土大黃根提取物對小鼠尾部鱗片角化不全模型的影響

阿布都吉力力·阿布都艾尼 尤力都孜·買買提 熱比姑麗·伊斯拉木

1.新疆維吾爾自治區維吾爾醫藥研究所藥理毒理研究室，新疆烏魯木齊830049；

2.新疆維吾爾自治區維吾爾醫藥研究所新疆維吾爾醫方劑學實驗室，新疆烏魯木齊830049；3.中國科學院大學，北京100049

土大黃根提取物對小鼠尾部鱗片角化不全模型的影響

阿布都吉力力·阿布都艾尼1，2，3尤力都孜·買買提1，2熱比姑麗·伊斯拉木1，2

1.新疆維吾爾自治區維吾爾醫藥研究所藥理毒理研究室，新疆烏魯木齊830049；

2.新疆維吾爾自治區維吾爾醫藥研究所新疆維吾爾醫方劑學實驗室，新疆烏魯木齊830049；3.中國科學院大學，北京100049

目的探討土大黃根提取物對小鼠尾部鱗片角化不全模型的影響。方法將70只KM小鼠隨機分為對照組、地塞米松組、消銀顆粒組、異常黏液質成熟劑組、土大黃根提取物組（1 g/kg組、2 g/kg組、4 g/kg組）7個組，每組各10只，按體重分別給予0.5%羧甲基纖維素鈉、1.05 mg/kg地塞米松、1.577 g/kg消銀顆粒、2 g/kg異常黏液質成熟劑及1、2、4 g/kg土大黃根提取物灌胃。采用小鼠尾部鱗片角化不全模型，觀測灌胃給藥后小鼠的一般狀況、體重、臟器指數、血生化指標及尾部皮膚組織病理學變化。結果與對照組比較，1、2、4 g/kg組小鼠行為活動、皮毛、糞便、飲食等均未見異常，臟器指數、體重無明顯變化，差異無統計學意義（P＞0.05）；血清肌酐、葡萄糖、總蛋白、白蛋白、總膽固醇、高密度脂蛋白-膽固醇、低密度脂蛋白-膽固醇均升高（P＜0.05或P＜0.01）。與對照組比較，1 g/kg組血清堿性磷酸酶升高、磷酸肌酸激酶降低；2 g/kg組血清丙氨酸氨基轉移酶、天門冬氨酸氨基轉移酶升高，尿素降低；4 g/kg組血清丙氨酸氨基轉移酶、天門冬氨酸氨基轉移酶、堿性磷酸酶、三酰甘油升高，磷酸肌酸激酶、尿素降低，差異均有統計學意義（P＜0.05或P＜0.01）。1、2、4 g/kg組促進小鼠尾部鱗片表皮顆粒層形成，且呈劑量規律性。結論土大黃根提取物能改變銀屑病表皮的角化不全，但其作用與血生化指標的變化可能無明顯關聯。

土大黃根提取物；小鼠尾部鱗片角化不全模型；組織病理學；血生化

土大黃（Rumex L.）是蓼科（Polyonaceae）酸模屬（Rumex）植物，多年生草本。維吾爾藥物名為阿提庫拉克（At kulak）、歐麻孜（Hummaz）、土日謝（Turux）、塔給庫斯（Tag kusi），其藥用部位為全草、葉子、根莖及根，用于腎、肝、胃腸疾病及皮疹、皮膚瘙癢等［1-3］。本研究探討土大黃根提取物對小鼠尾部鱗片角化不全模型的影響。

1 對象與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 藥材及藥品土大黃根由新疆華安中藥飲片有限責任公司（GSP）提供（批號：12110），并由新疆大學資源與環境科學學院努爾巴依·阿不都沙力克教授鑒定為土大黃根。醋酸地塞米松（DXM）片（國藥準字H3302 0822，批號：140670，浙江仙琚制藥股份有限公司）。消銀顆粒（XYKL）（國藥準字Z20000019，批號：130809，陜西康惠制藥股份有限公司）。異常黏液質成熟劑（MB）（批號：M20052633）由新疆維吾爾自治區維吾爾醫院制劑室（GMP認證）提供。

1.1.2 實驗動物KM小鼠80只，雄性，體重18～22 g，由新疆實驗動物研究中心提供。實驗動物生產許可證號：SCXK（新）2011-0001。實驗動物使用許可證號：SYXK（新）2011-0005。實驗開始前檢疫，經一般行為觀察，選用符合要求的70只小鼠進行試驗。

1.2 實驗儀器與試劑

1.2.1 實驗儀器7100全自動生化分析儀（日立公司），KD-TS3D生物組織自動脫水機、KD-BM生物組織自動包埋機（浙江金華科迪儀器設備有限公司），RM2235切片機、DM2500生物顯微鏡、MVC2000顯微成像系統（德國萊卡公司）。

1.2.2 試劑丙氨酸氨基轉移酶（ALT，批號：140113030）、天門冬氨酸氨基轉移酶（AST，批號：140215020）、堿性磷酸酶（ALP，批號：140314022）、磷酸肌酸激酶（CK，批號：142514019）、總膽紅素（TBIL，批號：140615012）、總蛋白（TP，批號：140815002）、白蛋白（ALB，批號：140915013）、葡萄糖（GLU，批號：141514029）、尿素（Urea，批號：141315001），肌酐（Crea，批號：141014014）、總膽固醇（TCHO，批號：141614024）、三酰甘油（TG，批號：141714028）、高密度脂蛋白-膽固醇（HDL-C，批號：142114020）、低密度脂蛋白-膽固醇（LDL-C，批號：142014016）均由深圳邁瑞生物醫療電子股份有限公司生產。

1.3 方法

1.3.1 土大黃根提取物的制備稱取適量土大黃根以8倍量的70%乙醇溶液室溫密閉浸泡1 h后回流提取3次（1.5～2 h），過濾，合并濾液減壓濃縮，真空干燥，得干膏粉。

1.3.2 分組及用藥因小鼠尾部表皮天然缺少顆粒層細胞，類似銀屑病表皮角化不全病理改變，因而可作為銀屑病角化異常的傳統天然模型［4-7］。將70只KM小鼠，按體重隨機分為7組：CON組（0.5%羧甲基纖維素鈉）、DXM組（1.05 mg/kg DXM）、XYKL組（1.577 g/kg XYKL）、MB組（2 g/kg MB）、土大黃根提取物組（REL組、RE-M組、RE-H組，分別給予1、2、4 g/kg土大黃根提取物），每組各10只。給藥組以0.2 mL/10 g體積灌胃給予相應藥物，CON組灌胃等體積的0.5%（0.5%羧甲基纖維素鈉），每日1次，連續15 d。

1.3.3 觀察指標及檢測方法末次給藥2 h后，摘眼球法取血。4℃下3000 r/min離心10 min，通過7100全自動生化分析儀檢測血清生化指標。取小鼠脾臟、胸腺、心臟、腦、腎臟、肝臟觀察并稱重，計算臟器指數（臟器指數=臟器重量/體重）。隨后，取鼠尾距離根部3 cm皮膚標本，用15%福爾馬林溶液固定、脫水、石蠟包埋并HE染色。在光鏡下觀察尾部皮膚組織病理學變化。

1.4 統計學方法

采用SPSS 17.0統計學軟件進行數據分析，計量資料數據用均數±標準差（±s）表示，多組間比較采用One-Way ANOVA檢驗，兩組間比較采用LSD-t檢驗；若方差不齊，兩兩比較采用Dunnett's T3法。計數資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 小鼠一般狀況及體重變化

與CON組比較，各給藥組小鼠在實驗期間，行為活動、皮毛、糞便、飲食等均未見異常，體重無明顯變化，差異無統計學意義（P＞0.05）。見表1。

表1 藥物對小鼠體重的影響（g，±s，n=10）

表1 藥物對小鼠體重的影響（g，±s，n=10）

組別給藥前給藥后第1天第5天第10天第15天CON組DXM組XYKL組MB組RE-L組RE-M組RE-H組20.57±1.67 20.63±1.60 20.67±1.70 20.57±1.66 20.64±1.67 20.68±1.47 20.66±1.64 23.59±2.02 22.50±1.80 23.43±1.55 23.41±1.91 23.37±1.68 23.38±1.73 23.27±1.80 29.09±2.53 22.69±2.40 28.45±1.70 27.77±2.71 27.97±1.52 28.59±1.17 27.87±1.91 34.15±3.03 25.83±2.73 34.70±2.65 34.05±3.36 33.95±2.21 34.25±1.94 33.87±2.06 38.05±3.27 27.83±3.02 37.91±3.25 37.46±3.81 37.32±2.54 37.53±2.63 37.00±2.94

2.2 臟器指數變化

與CON組比較，DXM組小鼠脾臟指數、胸腺指數降低，腦指數升高，差異均有統計學意義（P＜0.05）。其他各組小鼠心臟指數、腎臟指數、肝臟指數與CON組比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）。見表2。

2.3 血生化變化

與CON組比較，DXM組、XYKL組和MB組小鼠血清ALT、TP、ALB、TCHO、HDL-C升高；DXM組小鼠血清AST、Crea、GLU、TG升高，XYKL組小鼠血清CK降低、Crea升高，MB組小鼠血清LDL-C升高，Urea降低，差異均有統計學意義（P＜0.05或P＜0.01）。與CON組比較，RE-L組、RE-M組、RE-H組小鼠血清Crea、GLU、TP、ALB、TCHO、HDL-C、LDL-C升高；RE-L組小鼠血清ALP升高，CK降低；RE-M組小鼠血清ALT、AST升高，Urea降低；RE-H組小鼠血清ALT、AST、ALP、TG升高，CK、Urea降低，差異均有統計學意義（P＜0.05或P＜0.01）。見表3。

2.4 皮膚組織病理學變化

CON組小鼠皮膚完全角化，缺乏顆粒層。棘層、基底層正常，基底膜完整。與CON組比較，DXM組小鼠皮膚部分出現顆粒層；XYKL組小鼠皮膚可見部分區域出現顆粒細胞層；MB組小鼠皮膚完全角化，出現1～2層顆粒細胞層；RE-L組小鼠皮膚少部分區域出現顆粒細胞層；RE-M組小鼠皮膚部分區域出現顆粒細胞層；RE-H組小鼠皮膚大部分區域出現顆粒細胞層。見圖1。

表2 小鼠臟器指數變化（mg/g，±s，n=10）

表2 小鼠臟器指數變化（mg/g，±s，n=10）

注：與CON組比較，*P＜0.05

組別脾臟指數胸腺指數心臟指數腦指數腎臟指數肝臟指數CON組DXM組XYKL組MB組RE-L組RE-M組RE-H組3.1318±0.6932 1.2865±0.5719*3.1602±1.3046 3.0426±0.9447 3.3699±0.9160 2.6703±0.3939 3.3774±1.5179 3.6378±0.6339 1.5718±0.6064*3.6295±0.8889 2.8379±1.0807 3.1002±1.4613 3.0134±0.4043 3.2112±0.7410 7.4004±3.0770 10.8435±6.2225 6.4633±3.9407 5.1591±0.7265 5.3960±0.8438 5.5024±0.6417 5.1352±0.5666 11.3674±1.3974 14.9753±1.7622*12.0360±1.6645 11.0004±2.2471 11.5897±1.5026 10.6860±1.4068 11.5190±0.8145 15.7380±0.7592 15.9453±1.0983 15.4364±1.7329 14.5292±2.1819 15.1095±1.1860 15.4742±3.0691 15.3370±1.3450 51.7391±21.7421 57.5797±4.0755 53.3183±8.8239 48.4745±8.6458 53.2594±3.5702 52.0634±6.7868 48.0684±4.3839

表3 對大鼠生化指標的影響（±s，n=10）

表3 對大鼠生化指標的影響（±s，n=10）

注：與CON組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；ALT：丙氨酸氨基轉移酶；AST：天門冬氨酸氨基轉移酶；ALP：堿性磷酸酶；CK：磷酸肌酸激酶；Urea：尿素；Crea：肌酐；GLU：葡萄糖；TP：總蛋白；ALB：白蛋白；TCHO：；TG：三酰甘油；HDL-C：高密度脂蛋白膽固醇；LDL-C低密度脂蛋白膽固醇

組別ALT（U/L）AST（U/L）ALP（U/L）CK（U/L）Urea（mmol/L）Crea（μmol/L）CON組DXM組XYKL組MB組RE-L組RE-M組RE-H組42.0±4.1 96.1±23.2**51.2±10.1*56.0±13.2**50.3±17.3 52.4±9.2**51.1±11.3*127.0±12.2 229.3±31.0**132.4±13.1 195.6±115.0 128.5±26.4 172.4±41.7**153.6±22.2**239.8±38.1 248.6±66.3 247.9±46.2 237.5±24.0 284.4±41.5*283.3±71.7 269.3±25.3*713.4±214.1 911.3±398.1 337.3±131.0**755.1±503.0 270.1±191.0**505.3±408.0 240.9±78.1**8.10±1.1 7.16±1.0 7.7±0.7 5.9±0.4**7.3±1.1 6.1±0.9**5.5±0.7**24.9±5.3 35.2±4.2**29.8±2.8*29.1±3.6 35.4±7.4**35.2±8.1**38.7±4.5**組別GLU（mmol/L）TP（g/L）ALB（g/L）TCHO（mmol/L）TG（U/L）HDL-C（mmol/L）LDL-C（mmol/L）CON組DXM組XYKL組MB組RE-L組RE-M組RE-H組8.63±0.66 7.48±1.13*9.32±1.02 9.40±1.12 10.71±1.55**11.34±1.37**11.10±1.34**56.8±4.7 68.9±3.5**63.1±2.4**63.4±3.8**66.3±5.4**69.0±7.3**69.4±3.6**33.9±2.8 38.7±3.2**36.9±1.4**37.5±1.8**38.6±2.5**40.0±3.9**39.4±2.2**2.27±0.13 3.14±0.74**2.82±0.40**2.71±0.29**3.07±0.17**3.30±0.26**3.31±0.51**1.56±0.43 1.99±0.37*1.47±0.26 1.63±0.33 1.70±0.31 1.76±0.25 1.83±0.26*1.77±0.15**2.81±0.73**2.31±0.34**2.16±0.32**2.52±0.18**2.72±0.29**2.83±0.39**0.32±0.08 0.42±0.09 0.41±0.10*0.40±0.07*0.45±0.07**0.46±0.09**0.47±0.07**

3 討論

目前常用的銀屑病動物模型有小鼠尾部鱗片角化不全模型、普萘洛爾誘導耳部角化模型、咪喹莫特誘導小鼠模型等［8-12］。其中，小鼠尾部鱗片角化不全模型［13-17］于20世紀70年代初被應用于探討藥物抗銀屑病樣作用，目前已被國內外公認，并得到了普遍應用。小鼠尾部鱗片角化不全模型間接評價藥物療效的動物模型。該模型可以部分模擬銀屑病表皮動力學紊亂的特點，且經濟易得，故被作為篩選抗銀屑病藥物的常用模型。

土大黃的植物來源較多，我國大部分省區均有分布，藥用資源豐富，在民間廣泛使用。據現代藥理學研究文獻綜述發現［18］，土大黃具有多種藥理學作用，其中抗炎、抗腫瘤作用研究較多，對皮膚病研究報道極少。近幾年，本課題組對新疆維吾爾自治區進行民間調查后發現，土大黃用于治療銀屑病等各種皮膚病，并取得了一定的臨床效果。本課題組前期實驗結果表明，土大黃根提取物具有治療實驗性銀屑病的作用［19-20］。本實驗結果表明，與CON組比較，1、2、4 g/kg土大黃根提取物處理后，小鼠行為活動、皮毛、糞便、飲食等未見異常，臟器指數、體重無明顯變化（P＞0.05），而血清Crea、GLU、TP、ALB、TCHO、HDL-C、LDL-C均升高（P＜0.05或P＜0.01）；此外，1 g/kg土大黃根提取物可使實驗小鼠血清ALP升高，CK降低（P＜0.05或P＜0.01）；2 g/kg土大黃根提取物可使小鼠血清ALT、AST升高，Urea降低（P＜0.05或P＜0.01）；4 g/kg土大黃根提取物可使小鼠血清ALT、AST、ALP、TG升高，CK、Urea降低（P＜0.05或P＜0.01）。1、2、4 g/kg土大黃根提取物均可促進小鼠尾部鱗片表皮顆粒層形成，且呈劑量規律性。

綜上所述，土大黃根提取物（1、2、4 g/kg）能改變銀屑病表皮的角化不全，從而具有治療作用。但其作用與小鼠血生化指標變化可能無明顯關聯，這方面有待于深入研究。

圖1 小鼠尾部鱗片角化不全模型皮膚組織病理變化（HE，40×）

［1］阿不力克木·努爾買買提阿吉，穆塔力甫·艾力阿吉·艾米奇.維吾爾醫常用草藥（維文）［M］.烏魯木齊：新疆人民衛生出版社，2006，3：335-336.

［2］吐爾洪·吾買爾.維吾爾醫生藥學（維文，上冊）［M］.烏魯木齊：新疆人民衛生出版社，2006，3：362-363.

［3］劉勇民.維吾爾藥志：下冊［M］.烏魯木齊：新疆科技衛生出版社，1999：319-323.

［4］Wu J，Li H，Li M.Effects of baicalin cream in two mouse models：2，4-dinitrofluorobenzene-induced contact hypersensitivity and mouse tail test for psoriasis［J］.International Journal of Clinical and Experimental Medicine，2015，8（2）：2128-2137.

［5］李正翔，楊東，段蓉，等.涼血化斑顆粒治療銀屑病的藥理作用及臨床療效觀察［J］.中草藥，2015，46（7）：1028-1033.

［6］石敏，石婷，向陽芳，等.吳茱萸次堿軟膏對小鼠尾部鱗片銀屑病模型的治療作用［J］.現代生物醫學進展，2015，15（28）：5414-5417.

［7］楊皓瑜，王金平，李夢琳，等.清熱涼血中藥對小鼠銀屑病模型的干預機制［J］.北京中醫藥大學學報，2015，38（2）：111-114.

［8］Schaper K，Dickhaut J，Japtok L，et al.Sphingosine-1-phosphate exhibits anti-Proliferative and anti-inflammatory effects in mouse model of psoriasis［J］.Journal of Dermatological Science，2013，71（1）：29-36.

［9］Xia JX，Mei XL，Zhu WJ，et al.Effect of FGF10 Monoclonal antibody on psoriasis-like model in guinea pigs［J］.International Journal of Clinical and Experimental Pathology，2014，7（5）：2219-2228.

［10］Sun Y，Zhang J，Huo R，at al.Paeoniflorin inhibits skin lesions in imiquimod-induced psoriasis-like mice by down regulating inflammation［J］.International Immunopharmacology，2015，6，24（2）：392-399.

［11］Andrés RM，Montesinos MC，Navalón P，et al.NF-κB and STAT3 inhibition as a therapeutic strategy in psoriasis：in vitro and in vivo effects of BTH［J］.Journal of Investigative Dermatology，2013，133（10）：2362-2371.

［12］Kundu-Raychaudhuri S，Datta-Mitra A，Abria CJ，et al. Severe combined immunodeficiency mouse-psoriatic human skin xenograft model：a modern tool connecting bench to bedside［J］.Indian Journal of Dermatology Venereology&Leprology，2014，80（3）：204-213.［13］JarrettA.Thephysiologyandpathophysiologyoftheskin［J］. The Lancet，1973，302（7826）：445.

［14］Spearman RIC，Jarrett A.Biological comparison of isomers and chemical forms of vitamin A（retinol）［J］.British Journal of Dermatology，1974，90（5）：553-560.

［15］Bhatia A，Singh B，Wadhwa S，et al.Novel phospholipidbased topical formulations of tamoxifen：evaluation for antipsoriatic activity using mouse-tail model［J］.Pharm Dev Technol，2014，19（2）：160-163.

［16］魏偉，吳希美，李元建.藥理實驗方法學［M］.北京：人民衛生出版社，2010：1315-1318，737-761，1299-1300

［17］熱比姑麗·伊斯拉木，阿瓦姑力·伊斯拉木，斯拉甫·艾白.銀屑病動物模型研究概況［J］.中國藥房，2015，26（19）：2726-2729.

［18］熱比姑麗·伊斯拉木，斯拉甫·艾白.土大黃研究進展［J］.科技導報，2013，31（30）：67-71.

［19］張燕，李治建，斯拉甫·艾白，等.土大黃提取物中蒽醌類成分的含量測定及其對ECV-304細胞的增殖作用［J］.中藥藥理與臨床，2012，28（3）：144-146.

［20］熱比姑麗·伊斯拉木，曼爾旦·尼亞孜，尤力都孜·買買提，斯拉甫·艾白.土大黃不同提取物對銀屑病小鼠模型的作用［J］.西北藥學雜志，2015，30（1）：47-51.

Effect of Rumex L.root extract on mouse tail model

Abdujilili·Abdugheny1，2，3Yultuz·Mamat1，2Rabigul·Islam1，2
1.Department of Pharmacology and Toxicology，Inistitute of Xinjiang Traditional Uyghur Medicine，Xinjiang Uygur Autonomous Region，Urumqi830049，China；2.Laboratory of Traditional Uyghur Medicine Prescription of Xinjiang，Inistitute of Xinjiang Traditional Uyghur Medicine，Xinjiang Uygur Autonomous Region，Urumqi830049，China；3.University of Chinese Academy of Sciences，Beijing100049，China

Objective To explore the effect of Rumex L.root extract on mouse tail model.Methods 70 mice were randomly assigned to CON group，DXM group，XYKL group，MB group and Rumex L.root extract group（1 g/kg group，2 g/kg group，4 g/kg group），with 10 mice in each group，and according to the weight they were given 0.5%CMC-Na，1.05 mg/kg Dexamethasone，1.577 g/kg Xiaoying granules，2 g/kg Munziq Balgam，and 1，2，4 g/kg Rumex L.root extract respectively by gavage.After gavage，general condition，body weight，organ index，blood biochemistry，tail skin histopathology of mice were observed by mouse tail scales parakeratosis model.Results Compared with CON group，mice of the 1，2，4 g/kg group had no obvious abnormalities in activity，fur，faeces，diet，and had no obvious change in organ index and body weight，there were no statistically significant differences（P＞0.05）；serum Crea，GLU，TP，ALB，TCHO，HDL-C，LDL-C of the 1，2，4 g/kg group increased（P＜0.05 or P＜0.01）.Compared with CON group，serum ALP of the 1 g/kg group increased and CK decreased；serum ALT，AST of the 2 g/kg group increased and Urea decreased；serum ALT，AST，ALP of the 4 g/kg group increased and CK，Urea decreased（P＜0.05 or P＜0.01）.1，2，4 g/kg group promoted formation of epidermis granular layer on mouse tail skin and dose dependent.Conclusion Rumex L.root extract can change parakeratosis of psoriasis skin，which has a therapeutic effect，but its function and blood biochemical parameters of mice may not have clear correlation.

Rumex L.root extract；Mouse tail model；Histopathology；Blood biochemistry

R965

A

1673-7210（2016）07（b）-0004-05

2016-04-02本文編輯：任念）

新疆維吾爾自治區公益性科研院所基本科研業務費專項資金資助項目（KY2015138；KY2015139）。

阿布都吉力力·阿布都艾尼（1982.6-），男，新疆伊犁人，中國科學院大學有機化學專業2015級在讀博士研究生；研究方向：民族醫藥。

熱比姑麗·伊斯拉木（1970.10-），女，新疆阿圖什人，博士，主要從事維吾爾藥藥理毒理學研究。