廣西馬尾松松球總多酚的含量測定

梁　潔　呂松林　孫正伊　金青青　黃春燕

（1.廣西中醫藥大學藥學院，廣西 南寧 530200；2.廣西中醫藥大學附屬瑞康醫院，廣西 南寧 530001）

廣西馬尾松松球總多酚的含量測定

梁潔1呂松林1孫正伊2金青青1黃春燕1

（1.廣西中醫藥大學藥學院，廣西 南寧 530200；2.廣西中醫藥大學附屬瑞康醫院，廣西 南寧 530001）

建立馬尾松松球中總多酚的含量測定方法。以沒食子酸為對照品，采用紫外-可見分光光度法測定馬尾松松球總多酚的含量。沒食子酸在濃度1.818～10.908 μg /ml 的范圍內與吸光度值呈良好的線性關系（r = 0. 9996），馬尾松松球總多酚的平均含量為16.24 mg/g，RSD=0.31%。所建立的方法穩定可靠、操作簡便，可作為馬尾松松球總多酚的含量測定方法。

馬尾松松球；總多酚；紫外-可見分光光度法

松球是松科植物馬尾松（Pinus massoniana Lamb）、云南松（Pinus yunnanensis Faranch）、油松（Pinus tabulaeformis Carr）等的球果，又名松塔、松實、松元、小松球等，具有瀉下、解毒之功效［1］。松球中具有揮發油、多糖、黃酮類、多酚類、木質 素類等化學成分［2］。馬尾松植物資源豐富，分布于國內大部分地區，其中在廣西主要分布于南寧、柳州、貴港、玉林、賀州、梧州等地。松球為祛風濕藥，能祛風除痹，止咳平喘、祛痰、祛風、抗菌、潤腸等［3］。松球中具有多種化學活性成分，其中多酚就占有很大一部分比例。植物多酚是植物體內的復雜分類次生代謝物，是由沒食子酸或其聚合物的葡萄糖醇、黃烷醇及其衍生物的聚合物以及二者混合共同組成的多元酚。研究表明多酚具有很強的清除自由基能力和消除自由基毒性作用，同時具有很強的氧化性。它能改善心血管疾病、抗腫瘤、治療骨質疏松、降血糖、降血脂、治療神經退行性疾病等作用［4］。前期的實驗研究表明，馬尾松松球中含有的多酚類成分是其抗氧化作用的重要物質基礎之一。為此，本實驗采用紫外-可見光分光光度儀對馬尾松松球中的總多酚進行了含量測定，為馬尾松松球的進一步研究和開發利用提供科學的理論參考。

1　儀器與試藥

1.1儀器

UV-1800紫外-可見光分光光度儀（日本島津公司），TYDE AEU-210型萬分之一克電子天平（德國賽多利斯），打粉機（天津市泰斯特儀器有限公司）。

1.2材料

沒食子酸（中國食品藥品檢定研究院，批號：110753-201313）；福林酚（上海荔達生物科技有限公司）；碳酸鈉、乙醇（分析純，國藥集團化學試劑有限公司）；蒸餾水。

2　方法與結果

2.1對照品溶液的制備

精密稱取沒食子酸對照品18.18 mg，先用少量乙醇溶解，再用蒸餾水定容至100ml，配制成0.1818mg /mL沒食子酸對照品溶液。

2.2供試品溶液的制備

馬尾松松球干燥后粉碎，過60目篩，稱取粉末1.0g，精密稱定，置于50ml具塞錐形瓶中，加70%乙醇25ml，稱定重量，超聲30 min后，放冷，再稱定重量，補足減失的重量，搖勻，過濾，將濾液放置蒸發皿中，水浴揮干濾液，蒸餾水溶解并定容至25ml容量瓶，即為供試品溶液。

2.3最大吸收波長的確定

精密量取對照品溶液和供試品溶液各1.0ml，置10 ml容量瓶中，分別加入經10倍稀釋的福林酚溶液2.5ml及7.5%碳酸鈉溶液2ml，搖勻，定容，放置30min后，同法對空白對照溶液顯色，用紫外-可見分光光度儀在200～800nm全波長掃描，實驗結果顯示，對照品與供試品均在760nm處有最大吸收，故選取760nm為測定波長。

2.4標準曲線的繪制

精密量取對照品溶液1，2，3，4，5，6ml分別置于10ml容量瓶中，加蒸餾水至刻度，搖勻；精密量取各溶液1.0ml置于10ml容量瓶，按2.3項下方法進行測定，以濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標，回歸方程為y=0.0835x-0.0004，r=0.9996，沒食子酸對照品1.818～10.908μg /ml與吸光度呈良好的線性關系。

2.5精密度試驗

精密量取供試品溶液1.0ml，按照2. 3項下的方法測定吸光度，連續測定6次，吸光度值RSD為0.55%（n=6）。結果表明，儀器的精密度良好。

2.6穩定性試驗

精密量取供試品溶液1.0ml，按照2.3項下的方法，分別在0min、30min、60min、90min、120min、150min測定吸光度，測得吸光度RSD為0.21%（n=6），表明在150min內顯色基本穩定。

2.7重復性試驗

按照供試品制備方法平行制備6份樣品，每份1.0ml，按照2.3項下的方法測定，總多酚含量RSD為0.53%（n=6）。結果表明，該方法重復性良好。

2.8加樣回收率試驗

分別取已知含量的馬尾松松球6份，每份約0.5g，精密稱定，分別精密加入一定量的沒食子酸對照品溶液，按照2.3項下的方法測定吸光度，計算平均回收率為99.95%，RSD為0.69%（n=6）。結果見表1。

表1　馬尾松松球總多酚的加樣回收率試驗結果

2.9樣品測定

分別測定3批樣品，按2.3項下的方法進行測定，計算馬尾松松松球總多酚的含量，平均含量為16.24 mg/g，RSD為0.31%（n=3）。結果見表2。

表2　馬尾松松球總多酚的含量測定結果

3　討論

目前植物多酚的測定方法有多種，如酒石酸亞鐵比色法、高錳酸鉀法、原子吸收法、福林酚比色法、紫外-分光光度法等［5-10］。馬尾松松球總多酚采用乙醇提取，福林酚-碳酸鈉反應顯色，紫外-分光光度法測定。該方法操作簡便，穩定性好，重復性好，精密度高，準確可靠

在本實驗供試品溶液制備過程中，筆者考察了超聲、回流和浸漬三種提取方式，在樣品分別超聲、回流、浸漬提取30 min后，結果浸漬提取的含量最低，超聲和回流提取的含量較浸漬提取的高些但相差不大，考慮到超聲提取方法操作簡單，故選擇超聲提取方法。筆者還考察了不同的乙醇濃度（30%、50%、70%、90%）對總多酚提取效果的影響，結果顯示使用70%乙醇提取總多酚含量較高。本實驗以乙醇作為提取溶劑，毒性較低，對實驗人員人身安全影響不大，而且價位相對來說較為便宜，更能節省費用，適宜于馬尾松松球總多酚的含量測定。

綜上，本實驗所建立的方法可作為馬尾松松球總多酚含量測定依據，為更有效的開發利用馬尾松松球資源和建立質量評價方法提供了基礎資料。但對于馬尾松松球總多酚各種成分的分離、純化與測定及藥理作用等方面的研究更待筆者進一步探索。

［1］ 姚振生.藥用植物學［M］.北京：中國中醫藥出版社，2003：216.

［2］ 《中華本草》編委會.中華本草（第二冊）［M］.上海：上海科技出版社，1999：312.

［3］ 呂松林，黃語夢，梁潔，等.松球的藥用研究進展［J］.中國醫藥指南，2014，12（33）：67-68.

［4］ Scalbert A，Manach C，Morand C，et al.Dietary polyphe-nols and the prevention of diseases［J］.Crit Rev Food SciNutr，2005，45（4）：287.

［5］ 王麗珠，吳梭，姚元根，等.酒石酸亞鐵分光光度法測定茶多酚［J］.光譜實驗室，1997，14（3）：52-54.

［6］ 王文杰.高錳酸鉀滴定法測定茶多酚有關用劑的特性研究［J］.福建茶葉，2007（1）：15-17.

［7］ 郎惠云，廖曉玲，董發昕，等.間接原子吸收法測定茶葉中茶多酚的含量［J］.西北大學學報，2003，33（6）：683-685.

［8］ 楊雁芳，艾鐵民.紫外分光光度法測定松果菊提取物中多酚［J］.中草藥，2005，36（11）：1649-1650.

［9］ 鄧剛，母健菲，劉玉琪，等.福林酚比色法和紫外分光光度法測定蟲茶中總多酚含量的比較研究［J］.重慶第二師范學院學報，2015，28（5）：167-173.

［10］ 李蘭茹，馬慧萍.喜馬拉雅紫茉莉總多酚含量測定的方法學研究［J］.實用藥物與臨床，2015，18（9）：1078-1081.

Determination of total polyphenol from pinecone of Pinus massoniana Lamb

To establish the determination of total polyphenol in pinecone of Pinus massoniana Lamb. Gallic acid was taken as a

ubstance； the content of total polyphenol was determined by UV-vis spectrophotometry. A linear correlation between density and absorption of gallic acid solution was noted at the concentration of 1.818～10.908 μg /ml （ r = 0. 9996） ，the average content of total polyphenol was 16.24mg/g， RSD =0. 31%. The method was stable and reliable， simple； it could be used for determination of total polyphenol in pinecone of Pinus massoniana Lamb.

Pinecone of Pinus massoniana Lamb；total polyphenol；UV-vis spectrophotometry

R93

A

1008-1151（2016）03-0035-02

2016-02-13

廣西高校科學技術研究項目（2013YB120），廣西研究生教育創新計劃資助項目（JGY2012032），廣西壯瑤藥重點實驗室（桂科基字［2014］32號），壯瑤藥協同創新中心（桂教科研［2013］20號），國家中醫藥管理局科研三級實驗室中（壯）藥化學與質量分析實驗室，廣西高校中藥提取純化與質量分析重點實驗室，廣西高等學校高水平創新團隊及卓越學者計劃資助。

梁潔（1979-），女，廣西中醫藥大學藥學院教授，博士，碩士研究生導師，從事中藥藥效物質基礎與質