川崎病患者糖皮質激素受體、IL-17A、IL-6檢測的臨床意義*

陜西省人民醫院兒科(西安710068)

張曉燕 吳守振△ 劉春風 周 南▲

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川崎病患者糖皮質激素受體、IL-17A、IL-6檢測的臨床意義*

陜西省人民醫院兒科(西安710068)

張曉燕 吳守振△劉春風 周 南▲

目的：探討糖皮質激素受體(GR)表達與IL-17A、IL-6水平在川崎病(KD)中的變化及相關性。方法：測定丙種球蛋白(IVIG)治療前后的KD組與對照組GR表達及IL-17、IL-6水平。結果：①與對照組相比KD組GRα、GRβ表達及IL-17A、IL-6水平顯著增加(P<0.05)；IVIG治療后,KD組GRα、GRβ表達及IL-17A、IL-6水平較IVIG治療前顯著降低(P<0.05)。②KD組IL-17A、IL-6水平分別與 GRα表達正相關(r= 0.4163,P<0.01；r= 0.3408,P<0.01),與GRβ表達無相關性(r= 0.1416,P>0.05；r= 0.1669,P>0.05)；IVIG治療后,GRα/GRβ比值明顯下降(2.45±0.91, 1.47±0.30 ,P< 0.01)。結論：KD早期應用糖皮質激素(GC)治療可能會提高抗炎作用。

川崎病(KD)是一種急性全身性血管炎綜合征。在KD急性期,外周血T細胞異常激活和B細胞多克隆激活，伴隨大量促炎性細胞因子釋放。Th17細胞的主要效應因子IL-17A的高表達已證實與自身免疫性疾病有關。糖皮質激素(GC)被廣泛地用于治療各種自身免疫性血管炎,其通過與糖皮質激素受體(GR)結合后激活下游靶基因發揮作用。在許多自身免疫性疾病,已證實GRα基因的高表達與皮質類固醇的敏感性有關[1]。但是KD中GR的表達很少報道。本研究中,我們探討了GR與IL-17A、IL-6水平在KD中的變化及相關性,為GC在KD中的應用提供理論依據。

資料與方法

1 一般資料 2013年8月至2015年1月間的30例KD患兒為KD患者組(男22例,女8例；年齡5月至6歲)。KD患兒均接受2 g/(kg·次)靜脈用丙種球蛋白(IVIG)治療。30例健康兒童(男22例,女8例；年齡3個月至5.6歲)為對照組。兩組間性別、年齡比較差異無統計學意義。KD入組條件：KD診斷根據第5版KD診斷標準[2]；病程≤10 d,入組前未予非甾體抗炎藥及IVIG治療。發熱第1天為川崎病急性期第1天,同時排除先天性心臟病,糖尿病及其它自身免疫性疾病。

2 檢測方法 ①分別于入院次日清晨 6～8點或入院當日2 h 內(IVIG 前)及 IVIG后第5～7天抽取靜脈血4 ml，對照組抽取靜脈血4 ml；血標本置于EDTA抗凝管。外周血單核細胞(PBMCs)由聚蔗糖密度梯度分離后做流式分析。②用TRIzol 試劑盒(Takara,Japan)提取CD4+T 細胞的總RNA。量化后2 μg RNA反轉錄為cDNA。目標基因GRα、GRβ和內參基因β-肌動蛋白通過實時PCR擴增。檢測步驟按說明書操作。③血漿IL-6、IL-17A水平用CBA試劑盒檢測,按說明書操作。

結 果

1 IVIG 治療前后GRα、GRβ與IL-17A、IL-6水平比較 見附表。KD患兒治療前GRα、GRβ及IL-17A、IL-6水平明顯高于治療后及對照組(P<0.05)。IVIG治療后GRα、GRβ的表達及IL-17A、IL-6水平與治療前比較明顯下降(P<0.05)，但仍高于對照組(P<0.05)。

附表 IVIG治療前后糖皮質激素受體及細胞因子水平比較

注：與治療后及對照組比較，*P<0.05；與對照組比較，△P<0.05

2 IL-17A、IL-6和GRα、GRβ表達的相關性 見附圖。KD患兒的IL-17A、IL-6 水平與 GRα表達正相關(r=0.4163，P<0.01；r=0.3408，P<0.01) (附圖 A、B)，而IL-17A、IL-6水平與GRβ表達無相關性 (r=0.1416，P>0.05；r=0.1669，P>0.05) (附圖 C、D)。

附圖 IL-17A, IL-6水平與 GRα、GRβ表達的相關性

3 KD患兒治療后GRα/GRβ比值變化 IVIG治療后GRα/GRβ值明顯下降(治療前為2.45±0.91，治療后為1.47±0.30，P<0.01)。

討 論

KD是一種與免疫功能紊亂有關的系統性血管炎,常見于嬰幼兒。冠脈損害(CAL)是KD最嚴重的遠期并發癥。KD的治療包括IVIG和阿司匹林。GC可以抑制許多促炎性細胞因子的合成,如：IL-1、IL-2、IL-6、IL-12等，因此被用于治療各種血管炎[3]。在KD患兒的急性期,這些炎癥因子都有升高。有研究表明早期GC聯合IVIG治療KD未增加CAL的發生率,且對于初次IVIG治療無反應的KD患兒,聯合GC治療方案與單純再次給予IVIG治療方案相比較,在心臟冠脈預后方面優于后者[4-5]。GC通過與GR相結合而發揮作用,GR包括GRα和 GRβ,GRα主要介導炎性反應,GRα的密度和親和力與GC的效力呈正相關。GRβ缺乏與GC結合的能力,通過形成GRα/GRβ異二聚體抑制GRα介導的轉錄激活[3]。我們的研究證實KD患兒的GRα和GRβmRNA的表達顯著升高,特別是GRα,IVIG治療后,GRα和GRβ表達較治療前明顯降低。GRα上調會提高GC的敏感性,進而增加GC的效力,因此生理劑量的GC在KD早期發揮重要作用。在恢復期GRα表達水平下降,GC的效力也減少。我們的另一組研究顯示,KD患兒急性期GRα水平與對照組相近,可能與研究對象、采血時間及GR檢測方法有關[6]。但均表明受體水平的調控在KD的抗炎機制中發揮重要作用。因此,在KD早期應用GC可能會提高抗炎作用。

IL-6是一種由T細胞和巨噬細胞釋放的促炎性細胞因子,與KD急性期相關。Shimizu 等[7]報道KD急性期患兒外周血T細胞中IL-17水平和Th17細胞水平明顯升高。IL-6會減少初始CD4+T細胞分化為Th17細胞, IL-17也會減少IL-6的表達。已知IL-6 會激活下丘腦-垂體-腎上腺軸(HPA),引起GC等類固醇激素釋放,可以起到自身免疫調節的作用。我們的研究顯示KD患兒的IL-17A和IL-6水平明顯高于對照組 (P<0.05), IVIG治療后較治療前明顯下降 (P<0.05),與這些研究相一致。但是GRα、GRβ的表達及IL-17A、IL-6的血清水平仍高于健康兒童，考慮與尚處于疾病恢復期有關。

KD患兒PBMCs中NF-κB激活和IL-6、IL-17水平明顯增高。在細胞培養模型中,GC通過增加亮氨酸拉鏈蛋白基因和抑制NF-κB的表達抑制炎癥反應。我們的結果表明KD患兒的IL-6和IL-17A的水平與GRα表達明顯正相關，提示這兩種細胞因子的過度表達會提高GRα的表達。由IL-6引起的GC水平升高可能是適應GR水平上調的結果，特別是GRα水平。因此，KD患兒早期給予GC會增強抗炎反應。IL-17A可能通過上調GRβ的表達，降低GC在細胞凋亡和基因調節中的作用，導致皮質類固醇抵抗[8]。我們的研究顯示IL-17A的表達與 GRβ表達沒有相關性,而與GRα的表達相關,這可能說明GRβ的表達與 GC的效力無關,在KD早期可能不存在皮質類固醇抵抗。有研究報道GRα/GRβ 比值在系統性紅斑狼瘡和類風濕性關節炎疾病的活動性方面發揮重要作用，特別是GRα低表達。當病情惡化時,GRα 表達減少,這可能會減弱GC的效力[9]。我們的研究表明KD患兒的 GRα/GRβ比值在丙球治療后明顯下降。這些結論進一步支持KD患兒早期應用GC是恰當的，但我們需要進一步擴大樣本量進行研究。

本研究結果提示：KD早期應用GC可能會提高抗炎作用,且可能不存在皮質類固醇抵抗,為KD急性期使用GC治療提供理論依據。同時,由于IVIG治療價格昂貴,GC聯合阿司匹林治療KD無疑將是一種經濟的治療方案,但還需要更多的臨床研究提供依據。

[1] Cristhian AU,Han S,Baoying L,etal. Expression kinetics of Glucocorticoid Receptor Isoforms Predicts Treatment Response to Glucocorticoids in Uveitis patients[J].Investigative Ophthalmology & Visual Science,2015,56(7): 853.[2] Ayusawa M,Sonobe T,Uemura S,etal.Revision of diagnostic guidelines for Kawasaki disease (the 5th revised edition)[J].Pediatrics international, 2005, 47(2): 232-234.

[3] Zen M,Canova M,Campana C,etal. The kaleidoscope of glucorticoid effects on immune system[J]. Autoimmunity Reviews,2011,10(6)：305-310.[4] Ogata S,Ogihara Y,Honda T,etal. Corticosteroid pulse combi nation therapy for refractory Kawasaki Disease：a randomized trial[J].Pediatrics,2012,129：17-23.

[5] Kobayashi T,Saji T,Otani T,etal. Efficacy of immunoglobulin plus prednisolone for prevention of coronary artery abnormalities in severe Kawasaki disease(RAISE study)：a randomised,open-label,blinded-endpoints trial[J].Lancet,2012,379：1613-1620.

[6] 周 南,王 濤,蘇德成,等.小兒川崎病38例外周血糖皮質激素受體檢測及其臨床意義[J].陜西醫學雜志,2013,42(5)：613-615.

[7] Shimizu J,Takai K,Fujiwara N,etal.Excessive CD4+T cells co-expressing interleukin-17 and interferon-gamma in patients with Behcet's disease[J].Clinical and Experimental Immunology,2012,168(1)：68-74.

[8] Zhu F,Wang Q,Guo C,etal. IL-17 induces apoptosis of vascular endothelial cells-a potential mechanism for human acute coronary syndrome[J]. Clinical Immunology, 2011,141(2): 152-160.

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(收稿：2016-03-15)

*陜西省自然科學基礎研究計劃項目(2014JM2-8184)

△西安市兒童醫院兒科疾病研究所

▲通訊作者

黏膜皮膚淋巴結綜合征 免疫球蛋白類, 靜脈內 受體，糖皮質激素 白細胞介素-6白細胞介素-17

R725

A

10.3969/j.issn.1000-7377.2016.10.053