朱唇化學(xué)成分預(yù)實驗及止血活性研究

羅澤萍潘立衛(wèi)

（1.河池學(xué)院化學(xué)與生物工程學(xué)院，廣西 宜州 546300；

2.廣西高校微生物及植物資源開發(fā)利用重點實驗室，廣西 宜州 546300）

朱唇化學(xué)成分預(yù)實驗及止血活性研究

羅澤萍1,2潘立衛(wèi)1,2

（1.河池學(xué)院化學(xué)與生物工程學(xué)院，廣西 宜州 546300；

2.廣西高校微生物及植物資源開發(fā)利用重點實驗室，廣西 宜州 546300）

目的：初步探討朱唇可能的化學(xué)成分及研究其止血活性。方法：采用系統(tǒng)預(yù)實驗法對朱唇的提取物可能含有的化學(xué)成分進行初步研究。并通過體外促凝血實驗，研究朱唇的止血活性。結(jié)果：朱唇中可能含有多糖、苷類、黃酮等豐富化學(xué)成分。另外，朱唇提取物具有顯著的止血作用。結(jié)論：初步鑒定朱唇含有豐富的活性成分，為深度研究和開發(fā)朱唇的植物資源提供實驗基礎(chǔ)。朱唇提取物具有較好止血活性，為尋找新止血藥物提供基礎(chǔ)。

朱唇；預(yù)實驗；化學(xué)成分；止血活性

朱唇（Salvia coccinea L.）是唇形科鼠尾草屬植物，原產(chǎn)于美洲的一年生或多年生草本植物，該品種通常作為觀賞植物，在我國多地有栽培，如：廣東、廣西、陜西、浙江、上海、江西、安徽等。朱唇全草均有藥用價值，具有涼血、止血，清熱利濕等功效，可以用于治療婦女血崩，高熱及腹疼不適［1］等。現(xiàn)代藥理研究表明朱唇水溶性部位可明顯提高小鼠耐缺氧能力［2］。目前國內(nèi)外對朱唇的研究主要集中在植物資源、組織培養(yǎng)和園林景觀等［3-6］；而對其化學(xué)成分的研究甚少。本實驗首次對朱唇的化學(xué)成分進行初步研究。

出血是諸多疾病中常見并發(fā)癥之一，出血過多甚至?xí)?dǎo)致休克，存在生命危險，因此及時的進行止血顯得尤為重要。目前，止血藥的需求和使用日益劇增，使得市場上對止血新藥的研發(fā)更加迫切，尋找更為廉價、安全可靠的止血藥，是目前的研究熱點。為研究朱唇的止血作用，本實驗通過家兔體外促凝血實驗研究朱唇的止血活性。旨在深入研究和開發(fā)新的止血藥物提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料儀器

朱唇采自廣西都安縣保安鄉(xiāng)，經(jīng)河池學(xué)院鄧晰朝副教授鑒定為唇形科鼠尾草屬朱唇（Salvia coccinea L.）；家兔由河池學(xué)院藥理實驗室提供；D2KW-4電子恒溫水浴鍋（北京中興偉業(yè)儀器有限公司）、WKH-1.7-A烘箱（青州市精誠醫(yī)藥裝備制造有限公司）、JA2003B電子天平（上海越平科技儀器有限公司）、WFH-203三用紫外分析儀（上海精科實業(yè)有限公司）、WKF-180萬能粉碎機（青州市京城醫(yī)藥裝備有限公司）、云南白藥標(biāo)準(zhǔn)品（云南白藥股份有限公司）、TDL-5A離心機（上海安寧科學(xué)儀器廠）。

1.2 實驗方法

朱唇藥材粗粉制備后采用試管預(yù)試法進行實驗。根據(jù)供試液可能含有的化學(xué)成分類型的理化性質(zhì)，選擇其特有的化學(xué)反應(yīng)如顏色反應(yīng)、沉淀反應(yīng)等做定性試驗。

1.2.1 樣品制備

取一定量的朱唇，陰干，粉碎成粗粉即為實驗品粗粉。

1.2.2 水供試液制備

取朱唇藥材粗粉10g，各兩份，分別加水100ml，冷浸12小時。取其中一份濾液做為冷水供試液。另一份于60℃水浴上加熱30分鐘，過濾，即得。

1.2.3 醇供試液制備

取朱唇藥材粗粉10g，加10倍量的95%乙醇，經(jīng)水浴回流1小時，過濾，即得醇供試液。取一部分濾液濃縮成膏狀，加5%HCl溶解，過濾，得到乙醇酸水供試液。

1.2.4 石油醚供試液制備

取朱唇粗粉1g，加10ml石油醚，密封放置2～3小時，過濾即得石油醚供試液。

1.2.5 朱唇水提取物的制備

稱取朱唇粗粉100 g，加入10倍量蒸餾水，煎煮三次，每次1 h，合并提取液，濃縮干燥，即得朱唇水提物。

1.2.6 朱唇醇提物的制備

將朱唇藥材粉碎，得朱唇粗粉，稱取朱唇藥粉100 g，用10倍量75 % 乙醇回流提取三次，每次1 h，合并提取液，濃縮干燥即得。

1.2.7 氯化鈣溶液配制［7，8］

準(zhǔn)確稱取取無水氯化鈣1.400 g，加去離子水定容至 50 mL混勻。

1.2.8 抗凝血液的制備［7，8］

準(zhǔn)確稱取1.900g枸櫞酸鈉，加去離子水定容至50mL混勻，然后與新鮮家兔血按1∶9 比例輕輕混勻，待用。

1.2.9 去鈣血漿的制備［7，8］

取抗凝血液1500 r/min離心30 min即得。

1.2.10 凝血時間（Clotting time，CT）的測定

采用凝血板法和試管法［7，8］測定，所取指標(biāo)為凝血時間。設(shè)立空白對照及云南白藥陽性對照，每樣品進行 6次平行實驗，并計算平均值。下同。

1.2.11 血漿復(fù)鈣時間（recovery-calcium time，RT）的測定

采用試管法［9］進行測定。

1.2.12 統(tǒng)計方法

實驗數(shù)據(jù)以（均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差）即（ ） 表示，組間比較采用t 檢驗，數(shù)據(jù)采用Microsoft Excel 統(tǒng)計軟件進行分析。凝血時間縮短率計算方法如下：

2 結(jié)果與分析

2.1 水提取液預(yù)試

冷水供試液做氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)成分檢查，熱水供試液做糖、多糖、皂苷、苷類、鞣質(zhì)、有機酸成分檢查。結(jié)果見表1。

表1 水提取液預(yù)試結(jié)果

2.2 乙醇提取液預(yù)試

乙醇供試液做黃酮、蒽醌、香豆素、植物甾醇、強心苷的檢查，乙醇酸水供試液做生物堿檢查，結(jié)果見表2。

表2 乙醇提取液預(yù)試結(jié)果

2.3 石油醚提取液預(yù)試

石油醚供試液分別做揮發(fā)油和油脂檢查，結(jié)果見表3。

表3 石油醚提取液預(yù)試結(jié)果

2.4 朱唇提取物凝血板法實驗結(jié)果

表4 凝血板法測定凝血時間（n=6，±S）

圖1 凝血板法測定凝血時間縮短率

由表4、圖1可以看出，用凝血板法測定朱唇提取物的凝血作用，與空白組對照，其水提物和醇提物均明顯縮短（P＜0.01），朱唇醇提物比水提物凝血時間短（P＜0.01），說明醇提物凝血效果較佳。凝血時間縮短率順序：醇提物（17.03%）＞云南白藥（8.74%）＞水提物（2.10%），表明朱唇提取物能明顯縮短凝血時間，有較好的止血作用。

2.5 朱唇提取物試管法實驗結(jié)果

表5 試管法測定凝血時間（n=6，±S）

表5 試管法測定凝血時間（n=6，±S）

樣品（0.5%）（0.5%） 　　空白對照 　　云南白藥對照 　　醇提物 　　水提物T（min） 　2.49± 0.28 　2.03±0.14**# 　2.01±0.12* 　2.07±0.12*

圖2 試管法測定凝血時間縮短率

由表5、圖2可以看出，用凝血板法測定朱唇提取物的凝血作用，與空白組對照，其提取物具有顯著差異（P＜0.05），朱唇醇提物與水提物凝血效果相當(dāng)，無顯著性差異（P＞0.05）。凝血時間縮短率：云南白藥（18.60%）＞水提物（16.79 %）＞醇提物（15.85%），表明朱唇提取物能明顯縮短凝血時間，有較好的止血作用。

表6 血漿復(fù)鈣時間測定（n=6，±S）

圖3 血漿覆蓋時間測定凝血時間縮短率

3 討論

化學(xué)成分預(yù)實驗結(jié)果表明，朱唇中可能含有多糖、苷類、黃酮類等化學(xué)成分。本實驗為進一步研究該植物化學(xué)成分提取、分離、純化和相關(guān)藥理活性提供一定科學(xué)依據(jù)，拓寬朱唇藥用資源的開發(fā)利用。

凝血時間是指在動物血液在機體外完全凝固所需要的時間［10］，常用的測定凝血時間方法有凝血板法、試管法、毛細玻管法。凝血板法和試管法測定凝血時間值的原理為體外血液中的Ⅻ因子被異物表面（凝血板表面、試管內(nèi)表面）活化，由于血小板因子及鈣離子的作用，發(fā)生復(fù)雜的連鎖反應(yīng)，生成的纖維蛋白可抑制機體出血［11］。本文采用凝血板法和試管法對雞體外血液，設(shè)立空白對照組及云南白藥對照組對朱唇提取物進行凝血時間比較，來判斷止血效果。結(jié)果發(fā)現(xiàn)朱唇提取物能明顯縮短凝血時間，有較好的止血作用（P＜0.05），其中凝血板法測定凝血時間結(jié)果顯示醇提取凝血效果比水提物好（P＜0.05）。血漿復(fù)鈣時間是指去掉鈣的血漿中重新加入鈣，使內(nèi)源性凝血過程重現(xiàn)，其原理是離體血液經(jīng)過抗凝劑二水合檸檬酸三鈉處理，離心后血漿中缺少鈣離子，凝血功能失效，再加入鈣離子可令其還原，但此時凝血因子減少，凝血時間會縮短，即血漿復(fù)鈣時間減短［12］。本研究發(fā)現(xiàn)朱唇提取物血漿復(fù)鈣時間與空白組對照，其醇提物具有極顯著差異（P＜0.05），朱唇醇提物比水提物有較好的凝血效果（P＜0.05）。結(jié)果表明朱唇提取物具有止血作用，但使去鈣血漿恢復(fù)凝血作用的能力較弱。本實驗主要考察了朱唇提取物的止血活性，而其止血活性物質(zhì)結(jié)構(gòu)還未明確，有待進一步的分離純化及結(jié)構(gòu)鑒定，從而明確止血的物質(zhì)基礎(chǔ)。同時，以價格低廉的朱唇為原料的止血藥具有廣泛的開發(fā)前景，充分開發(fā)利用了野生中草藥資源，拓寬止血藥領(lǐng)域。

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Preliminary tests for chemical components and hemostatic activity of Salvia coccinea L.

Obiective： To identify the chemical components and hemostatic activity of Salvia coccinea L.. Methods：The extracted from Salvia coccinea L. was studied using test tube method， the chemical components of Salvia coccinea L. were preliminarily demonstrated . And the hemostatic active of Salvia coccinea L in vitro were observed by procoagulation. Results： Salvia coccinea L. might exist variety of hemostatic effect in Salvia coccinea L.， for example， polysaccharide， glycosides， flavonoids， etc. In addition， Salvia coccinea L. has evident hemostatic function. Conclusion：Diverse chemical components exist in Salvia coccinea L.， which provides foundation for further study and application of Salvia coccinea L.. Diverse hemostasis natural products exist in Salvia coccinea L. extract，which provide a basis for developing new hemostasis drug.

Salvia coccinea L.； preliminary test； chemical components； hemostasis

R285.5

A

1008-1151（2016）01-0038-03

2015-12-15

廣西高校科學(xué)技術(shù)研究項目（KY2015LX366）；河池學(xué)院校級青年科研課題立項項目（2014QN-N002）；生物化工廣西重點學(xué)科（河池學(xué)院）建設(shè)基金（201308）。

羅澤萍（1987-），女，廣西梧州人，河池學(xué)院講師，研究方向為生化藥理學(xué)。

潘立衛(wèi)（1987-），男（壯族），廣西都安人，河池學(xué)院實驗師，研究方向為中草藥有效成分研究。