質(zhì)譜技術(shù)在診斷急淋中樞神經(jīng)系統(tǒng)白血病中的應(yīng)用研究

田文洪　王曉燕　莫志芳

【摘要】目的 研究質(zhì)譜技術(shù)在診斷急淋中樞神經(jīng)系統(tǒng)白血病中的應(yīng)用價值。方法 選取我院2015年1月～12月收治的急性淋巴白細(xì)胞（ALL）患者20例作為研究對象，及健康體檢者10名為研究對象，應(yīng)用SELDI-TOF-MS質(zhì)譜技術(shù)檢測其腦脊液建立蛋白質(zhì)指紋模型圖，并分析差異蛋白。結(jié)果 與對照組比較，單純ALL組發(fā)現(xiàn)有8個差異顯著的蛋白峰，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；與單純ALL組比較，ALL合并CNSL組發(fā)現(xiàn)有11個差異顯著的蛋白峰，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。對差異蛋白建立決策樹模型，用此模型診斷ALL合并CNSL，敏感性85.71%（6/7），特異性為91.30%（21/23）。結(jié)論 應(yīng)用SELDI-TOF-MS質(zhì)譜技術(shù)建立急淋中樞神經(jīng)系統(tǒng)白血病患者腦脊液蛋白質(zhì)指紋模型圖，發(fā)現(xiàn)差異蛋白，有助于疾病診斷。

【關(guān)鍵詞】急淋中樞神經(jīng)系統(tǒng)白血病；質(zhì)譜技術(shù)；蛋白質(zhì)指紋圖譜；診斷

【中圖分類號】R733.7 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】B 【文章編號】ISSN.2095-6681.2016.16..02

研究表明[1]，中樞神經(jīng)系統(tǒng)白血病（CNSL）是ALL復(fù)發(fā)的主要根源之一，因此，早期診斷CNSL，并及早給予干預(yù)措施有助于改善患者預(yù)后。隨著蛋白質(zhì)組學(xué)的發(fā)展，采用現(xiàn)代先進(jìn)科學(xué)儀器，如質(zhì)譜，發(fā)現(xiàn)一些與腫瘤的惡性轉(zhuǎn)化、細(xì)胞增殖、抑制凋亡等相關(guān)的蛋白在病理狀態(tài)下會出現(xiàn)異常，對疾病診斷及預(yù)后判斷具有重要價值。本文以此為背景，研究質(zhì)譜技術(shù)在診斷急淋中樞神經(jīng)系統(tǒng)白血病中的應(yīng)用價值，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取我院2015年1月～12月收治的ALL患者20例作為研究對象，根據(jù)是否合并CNSL分為兩組：單純ALL組13例，男8例，女5例，年齡29～58歲，平均年齡（39.5±7.06）歲；ALL合并CNSL組7例，男4例，女3例，年齡31～54歲，平均年齡（41.1±6.42）歲。所有患者均符合WHO制定的診斷標(biāo)準(zhǔn)，并經(jīng)骨髓形態(tài)學(xué)、免疫組化等檢查確診。同期接收的腦脊液及生化檢查無異常的健康體檢者10名為對照組，男6名，女4名，年齡30～60歲，平均年齡（40.8±7.47）歲。三組一般資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。

1.2 標(biāo)本采集及檢測方法

腰椎穿刺抽取腦脊液標(biāo)本，3000 r/min離心處理10 min，取上清液，置于-20℃冰箱內(nèi)保存。取腦脊液標(biāo)本，冰浴解凍后與等體積U9裂解液充分混勻。將處理好的樣品加入到弱陽離子交換型蛋白質(zhì)芯片（WCX2，Ciphergen Biosystems 公司）的每一個孔中。置于振蕩器中反復(fù)震蕩沖洗后，吹干。使用Protein Chip Biology System（PBS?-c）質(zhì)譜儀進(jìn)行測定。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理，計量資料以“x±s”表示，采用t檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

與對照組比較，單純ALL組發(fā)現(xiàn)有8個差異顯著的蛋白峰，差異有統(tǒng)計學(xué)意（P<0.05）；與單純ALL組比較，ALL合并CNSL組發(fā)現(xiàn)有11個差異顯著的蛋白峰，差異有統(tǒng)計學(xué)意（P<0.05）。

3 討 論

白血病是造血干細(xì)胞惡性克隆的白血病細(xì)胞增殖失控、在骨髓或者其他造血組織中大量累積、浸潤，抑制正常造血細(xì)胞功能的一種惡性克隆性血液系統(tǒng)疾病，任何年齡均可發(fā)病，ALL是最常見的成人急性白血病之一，據(jù)統(tǒng)計[2]，其在我國人群中的發(fā)病率高達(dá)5～6/10萬人次。隨著白血病發(fā)病機(jī)制研究的深入，化療方案可以最大限度的殺滅體內(nèi)白血病細(xì)胞，對于無高危因素存在的ALL患者有效率可高達(dá)70%[3]。但是對于存在高危因素的患者，如ALL患者合并CNSL時，會導(dǎo)致病情進(jìn)展加快、髓外浸潤范圍廣等，化療方案治療有效率不足50%，患者死亡率高。目前，除根據(jù)患者腦脊液常規(guī)細(xì)胞學(xué)涂片法結(jié)果外，因該病缺乏靈敏的實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)檢測指標(biāo)，導(dǎo)致對CNSL的早期診斷造成一定的困難。

本文研究表明，應(yīng)用SELDI-TOF-MS質(zhì)譜技術(shù)檢測急淋中樞神經(jīng)系統(tǒng)白血病腦脊液建立蛋白質(zhì)指紋模型圖，與單純ALL組比較，ALL合并CNSL組發(fā)現(xiàn)有11個差異顯著的蛋白峰，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），為ALL合并CNSL診斷有積極的臨床意義。但是本研究中，對差異蛋白建立決策樹模型，用此模型診斷ALL合并CNSL，敏感性85.71%（6/7），特異性為91.30%（21/23），低于文獻(xiàn)報道[4]，可能與本研究納入例數(shù)較少有關(guān)。

綜上所述，應(yīng)用SELDI-TOF-MS質(zhì)譜技術(shù)建立急淋中樞神經(jīng)系統(tǒng)白血病患者腦脊液蛋白質(zhì)指紋模型圖，發(fā)現(xiàn)差異蛋白，有助于疾病診斷。

參考文獻(xiàn)

[1] Patel JP，G6nen M，F(xiàn)igueroa ME，et a1.Prognostic relevance of integrated genetic profiling in acute myeloid leukemia[J].N Engl J Med，2012，366（12）：1079-1089.

[2] 劉育欣，王婷婷，肖玉玲，等.不同臨床分類的急性白血病患者病原學(xué)數(shù)據(jù)分析[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2016，43（10）：185-187，192.

[3] 趙 玥，孫雪靜，萬歲桂，等.急性髓系白血病細(xì)胞免疫表型與疾病復(fù)發(fā)的關(guān)系[J].白血病，淋巴瘤，2011，20（5）：307-309.

[4] 何愛麗，白 菊，黃 辰.等.急性髓系白血病血清標(biāo)志物初步篩選及臨床意義[J].中國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志，2010，18（5）：1132-1137.

本文編輯：劉帥帥