正交試驗(yàn)法優(yōu)選復(fù)方小鉆凝膠的提取工藝

李數(shù)霞　黃　敏　楊美春　方　剛

（1.廣西中醫(yī)藥大學(xué)，廣西 南寧 530001；2.廣西中醫(yī)藥大學(xué)附屬瑞康醫(yī)院，廣西 南寧 530011）

正交試驗(yàn)法優(yōu)選復(fù)方小鉆凝膠的提取工藝

李數(shù)霞1黃敏2楊美春1方剛1

（1.廣西中醫(yī)藥大學(xué)，廣西 南寧 530001；2.廣西中醫(yī)藥大學(xué)附屬瑞康醫(yī)院，廣西 南寧 530011）

目的：利用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)研究復(fù)方小鉆凝膠的提取工藝條件。方法：以加水量、提取次數(shù)、提取時(shí)間為考察因素，以乙醇浸出物為評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用L9（34）正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，優(yōu)選最佳提取工藝條件。結(jié)果：最佳提取工藝為用8倍量水提取二次，每次1.5h。結(jié)論：優(yōu)選的工藝穩(wěn)定可行，乙醇浸出物總量較高。

復(fù)方小鉆凝膠；乙醇浸出物；正交試驗(yàn)

復(fù)方小鉆凝膠由小鉆、走血風(fēng)、九層風(fēng)、救必應(yīng)、一匹綢、大透地龍等六味廣西特色民族藥組成，在廣西，壯藥主要分布在貴港、防城、蒼梧、上思、武鳴等壯族地區(qū)。方中壯藥是壯醫(yī)臨床常用解毒藥，具有調(diào)水道、氣道、除濕毒等功效，用于咳嗽、腎炎消腫、筋絡(luò)不舒［1，2］。處方來(lái)源于臨床應(yīng)用驗(yàn)方，主要用于治療慢性盆腔炎、盆腔炎性疾病后遺癥、原發(fā)性痛經(jīng)等婦科痛癥，具有活血化瘀、祛濕止痛、穿經(jīng)走脈的功效，臨床應(yīng)用為灌腸給藥，因此采用水提工藝。本試驗(yàn)采用正交設(shè)計(jì)法，以乙醇浸出物為考察指標(biāo)，對(duì)復(fù)方小鉆凝膠的提取工藝進(jìn)行優(yōu)選。

1　試劑、材料與儀器

乙醇、水、電子天平、多功能提取罐。

2　 方法與結(jié)果

2.1提取條件的確定

影響本方提取效果的因素有：加水量（A）、提取次數(shù)（B）、提取時(shí)間（C），每個(gè)因素選3個(gè)水平，A選取6、8、10倍量，B選1、2、3次，C選1、1.5、2h，采用L9（34）正交表進(jìn)行研究，因素水平表見(jiàn)表1。

表1　提取條件因素水平表

2.2考察指標(biāo)的確定

本方中藥材均收載于《廣西壯族自治區(qū)壯藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》中，參考該標(biāo)準(zhǔn)，各藥味均有乙醇浸出物檢查，故選擇乙醇浸出物為考察指標(biāo)。

2.3正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果分析

各參數(shù)按表2設(shè)置條件，共9個(gè)試驗(yàn)。每個(gè)試驗(yàn)藥材量為1/5處方量（約1250g），藥材加水量、提取次數(shù)、提取時(shí)間等參數(shù)按表2條件，提取液濾過(guò)，濾液合并，濃縮成浸膏。按《中華人民共和國(guó)藥典》2010版一部附錄X A浸出物測(cè)定法——醇溶性浸出物測(cè)定法，計(jì)算浸膏中醇溶性浸出物的總量，結(jié)果見(jiàn)表2，方差分析結(jié)果見(jiàn)表3。

表2　提取條件正交試驗(yàn)表（1/5處方）

表3　方差分析表（乙醇浸出物）

直觀分析表明，B提取次數(shù)為主要影響因素，A加水量為次要因素，C提取時(shí)間為最次要因素；以乙醇浸出物為評(píng)價(jià)指標(biāo)的最優(yōu)條件為A2B3C3，B2與B3、C2與C3相差較小，小于誤差，綜合考慮生產(chǎn)成本，故本次正交試驗(yàn)初步選定提取條件為A2B2C2，即：用8倍量水提取二次，每次1.5h。

2.4驗(yàn)證試驗(yàn)

根據(jù)正交試驗(yàn)結(jié)果選定的條件進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)，每個(gè)試驗(yàn)投料量為1/5處方，以乙醇浸出物含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，結(jié)果分別為31.8g、33.0g、32.1g，與正交試驗(yàn)5、6結(jié)果基本一致，表明工藝穩(wěn)定，選擇結(jié)果可信。

2.5純化工藝及結(jié)果2.5.1 純化方法

取1個(gè)處方量藥材，加8倍量水煎煮2次，每次1.5h，提取液200目濾過(guò)，濾液均分成4份（每份相當(dāng)于0.25個(gè)處方），進(jìn)行下列實(shí)驗(yàn)：

（1）提取液濃縮，得浸膏，測(cè)定含固量及乙醇浸出物量。

（2）提取液濃縮至相對(duì)密度1.20（60℃），放冷，加入乙醇使含醇量達(dá)60%，放置24h，濾過(guò)，濾液濃縮，得浸膏，測(cè)定含固量及乙醇浸出物量。

（3）提取液濃縮至相對(duì)密度1.20（60℃），放冷，加入乙醇使含醇量達(dá)70%，放置24h，濾過(guò)，濾液濃縮，得浸膏，測(cè)定含固量及乙醇浸出物量。

（4）提取液濾液濃縮至相對(duì)密度1.20（60℃），放冷，加入乙醇使含醇量達(dá)80%，放置24h，濾過(guò)，濾液濃縮，得浸膏，測(cè)定含固量及乙醇浸出物量。

乙醇浸出物量測(cè)定：按《中華人民共和國(guó)藥典》［3］2010版一部附錄X A浸出物測(cè)定法——醇溶性浸出物測(cè)定法測(cè)定，取浸膏約2～4g，精密稱定，置100ml的錐形瓶中，精密加入乙醇50ml，密塞，稱定重量，靜置1h后，連接回流冷凝管，加熱至沸騰，并保持微沸1h。放冷后，取下錐形瓶，密塞，再稱定重量，用乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用干燥濾器濾過(guò)。精密量取濾液25ml，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3h，置干燥器中冷卻30min，迅速精密稱定重量。計(jì)算供試品中醇溶性浸出物的含量（%）。

考察指標(biāo)：以干膏收率及乙醇浸出物為指標(biāo)，結(jié)果見(jiàn)表4。

表4　純化方法考察結(jié)果表（每組1/4處方，每組生藥投料量1562.5）

2.5.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，醇沉前后浸膏中的乙醇浸出物量和紫丁香苷量差別不大，醇沉后的浸膏更適合制成液體、半固體制劑，70%乙醇醇沉工藝和80%乙醇醇沉工藝有利于干膏純化，綜合考慮臨床適用性、提取物料成本，選擇70%乙醇醇沉工藝。

3　 討論

本方中藥材載于《廣西壯族自治區(qū)壯藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》、《中國(guó)現(xiàn)代瑤藥》中，參考該標(biāo)準(zhǔn)，各藥味均有乙醇浸出物檢查，故選擇乙醇浸出物為考察指標(biāo)。

本方在臨床為灌腸給藥，適宜采用水提工藝進(jìn)行提取。本研究采用正交試驗(yàn)優(yōu)選出復(fù)方小鉆凝膠的最佳提取工藝，浸膏中乙醇浸出物含量較高。根據(jù)正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果8倍量水提取2次，每次2h為最佳工藝，因提取時(shí)間為最次要影響因素，無(wú)顯著性差異，結(jié)合實(shí)際生產(chǎn)情況，故選定提取工藝為8倍量水提取2次，每次1.5h。通過(guò)驗(yàn)證試驗(yàn)，可知該工藝穩(wěn)定、可行；為制備本方劑型提供切實(shí)可行的提取工藝。

在中藥制劑生產(chǎn)中，常用的提取純化方法之一是水提醇沉法。醇沉?xí)r乙醇濃度對(duì)制劑療效、制劑成型等有著重要影響，同時(shí)也影響劑型的選擇，服用劑量及產(chǎn)品穩(wěn)定性等，因而，醇沉?xí)r合理選擇乙醇濃度對(duì)本方起著重要作用。有研究表明，水提液濃縮醇沉后，能夠明顯降低服用劑量［4］。水提醇沉法復(fù)方小鉆凝膠采用水提工藝，水提物中含較多大分子樹(shù)膠、粘液質(zhì)、蛋白質(zhì)、多糖類等成份，這些成份的生理活性與本品功能主治不一致，可視為雜質(zhì)存在，為不影響干膏收率，采用醇沉方法去除雜質(zhì)。

凝膠屬于半固體制劑，在本實(shí)驗(yàn)中采用水提醇沉的方法有效的去除了大部分雜質(zhì)成分，得到的浸膏更適合制成液體、半固體制劑。

70%、80%濃度的乙醇醇沉后與60%濃度乙醇醇沉后乙醇浸出物總量相差不大，但干膏收率更低，即高濃度60%乙醇醇沉后仍含有較多雜質(zhì)，而70%和80%乙醇醇沉明顯減少了雜質(zhì)的含量；綜合考慮臨床適用性、提取物料成本，選擇70%乙醇醇沉工藝。純化后的工藝更有利于凝膠劑型的制備。

［1］ 廣西壯族自治區(qū)食品藥品管理局.廣西壯族自治區(qū)壯藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)［M］.南寧：廣西科學(xué)技術(shù)出版社，2011.

［2］ 廣西壯族自治區(qū)中醫(yī)藥研究所.廣西藥用植物名錄［M］.南寧：廣西人民出版社，1986：458.

［3］ 國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典［M］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015.

［4］ 何雁，辛洪亮，黃愷.等水提醇沉法中醇沉濃度對(duì)板藍(lán)根泡騰片制備過(guò)程的影響［J］.中國(guó)中藥雜志，2010，35（3）：288-291.

Optimize the extraction process for Compound Xiaozhun by orthogonal design

Objective： To optimize the extraction process for Compound Xiaozhun by orthogonal design. Method： With the amount of water， extraction time， and extraction times as factors， with the ethanol soluble extraction as indexes， conditions for extraction process were optimized by L9（34） orthogonal test. Results： The optimum extraction process conditions were as follows： 8 volumes of water， extracting for two times with 1.5 h for once. Conclusions： The optimized extraction technology is stable and feasible.

Compound Xiaozhun； ethanol soluble extraction； orthogonal design

R282

A

1008-1151（2016）03-0039-02

2016-02-10

國(guó)家科技部“十二五”國(guó)家科技支撐計(jì)劃課題（2013BAI11B06）；廣西科學(xué)研究與技術(shù)開(kāi)發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目（桂科攻1298003-6-9）；廣西衛(wèi)生廳中醫(yī)藥科技專項(xiàng)課題（GZYZ12-03）。

李數(shù)霞，女，廣西中醫(yī)藥大學(xué)醫(yī)學(xué)碩士，研究方向?yàn)橹兴庂|(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。