QuEChERS-UPLC-MRM-IDA Criteria-EPI測定紅曲米中洛伐他汀

汪元符

（南昌市食品藥品檢驗所，江西 南昌330038）

QuEChERS-UPLC-MRM-IDA Criteria-EPI測定紅曲米中洛伐他汀

汪元符

（南昌市食品藥品檢驗所，江西 南昌330038）

目的：針對紅曲米，建立其中所含洛伐他汀化學成分的QuEChERS-超高效液相色譜-MRM掃描（多重反應監測）-IDA Criteria-增強子離子掃描（EPI）的檢測方法。方法：色譜柱為Phenomenex Luna C18（2）100A（150 mm× 2.00 mm，3 μm）；柱溫為35℃；流動相為10 mmol/L乙酸銨以乙酸調節pH值至3.0及乙腈，梯度洗脫；流速為0.2 mL/min；以優化后的質譜參數采集信號。結果：檢出限濃度為0.5 ng/mL；定量限濃度為1.0 ng/mL；線性范圍為定量限濃度～500 ng/mL；在線性范圍內相關系數在0.99以上；加樣回收率為99.0%～99.9%。結論：本方法準確，靈敏度高，專屬性好；能用于紅曲米中洛伐他汀化學成分的同時定性及定量檢測。

QuEChERS-超高效液相色譜-MRM掃描（多重反應監測）-IDA Criteria-增強子離子掃描（EPI）檢測法；紅曲米；洛伐他汀

紅曲米的使用至今已有 1 000多年的歷史，李時珍在《本草綱目》中提到：“此乃人窺造化之巧者也”，“奇藥也”，作為中藥，它具有活血和健脾等功效。紅曲霉屬于真菌門、子囊菌亞門、不整子囊菌綱、散囊菌目、紅曲科、紅曲屬［1］。紅曲系通過現代生物工程技術分離出優質的紅曲霉菌，經固體深層發酵精制而成一種純天然綠色產品。本品性狀為淡紅色粉末，色調純正，光熱穩定性好，純天然，安全無副作用，具有降血脂、血壓、膽固醇，調節人體心腦血管健康、提高人體免疫力的醫療保健功效［2］。紅曲菌能產生多種次級代謝產物，例如紅曲色素、莫納可林K（Monacolin K，MK）、γ-氨基丁酸（GABA）、抗氧化物質、降血壓物質等［3］，1979年由日本學者遠藤章從紅曲霉發酵液中分離得到，稱為 Monacolin K。由于其療效顯著、毒副作用小、耐受性好而日漸受到重視，是目前在保健食品中唯一應用的他汀類物質［4］。近年來，隨著生產菌種和工藝的不斷改進，紅曲米中洛伐他汀的含量越來越高［5］，但并不是含量越高就越好。本法針對紅曲米，建立其中所含洛伐他汀化學成分的QuEChERS-超高效液相色譜-MRM掃描（多重反應監測）-IDA Criteria-增強子離子掃描（EPI）的檢測方法（QuEchERS-UPLC-MRM-IDA Criteria-EPI），能同時定性與定量對紅曲米中的洛伐他汀進行測定，為紅曲米的質量控制提供參考。

1 儀器、試劑與材料

AB Sciex 4000 Qtrap質譜，ekspert ultraLC100超高效液相色譜儀，METTLER TOLEDO ME204E電子分析天平，METTLER TOLEDO XS105電子分析天平，Hettich Rotina 380R 1706型醫用低速離心機，昆山 KQ-300DB型數控超聲波清洗器，Millipore超純水系統。

試劑：乙腈（色譜純，Merck），乙酸銨（優級純，Macklin），甲酸（優級純，Macklin），無水硫酸鎂（優級純），無水醋酸鈉（優級純），C18（粒度100 μm），PSA，石墨化碳。

對照品：洛伐他汀（批號：100600-200502），為中國食品藥品檢定研究院提供。

樣品：購自市場和流通企業，產地分別為福建、湖北、山西、廣東，共10個批次，批號：140107，140110，140201，140204，140206，140209，140310，140402，141046，141017，對應編號為① ～ ⑩。

2 方法與結果

2.1 高效液相色譜分析條件

分析柱：Phenomenex Luna C18（2）100A（150 mm×2.00 mm，3 μm）。柱溫：35℃。流速：0.2 mL/min。進樣量：5 μL。流動相：A為10 mmol/L乙酸銨以乙酸調節pH值至3.0，B為乙腈。按表1進行梯度洗脫。

表1 梯度洗脫程序

2.2 質譜分析條件

電噴霧離子源（ESI）：正離子模式（ESI+）。掃描模式：MRM掃描（多重反應監測）-IDA Criteria-EPI。掃描范圍：50～650 Da。氣簾氣壓力：25 Pa。碰撞氣密度：中。電離噴霧電壓：5 500 V。離子源溫度：500℃。霧化氣壓力：55 Pa。輔助氣壓力：50 Pa。界面加熱狀態：開啟。離子對選擇見表2。

表2 質譜分析

2.3 對照品溶液的配制

取洛伐他汀對照品約10 mg，精密稱定，以乙腈制成每1 mL中含1 mg的溶液作為對照品儲備液。取對照品儲備溶液以乙腈按一定比例稀釋，可 得 到 各 含 0.5，1，2.5，5，10，25，50，100，250，500 ng/mL的標準系列工作液。

2.4 供試品溶液的配制

樣品前處理：以四分法采樣，取適量，研勻，稱取0.5 g（精確到0.000 1 g），置50 mL量瓶中，加入乙腈約30 mL，超聲萃取30 min，取出，冷卻至室溫后定容，以5 000 r/min離心，取上清液。

采用 QuEChERS法處理：取上述上清液約15 mL，加入適量的無水硫酸鎂，無水醋酸鈉，C18，PSA及石墨化碳，充分混合約5 min，以5 000 r/min離心，取上清液，經 0.2 μm微孔濾膜過濾后，取續濾液適當稀釋后測定。

2.5 洛伐他汀離子對提取質譜圖

見圖1至圖6。

綜上所述，不僅東道國基礎設施的完善有利于雙邊經濟增長，而且東道國制度對于改善東道國基礎設施的中國OFDI的雙邊經濟增長效應也有著重要影響。以往關于“一帶一路”的研究多將直接投資的經濟增長效應與制度因素割裂開來，或者多研究東道國制度因素對中國OFDI整體的影響。本文著重從東道國各項制度出發，考察在“一帶一路”背景下，東道國各項制度對中國直接投資，尤其是用于改善東道國基礎設施的中國OFDI雙邊經濟增長效應的影響。東道國制度不僅直接影響中國直接投資進入“一帶一路”國家的風險和成本，更進一步影響中國直接投資的區域、類型和經濟效果。[15]具體影響機理見圖1。

圖1 對照品濃度為100 ng/mL時總離子流質譜圖

圖2 對照品定量離子對（405.7/199.1）提取質譜圖

圖3 對照品定性離子對（405.7/285.3）提取質譜圖

圖4 樣品總離子流質譜圖

圖5 樣品定量離子對（405.7/199.1）提取質譜圖

圖6 樣品定性離子對（405.7/285.3）提取質譜圖

2.6 定性確認

采用保留時間與對照品相一致，且提取的二級質譜圖與對照品相一致，判為檢出。見圖7～圖8。

圖7 對照品二級質譜圖

圖8 樣品二級質譜圖b（與對照品一致）

2.7 線性關系及檢出限、定量限考察

采用“2.1”項下的色譜條件，“2.2”項下的質譜條件，以“2.3”項下的標準系列溶液進樣檢測。以檢測所得峰面積為縱坐標，以標準系列溶液濃度（ng/mL）為橫坐標，進行線性擬合。以定性離子對和定量離子對提取的質譜圖信噪比均大于3時的濃度（ng/mL）為檢出限。以定性離子對提取的質譜圖信噪比大于3，定量離子對提取的質譜圖信噪比大于10時的濃度（ng/mL）為定量限。以在一定濃度范圍內，相關系數大于 0.99，為線性范圍。結果見表3。

2.8 精密度試驗

選用標準系列溶液中濃度為100 ng/mL的標準溶液，連續進樣6針，以提取的定量離子對質譜圖峰面積計算。結果見表4。

選用標準系列溶液中濃度為100 ng/mL的標準溶液，在0，1，2，4，8，12，24小時分別進樣，以提取的定量離子對質譜圖峰面積計算。結果見表5。

2.10 重復性試驗

選用批號：140206的紅曲米，按“2.4”項下的方法制備6份平行樣品，按本法檢測洛伐他汀的含量。結果見表6。

2.11 回收率試驗

以同一批次樣品試驗，準確稱取 0.50 g，按“2.4”項的方法制備供試液（稀釋1 000倍），洛伐他汀的理論濃度為98.3 ng/mL，準確加入1.000，2.500，5.000 mL各含1 mg/mL的對照品儲備液，再按 “2.4”項的方法制備成供試液 （稀釋1 000倍），進行檢測，以3次平行結果的均值計，結果見表8，高、中、低三個濃度的回收率均在99.5% ～100.1%之間。

2.12 樣品測定結果

檢測10批次樣品，結果見表8。

表3 線性關系及檢出限、定量限考察結果

表4 精密度試驗結果

表5 穩定性試驗結果

表6 重復性試驗結果

表7 加標回收試驗結果

表8 紅曲米中洛伐他汀測定結果

3 討論

3.1 供試品提取溶劑選擇

據文獻［6］，洛伐他汀易溶于乙酸乙酯而不溶于酸與水，紅曲米中洛伐他汀含量測定中多用甲醇或乙醇超聲提取，本法對此做了改變，采用乙腈為提取液，經比較同樣能較好地提取紅曲米中的洛伐他汀。

3.2 供試品前處理

據文獻［7］，紅曲米中洛伐他汀的前處理方法有直接超聲法，超聲提取后再經氧化鋁層析柱純化法，本法基于簡單、便利、快捷的原則，采用QuEChERS法對供試品提取液進行進一步處理凈化，排除了多余雜質及色素的干擾，能滿足液質進樣需要。

［1］ 逯慎杰，劉秀河.功能性紅曲中功能成分的研究進展［J］.江蘇調味副食品，2011，28（1）：17-20.

［2］ 杜珊.高效液相色譜法測定紅曲中洛伐他汀的含量［J］.天津化工，2010，24（3）：54-60.

［3］ 黃志兵，許楊，張泓，等.紅曲菌幾種主要次級代謝產物及其生物活性的研究進展［J］.食品與發酵工程，2010，36（4）：143-148.

［4］ 姜楠，馬壯飛，劉思潔，等.紅曲類保健食品中洛伐他汀檢測的方法研究［J］.中國衛生檢驗雜志，2013，23（1）：73-74.

［5］羅仁才，孫開奇，謝申猛，等.紅曲中洛伐他汀總量的測定方法［J］.衛生研究，2003，32（2）：157-158.

［6］ 張艷紅.高效液相色譜法測定紅曲米中洛伐他汀的含量［J］.食品科學，2001，22（7）：67-69.

［7］ 范雯.高效液相色譜法測定紅曲藥材中洛伐他汀的含量［J］.現代醫藥衛生，2013，29（16）：2417-2419.

Determination of Lovastatin in Red Yeast Rice by QuEChERS-UPLC-MRM-IDA Criteria-EPI

Wang Yuanfu（Nanchang Institute for Food and Drug Control，Jiangxi Nanchang 330038，China）

Objective：To develop a QuEChERS-UPLC-MRM-IDA Criteria-EPI method for determination of lovastatin in red yeast rice.Methods：Phenomenex Luna C18（2）100A column（150 mm×2.00 mm，3 μm）was used at a column temperature of 35℃，serving 10 mmol/L ammonium acetate （pH 3.0）-acetonitrile as a mobile phase by gradient elution at a flow rate of 0.2 mL/min.Signals were collected under the optimized condition.Results：The detection limit of this method was 0.5 ng/mL，while the limit of quantitation was 1.0 ng/mL，and the linear range was the limit of quantitation～500 ng/mL.Within the linear range，the correlation coefficient was more than 0.99，while the sample recovery rate was 99.0%～99.9%.Conclusion：This method is accurate，sensitive and specific，which may be used for the qualitative and quantitative determinations of lovastatin in red yeast rice.

QuEChERS-UPLC-MRM-IDA Criteria-EPI；Red Yeast Rice；Lovastatin

10.3969/j.issn.1672-5433.2016.10.006

2016-05-22）

汪元符，男，主管醫師。研究方向：中藥理論、藥物檢測及食品安全。E-mail：wanngel@126.com