體外受精-胚胎移植后妊娠早期合并宮腔積血時(shí)氧化應(yīng)激水平的分析

王 婭，魏兆蓮，曹云霞

體外受精-胚胎移植后妊娠早期合并宮腔積血時(shí)氧化應(yīng)激水平的分析

王 婭，魏兆蓮，曹云霞

目的 探討體外受精-胚胎移植（IVF-ET）后妊娠早期合并宮腔積血（IUH）的女性外周血氧化應(yīng)激水平與正常妊娠時(shí)有無差異。方法 選取經(jīng)IVF-ET助孕獲宮內(nèi)妊娠合并子宮腔積血者121例為宮腔積血組（IUH組），匹配孕囊數(shù)及周期類型，選取同期經(jīng)IVF-ET助孕獲宮內(nèi)妊娠且無子宮腔積血者121例為對(duì)照組（N-IUH組）。采用ELISA法檢測受試者外周血清中活性氧（ROS）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GPx）及丙二醛（MDA）水平。結(jié)果

氧化應(yīng)激；活性氧；體外受精-胚胎移植；宮腔積血

子宮腔積血（intrauterine hematomas，IUH）指超聲檢查可見絨毛膜和（或）胎盤［包括絨毛膜下和（或）胎盤后］與子宮蛻膜之間出現(xiàn)新月形的低回聲區(qū)［1］。文獻(xiàn)［1-2］報(bào)道，宮腔積血在自然妊娠中發(fā)生率約為0.46%～39.50%，且經(jīng)體外受精-胚胎移植（in vitro fertilization and embryo transfer，IVF-ET）妊娠者妊娠早期出現(xiàn)宮腔積血的概率顯著高于自然妊娠者（22.4%vs 11.0%，P=0.035）［3］。自然妊娠孕早期出現(xiàn)的宮腔積血者妊娠期高血壓、子癇前期、胎盤早剝、胎膜早破、早產(chǎn)以及新生兒窒息等妊娠期、分娩期并發(fā)癥的發(fā)生率增加［2］。前期研究［4］顯示IVF妊娠婦女孕早期出現(xiàn)的IUH與妊娠期高血壓、子癇前期、早產(chǎn)等不良妊娠結(jié)局呈正相關(guān)性，因此認(rèn)為IUH可以作為一個(gè)不良妊娠結(jié)局的早期信號(hào)，警惕高位妊娠的發(fā)生，有助于減少妊娠并發(fā)癥的發(fā)生。氧化應(yīng)激（oxidative stress，OS）是指機(jī)體在遭受各種有害刺激時(shí)，體內(nèi)高活性分子如活性氧自由基（reactive oxygen species，ROS）等產(chǎn)生過多，氧化系統(tǒng)和抗氧化系統(tǒng)失衡，繼而導(dǎo)致細(xì)胞功能失調(diào)及組織損傷［5］。現(xiàn)已明確自由基損傷與多種病理生理現(xiàn)象密切相關(guān)，如衰老、腫瘤、炎癥、心腦缺血、動(dòng)脈粥樣硬化、帕金森病等。文獻(xiàn)［5］報(bào)道，氧化應(yīng)激與自然流產(chǎn)、早產(chǎn)、先兆子癇及胎兒宮內(nèi)生長受限等的發(fā)生均有關(guān)聯(lián)。該研究通過了解IUH患者氧化應(yīng)激水平，旨在探索IUH的發(fā)生機(jī)制，以期對(duì)預(yù)防先兆流產(chǎn)、減少產(chǎn)科并發(fā)癥及降低新生兒死亡率起到積極作用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 病例資料 選擇2014年7月～2015年7月在安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院生殖中心因輸卵管因素（排除明顯輸卵管積水者）行IVF-ET治療，新鮮或者解凍第5天胚胎后35 d經(jīng)陰道B超檢查證實(shí)為宮內(nèi)早孕合并IUH的患者納入IUH組。根據(jù)孕囊數(shù)與周期類型，匹配選取同期經(jīng)IVF獲宮內(nèi)妊娠且無IUH發(fā)生的患者納入對(duì)照組（N-IUH組）。根據(jù)孕囊數(shù)，將IUH組及N-IUH組分別分為單胎組及雙胎組。受試者孕前均未合并原發(fā)性高血壓、糖尿病、甲狀腺、心肝腎等臟器功能異常，無自身免疫功能異常、復(fù)發(fā)性流產(chǎn)，無煙酒等不良嗜好，且排除單卵多胎、多胎自減及人工減胎術(shù)后患者。受試者臨床基本資料根據(jù)臨床病歷記載及電話隨訪獲得。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有受試者已簽署知情同意書。

1.1.2 試劑 人ROS、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（glutathione peroxidase，GPx）及丙二醛（malondialdehyde，MDA）ELISA試劑盒購自上海源葉生物技術(shù)有限公司。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集 采集受試孕婦清晨空腹外周靜脈血4 ml，分離血清后置-80℃下保存待檢。

1.2.2 ELISA法 檢測孕婦ROS、SOD、GPx、MDA水平，實(shí)驗(yàn)步驟嚴(yán)格按著試劑盒說明書進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 16.0軟件進(jìn)行分析。計(jì)量資料用±s表示，計(jì)數(shù)資料用例數(shù)和百分?jǐn)?shù)描述。兩組間計(jì)量資料比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，兩組間計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 單胎IUH組與單胎N-IUH組臨床基本資料的比較 兩組中各包含新鮮周期移植（IVF-ET）者15例，自然周期解凍移植（NC-FET）者33例，人工周期解凍移植（AC-FET）者20例。受試者年齡、BMI、不孕年限、累計(jì)種植失敗次數(shù)、移植日內(nèi)膜厚度及胎齡間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。兩組既往孕產(chǎn)史（流產(chǎn)史、先兆子癇、胎盤早剝、胎兒宮內(nèi)生長受限及早產(chǎn)）間的發(fā)生率差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表1。

表1 單胎IUH組與單胎N-IUH組臨床基本資料的比較

2.2 雙胎IUH組與雙胎N-IUH組臨床基本資料的比較 兩組中各包含新鮮周期移植者（IVF-ET）10例，自然周期解凍移植者（NC-FET）25例，人工周期解凍移植者（AC-FET）18例。兩組受試者年齡、BMI、不孕年限、累計(jì)種植失敗次數(shù)、內(nèi)膜厚度及胎齡間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。兩組既往孕產(chǎn)史（流產(chǎn)史、先兆子癇、胎盤早剝、胎兒宮內(nèi)生長受限及早產(chǎn)）間的發(fā)生率差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表2。

表2 雙胎IUH組與雙胎N-IUH組臨床基本資料的比較

2.3 IUH組與N-IUH組外周血清ROS、SOD、GPx、MDA水平的比較 單胎IUH組中ROS水平高于單胎N-IUH組，單胎IUH組MDA水平高于單胎N-IUH組，且差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。SOD及GPx水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表3。雙胎IUH組ROS高于雙胎N-IUH組，雙胎IUH組MDA水平高于雙胎N-IUH組，且差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。雙胎IUH組中SOD水平低于雙胎N-IUH組，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。兩組GPx水平間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表3。

表3 單胎組與雙胎組中外周血清ROS、SOD、GPx、MDA水平的比較（±s）

表3 單胎組與雙胎組中外周血清ROS、SOD、GPx、MDA水平的比較（±s）

項(xiàng)目IUH組N-IUH組t值P值單胎ROS（IU/ml）347.07±125.28 312.41±117.182.013＜0.05 SOD（U/ml）118.04±45.50111.89±58.400.854＞0.05 GPx（U/g Hb）22.69±9.9322.77±13.300.713＞0.05 MDA（nmol/ml）5.86±3.644.46±2.652.425＜0.05雙胎ROS（IU/ml）379.55±169.12 311.76±120.362.133＜0.05 SOD（U/ml）121.23±90.10124.51±41.420.578＞0.05 GPx（U/g Hb）28.63±10.8026.06±14.550.847＞0.05 MDA（nmol/ml）7.42±2.524.58±3.422.596＜0.05

3 討論

ROS是分子氧轉(zhuǎn)化成水的過程中產(chǎn)生的中間代謝產(chǎn)物的總稱。有機(jī)體內(nèi)，ROS的清除主要依靠內(nèi)源性自由基清除系統(tǒng)，包括酶類抗氧化劑，如SOD、GPx、過氧化氫酶（CAT）等和非酶類抗氧化劑，如維生素C、維生素E、還原型谷胱甘肽等［5］。當(dāng)ROS的產(chǎn)生超過機(jī)體的清除能力，OS隨即發(fā)生。ROS損傷機(jī)制主要涉及對(duì)脂質(zhì)、DNA、蛋白質(zhì)及多糖分子等生物大分子的氧化破壞。MDA作為脂質(zhì)過氧化的終產(chǎn)物，是了解脂質(zhì)過氧化程度最常用的指標(biāo)，其水平可間接反應(yīng)生物膜系統(tǒng)受損程度。

正常妊娠中，囊胚著床后早期絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞侵入子宮螺旋動(dòng)脈管腔，閉合螺旋動(dòng)脈，限制母體血液進(jìn)入胎盤，使分化細(xì)胞免受大劑量活性氧損傷。胎盤形成后，母體與胎盤間血液循環(huán)完全建立，胎盤內(nèi)氧氣濃度迅速增加，線粒體呼吸作用增強(qiáng)，胚胎及胚外細(xì)胞暴露于ROS中［6］，胎盤發(fā)生OS，隨著胎盤細(xì)胞對(duì)氧化環(huán)境的適應(yīng)，氧化水平回至基線狀態(tài)［7］。

多項(xiàng)研究提示：OS與流產(chǎn)之間存在相關(guān)性。有學(xué)者發(fā)現(xiàn)：自然流產(chǎn)患者體內(nèi)母胎循環(huán)的建立提早發(fā)生于孕8～9周［8］，而非正常的10～12周［7］，胎盤細(xì)胞過早暴露于高氧化環(huán)境，合體滋養(yǎng)細(xì)胞發(fā)生退行性改變，導(dǎo)致妊娠丟失。El-Far et al［9］也發(fā)現(xiàn)自然流產(chǎn)患者體內(nèi)GPx、SOD水平顯著降低，MDA水平顯著升高。此外，多種妊娠并發(fā)癥的發(fā)生與OS密切相關(guān)。研究［10］顯示：先兆子癇患者中細(xì)胞內(nèi)HO-1、HO-2、SOD、GPx和CAT mRNA表達(dá)水平的降低。Krishna Mohan et al［11］的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：先兆子癇患者體內(nèi)谷胱甘肽及抗氧化維生素濃度的降低及脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物的增加，支持了OS是先兆子癇的致病因素這一假說。Plessinger et al［12］的研究結(jié)果顯示：暴露于次氯酸的羊膜上皮細(xì)胞和Ⅰ型膠原受損，據(jù)此認(rèn)為活性氧可以損傷羊膜上皮細(xì)胞和Ⅰ型膠原，胎膜膠原的廣泛降解最終導(dǎo)致胎膜早破的發(fā)生。

本研究中納入受試者均為移植第5天胚胎后35 d（約孕8周），生理狀態(tài)下，此時(shí)螺旋小動(dòng)脈重鑄尚未開始，胚胎處于低氧化環(huán)境。本研究結(jié)果顯示：IUH組ROS水平高于N-IUH組（P＜0.05）；IUH組MDA水平顯著高于N-IUH組（P＜0.05）。ROS作為OS反應(yīng)底物，MDA作為脂質(zhì)過氧化的終產(chǎn)物，兩者濃度的顯著升高說明IUH組患者存在更高的氧化狀態(tài)。但兩組間SOD及GPx水平均無顯著差異，推測其可能原因是SOD及GPx作為人體內(nèi)源性抗氧化系統(tǒng)的重要組成部分，兩者均定位于組織細(xì)胞內(nèi)，只有當(dāng)大量組織細(xì)胞嚴(yán)重受損時(shí)才會(huì)出現(xiàn)外周血中酶濃度的顯著變化。

綜上所述，本研究通過檢測行IVF后早孕合并IUH患者外周血中ROS、SOD、GPx及MDA的水平，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可推論出IVF后妊娠早期合并IUH的女性較無IUH者處于更高的氧化狀態(tài)。預(yù)防性適度的抗氧化治療，或?qū)⒂兄谔岣叽祟惢颊叩漠a(chǎn)科安全和新生兒質(zhì)量。

［1］ Johns J，Hyett J，Jauniaux E.Obstetric outcome after threatened miscarriage with and without a hematoma on ultrasound［J］.Obstet Gynecol，2003，102（3）：483-7.

［2］ Seki H，Kuromaki K，Takeda S，et al.Persistent subchorionic hematoma with clinical symptoms until delivery［J］.Int J Gynecol Obstet，1998，63（2）：123-8.

［3］ Asato K，Mekaru K，Heshiki C，et al.Subchorionic hematoma occurs more frequently in in vitro fertilization pregnancy［J］.Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol，2014，181：41-4.

［4］ Xiang L，Wei Z，Wu J，et al.Clinical significance of first-trimester intrauterine heamatomas detected in pregnancies achieved by IVF-embryo transfer［J］.Reprod Biomed Online，2014，29（4）：445-51.

［5］ Agarwal A，Aponte-Mellado A，Premkumar B J，et al.The effects of oxidative stress on female reproduction：a review［J］.Reprod Biol Endocrinol，2012，10：49.

［6］ Alcolea M P，Colom B，Llado I，et al.Mitochondrial differentiation and oxidative phosphorylation system capacity in rat embryo during placentation period［J］.Reproduction，2007，134（1）：147-54.

［7］ Jauniaux E，Watson A L，Hempstock J，et al.Onset of maternal arterial blood flow and placental oxidative stress.A possible factor in human early pregnancy failure［J］.Am J Pathol，2000，157（6）：2111-22.

［8］ Jauniaux E，Gulbis B，Burton G J.Physiological implications of the materno-fetal oxygen gradient in human early pregnancy［J］. Reprod Biomed Online，2003，7（2）：250-3.

［9］ El-Far M，El-Sayed I H，El-Motwally Ael G，et al.Tumor necrosis factor-alpha and oxidant status are essential participating factors in unexplained recurrent spontaneous abortions［J］.Clin Chem Lab Med，2007，45（7）：879-83.

［10］Aris A，Benali S，Ouellet A，et al.Potential biomarkers of preeclampsia：inverse correlation between hydrogen peroxide and nitric oxide early in maternal circulation and at term in placenta of women with preeclampsia［J］.Placenta，2009，30（4）：342-7.

［11］Krishna Mohan S，Venkataramana G.Status of lipid peroxidation，glutathione，ascorbic acid，vitamin E and antioxidant enzymes in patients with pregnancy-induced hypertension［J］.Indian J Physiol，2007，51（3）：284-8.

［12］Plessinger M A，Woods J R Jr，Miller R K.Pretreatment of human amnion-chorion with vitamin C and E prevents hypochlorions acidinduced damage［J］.Am J Obstet Gynecol，2000，183（4）：979 -85.

Detailed analysis of oxidative stress level in IVF-pregnancies with intrauterine hematoma in the first trimester

Wang Ya，Wei Zhaolian，Cao Yunxia
（Reproductive Medicine Center，The First Affiliated Hospital of Anhui Medical University，Hefei 230022）

Objective To investigate oxidative stress level in the in vitro fertilization（IVF）-pregnancies diagnosed with intrauterine hematoma（IUH）.Methods A matched case-control study was performed on 242 women including 121 women with intrauterine hematomas and 121 controls without intrauterine hematomas.ELISA was used to measure the marernal serum reactive oxygen species（ROS），superoxide dismutase（SOD），glutathione peroxidase（GPx）and malondialdehyde（MDA）levels in cases and controls.Results There was no difference in maternal clinical characteristics between the cases and controls.Elevated maternal serum ROS level was found to be significantly much higher in pregnancies with IUH，regardless of singleton or twin pregnancies.And so was MDA.But no significant differences were found in the SOD and GPx levels between the cases and controls.Conclusion IVF-pregnancies with intrauterine hematomas during the first trimester show changes in oxidative stress level，which suggests a possible association with intrauterine hematoma and oxidative stress.

oxidative stress；reactive oxygen species；in vitro fertilization and embryo transfer；intrauterine hematoma

R 345.41；R 321-33；R 714.2；R 715

A

1000-1492（2016）08-1164-04

時(shí)間：2016-6-22 14：44：58

http：//www.cnki.net/kcms/detail/34.1065.R.20160622.1444.040.html

2016-05-04 接收

安徽省高校省級(jí)自然科學(xué)研究項(xiàng)目（編號(hào)：KJ2012A146）作者單位：安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院生殖中心，合肥 230022

王 婭，女，碩士研究生；

魏兆蓮，女，教授，主任醫(yī)師，博士生導(dǎo)師，責(zé)任作者，E-mail：weizhaolian_1@126.com

IUH組與N-IUH組各臨床特征間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。IUH組ROS水平高于N-IUH組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。IUH組MDA水平高于N-IUH組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。IUH組與IUH組SOD及GPx水平的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論 經(jīng)IVF-ET后宮內(nèi)早孕合并IUH的女性體內(nèi)ROS和MDA水平高于N-IUH時(shí)，提示體內(nèi)存在較高的氧化狀態(tài)，IUH與氧化應(yīng)激間可能存在相關(guān)性。