板體積(MPV)、血小板分布寬度(PDW)和可溶性P選擇素水平分別為(11.23±1.36)fL、(13.41±2.26)fL和(74.16±20.32)ng/mL，明顯高于正常對照組的(9.38±1.24)fL，(11.17±2.51)fL和(32.14±8.37)ng/mL。CSU組血小板計數為(176.16±41.05)×109/L，明顯低于健康對照組的(227.35±42.33)×109/L。所有患者中USS評分與P選擇素呈正相關，ASST陽性患者中USS與MPV呈正相關。結論：CSU組MPV、PDW和可溶性P選擇素值升高，且與疾病嚴重程度相關，提示CSU患者中存在血小板活化。

蕁麻疹；平均血小板體積；P選擇素

慢性自發性蕁麻疹(chronic spontaneous urticaria，CSU)的發病機制尚不明確。近來有研究顯示血小板及其活化產物，除了在血栓形成與止血中具有重要作用外，在一些炎癥性疾病的免疫和炎癥反應中也發揮重要作用，如哮喘、關節炎、炎癥性腸道疾病及濕疹、特應性皮炎和蕁麻疹等炎癥性皮膚病[1,2]。

血小板活化后釋放活性氧，已有研究證實血小板氧化應激參與CSU的發病[3]。另血小板通過釋放多種炎癥介質，參與CSU發病的免疫炎癥過程[4]。同時CSU常伴隨凝血級聯反應的激活和纖維蛋白溶解。凝血途徑的激活導致凝血酶的生成，是CSU加重的重要因素。凝血酶是一種絲氨酸蛋白酶，其在凝血級聯反應中誘導血小板活化，從而在CSU發病中發揮重要作用[5]。

既往研究多認為，平均血小板體積(mean platelet volume，MPV)和血小板分布寬度(platelet distribution width，PDW)可作為血小板活化檢測指標[6]。但其在CSU的研究中，結果不盡相同。大多數研究發現CSU患者MPV、PDW值高于健康對照組[7,8]，但亦有部分研究認為兩者之間無明顯差異[4]，甚至有研究發現CSU患者MPV值明顯低于健康對照組[9]。因此有學者認為，MPV和PDW不足以單獨作為評估血小板活化和功能的指標[10]。可溶性P選擇素合成并儲存于內皮細胞的Weibel-palad小體和血小板α顆粒內，是反映血小板活化程度的特異標志[7]。為此,檢測了MPV等血小板參數和可溶性P選擇素水平，探討血小板活化在CSU發病中的作用，并分析與自身免疫血清實驗(autologous serum skin test，ASST)結果、CSU嚴重度等臨床指標的相關性。

1　資料與方法

120例CSU患者和40名健康對照者均于2014年1月至2015年7月就診于我院。記錄患者的基本信息、臨床和實驗室相關指標數據。健康對照組亦記錄相關實驗室數據?；颊呔锌购丝贵w及甲狀腺相關抗體測定，入組結果陰性者。將CSU患者根據ASST實驗結果分為ASST陽性組(52例)和ASST陰性組(68例)，比較兩組之間各參數之間的差異性。疾病嚴重度評估采用EAACI/GA2LEN/EDF指南推薦的蕁麻疹嚴重度積分(urticaria severity score，USS)，將CSU患者分為輕型(n=77)、中重度(n=43)。

1.1病例選擇入組患者年齡18～45歲，連續性或反復紅斑、風團發作6周以上。年齡、性別相匹配的健康人群40名作為對照。排除標準：排除急性蕁麻疹、物理性蕁麻疹、蕁麻疹性血管炎，合并有諸如類風濕性關節炎和炎癥性腸病等其他慢性炎癥性疾病、高血壓病、糖尿病、心血管疾病、癌癥、血液系統疾病、慢性肝臟或腎臟疾病、自身免疫性疾病等。

1.2實驗方法

1.2.1血常規的檢測，應用美國貝克曼LH750血細胞分析儀進行檢測，主要包括血紅蛋白、白細胞、MPV、PLT、PDW、PCT等指標。

1.2.2C反應蛋白(CRP)非抗凝血2 mL，使用QUICKREAD分析儀，用免疫比濁法測定，試劑 “QuickRead CRP”由芬蘭ORION診斷公司提供。

1.2.3可溶性P選擇素采用雙抗夾心酶聯免疫吸附測定(美國RD公司)，嚴格按照實驗說明書操作。

2　結果

2.1CSU患者和健康對照組之間血小板參數、CRP、P選擇素之間的比較CSU組與健康對照組相比，CSU組MPV值、PDW值、CRP、可溶性P選擇素值明顯高于健康對照組。CSU組血小板計數明顯低于健康對照組(表1)。

2.2ASST陽性組與ASST陰性組兩組之間比較見表2。ASST陽性組具有更高的MPV值(P=0.037)、CRP(P=0.021)、可溶性P選擇素值(0.006)。

表1　CSU患者和健康對照組血小板參數、CRP、P選擇素間的比較

注：MPV：平均血小板體積； PDW：血小板分布寬度； PLT：血小板計數； PCT：血小板壓積； CRP：C反應蛋白

表2　ASST陽性組與ASST陰性組血小板參數、CRP、P選擇素間的比較

注：MPV：平均血小板體積； PDW：血小板分布寬度； PLT：血小板計數； PCT：血小板壓積； CRP：超敏C反應蛋白

2.3蕁麻疹嚴重度評分(USS)與血小板參數、CRP、P選擇素間的相關性見表3。結果發現，CSU患者USS與MPV正相關，與其他血小板參數之間未見明顯相關性。進一步分析發現，此種相關性只見于ASST陽性組。另CSU患者USS與CRP、P選擇素之間亦存在正相關，且ASST陽性組、ASST陰性組均見類似相關性。

表3　蕁麻疹嚴重度評分(USS)與CSU患者血小板參數、CRP、P選擇素間的相關性

注：R1：總CSU組Spearman相關系數r值；R2：ASST陽性組相關系數r值；R3:ASST陰性組相關系數r值； P1：總CSU組P值； P2：ASST陽性組P值； P3：ASST陰性組P值

3　討論

血小板活化包括血小板形狀的改變、血小板聚集和血小板成分的釋放，而實際中可以量化檢測血小板形狀的改變及聚集趨勢的變化；另可以通過檢測血和尿中相關血小板代謝產物的水平而判斷血小板活化程度。血小板形態學的改變可以通過自動全血細胞分析儀，檢測各種血小板參數而輕松獲得。其中MPV和PDW是研究最為廣泛的血小板活化指標[6]。P選擇素是反映血小板活化程度的特異標志，對判斷血栓前狀態，體內凝血傾向具有重要意義。當血小板活化時，P選擇素迅速從血小板的α顆粒膜內移動到膜表面，從而啟動血小板與白細胞的黏附。在血流中，白細胞成鏈索狀在活化的血小板上滾動并黏附。研究表明，P選擇素不僅對血小板的黏附起作用，而且對血小板的聚集也具有重要意義[7]。

本研究發現，CSU組與健康對照組相比，ASST陽性組與ASST陰性組間比較，ASST陽性組具有更高的MPV、CRP和可溶性P選擇素值。提示CSU患者存在血小板活化，尤以ASST陽性者表現明顯。該結果與國外部分研究相符。Chandrashekar等[7]研究發現，慢性蕁麻疹(CU)患者MPV和PDW值明顯高于健康對照組。CU患者血小板聚集和可溶性P選擇素水平明顯高于對照組。自體血漿皮膚實驗(autologous plasma skin test，APST)陽性患者與APST陰性患者相比，前者具有更高的血小板聚集和可溶性P選擇素，提示自身免疫相關患者組血小板活化程度更高。研究者認為CU患者存在明顯的血小板活化，尤其是自身免疫相關的CU患者。Magen等[8]研究發現ASST陽性CU患者，與ASST陰性CU患者和健康對照組相比，MPV和CRP濃度明顯升高。

但亦有與我們研究不符的報道，Kasperska-Zaj?c等[4]研究發現，CSU患者和健康對照組相比，MPV和PDW值未見明顯差異。Akelma等[9]研究發現，兒童CSU患者MPV值明顯低于健康對照組。我們分析結論不同的原因可能在于：(1)所選病例年齡、病程等不同；(2)MPV值受多種因素影響，例如保存時間、抗凝劑的選擇、血細胞分析儀型號的不同、藥物、炎癥、冠狀動脈疾病、血小板計數、血小板大小、糖尿病等，臨床研究中很難完全避免這些混雜因素；(3)上述結論不符的研究中，未檢測可溶性P選擇素水平。

本研究中發現，CSU組血小板計數明顯低于健康對照組，與Chandrashekar等[7]研究結果一致。但Magen等[8]研究發現，CU患者和健康對照組相比，血小板計數值無明顯差別。Kasperska-Zaj?c等[4]研究發現，中重度CSU患者血小板計數，明顯高于輕度CSU患者和健康對照組。另外既往研究顯示[7]，MPV值與血小板計數值之間存在負相關，故而支持我們研究中CSU組PLT明顯低于健康對照組的結果。

本研究相關性分析中發現，CSU患者USS與CRP、P選擇素之間呈正相關。ASST陽性CSU患者，USS與MPV呈正相關。提示CRP、P選擇素和MPV，可作為CSU患者疾病嚴重度評估的可能監測指標。Magen等[8]研究發現，ASST陽性CU患者USS與MPV值呈明顯正相關，與我們研究結果相符。

本研究證實了CSU存在血小板活化，尤其是ASST陽性患者，該結果進一步解釋了臨床中單純抗組胺藥物療效不佳的原因。我們認為聯合雙嘧達莫、盧帕他定等抗血小板藥物，可能對于部分CSU具有更好療效。另CRP、P選擇素和MPV可作為CSU患者疾病嚴重度評估的可能監測指標。但鑒于本研究病例數少，上述結果仍需更大樣本量、設計完善的臨床研究予以佐證。

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[4] Kasperska-Zaj?c A, Grzanka A, Jarzab J, et al. The association between platelet count and acute phase response in chronic spontaneous urticaria[J]. Biomed Res Int,2014,16. http://dx.doi.org/10.1155/2014/650913.

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(收稿：2016-01-29修回：2016-03-17)

Detection of the levels of platelet parameters and soluble P-selectin in the patients with chronic spontaneous urticaria

MAYiping,LIChengrang,WUJianbing,CUIPangen,LINLin.

InstituteofDermatology,ChineseAcademyofMedicalSciences,Nanjing210042,China

Correspondingauthor:MAYiping,E-mail:mayipingg@sohu.com

Objective: To detect the levels of platelet parameters and soluble P-selectin in the patients with chronic spontaneous urticaria (CSU). Methods: The levels of platelet parameters, and soluble P-selectin in 120 patients and 40 healthy controls were detected and the relationship between these parameters and autoimmune serum test (ASST) and urticaria severity score (USS) was analyzed. Results: The levels of mean platelet volume (MPV), platelet distribution width (PDW) and soluble P-selectin were (11.23±1.36)fL, (13.41±2.26)fL and (74.16±20.32)ng/mL in the patients, which were significantly higher than those in controls group (9.38±1.24 fL, 11.17±2.51 fL and 32.14±8.37 ng/mL, respectively). The level of platelet count in CSU group was (176.16±41.05)×109/L, which was significantly lower than that in controls (227.35±42.33)×109/L. There was a significant positive correlation between USS and P-selectin levels in the patients and the correlation between USS and MPV in the patients with positive ASST was also significantly positive. Conclusion: The levels of MPV, PDW and soluble P-selectin were increased in the patients with CSU and were correlated to the disease severity. The platelets are activated in the patients with CSU.

urticaria; mean platelet volume; P-selectin

中國醫學科學院皮膚病研究所，南京，210042

馬一平，E-mail: mayipingg@sohu.com