復方片仔癀肝寶對酒精性肝病的抗炎作用

陳達鑫，林珊，趙錦燕，孫志偉，洪振豐

（1.福建中醫藥大學中西醫結合研究院，福建福州350122；2.福建省中西醫結合老年性疾病重點實驗室，福建福州350122）

·實驗研究·

復方片仔癀肝寶對酒精性肝病的抗炎作用

陳達鑫1，2，林珊1，2，趙錦燕1，2，孫志偉1，2，洪振豐1，2

（1.福建中醫藥大學中西醫結合研究院，福建福州350122；2.福建省中西醫結合老年性疾病重點實驗室，福建福州350122）

目的觀察復方片仔癀肝寶對酒精性肝病模型大鼠的抗炎作用。方法60只SPF級SD大鼠，隨機分為空白對照組、模型組、陽性藥對照組、肝寶低、中、高劑量組，每組10只，制作酒精性肝病大鼠模型，檢測血清TG、ALT、AST、TBiL、ALP、LDH、LDL-c，HDL-c的含量變化；Elisa檢測IL-1β、IL-4、IL-8、IL-10的表達，觀察肝臟組織的病理變化。結果模型組TG、ALT、AST、TBIL、ALP、LDH、LDL-c、IL-1β、IL-4、IL-8、IL-10活性較陽性對照組明顯上升（P＜0.05），HDL-c水平明顯下降（P＜0.01）。與模型組比較，肝寶3組的TG、ALT、AST、TBiL、ALP、LDH、IL-1β、IL-8活性明顯降低，HDL-c水平明顯上升（P＜0.05），IL-4含量下降，并存在量效關系，肝臟病理學觀察，復方片仔癀肝寶各劑量組和陽性對照組能有效改善大鼠肝臟的顏色及質地。結論復方片仔癀肝寶對酒精性肝病有一定的治療作用，其機制是降低炎癥介質的產生，發揮抗炎作用。

酒精性肝??；復方片仔癀肝寶；抗炎作用。

酒精性肝?。╝lcoholie liver disease，ALD）是長期大量飲酒引起的嚴重危害身體健康甚至威脅生命的消化系統疾病，包括酒精性脂肪肝、肝炎、肝硬化、肝癌等［1］。隨著我國酒精消費量的增加，ALD在肝臟病的發病率和死亡率提高［2］，已成為繼病毒性肝病后的肝臟第2大致殘、致死疾?。?］。乙醇及其代謝產物直接或間接誘導炎癥反應，氧化應激、炎癥介質和代謝紊亂是ALD發生的主要原因。復方片仔癀肝寶是一種中成藥制劑，由牛黃、三七、蛇膽、茵陳、龍膽草、梔子、白芍組成。前期研究［4-5］發現復方片仔癀肝寶有較好的保肝護肝作用，本實驗以乙醇和高脂喂養制作慢性肝損傷大鼠模型，用復方片仔癀肝寶進行干預治療，研究復方片仔癀肝寶對慢性肝損傷的保護作用，為臨床應用提供實驗依據。

1　實驗材料

1.1動物飼養條件SD大鼠60只，雄性，SPF級，體質量（200±20）g，許可證號：SCXK（滬）2008-0016，上海斯萊克實驗動物有限公司提供。飼養環境，溫度：20℃～24℃，濕度：40%～70%，風速：0.1～0.2 fm／s，氣流：≥28次／min。

1.2藥物及試劑復方片仔癀肝寶（福建省片仔癀藥業有限公司，批號：1409009）；IL-1β、IL-4、IL-8、IL-10酶聯免疫吸附試驗試劑盒（上海拜沃生物科技有限公司）；無水乙醇，分析純（上海凌峰化學試劑有限公司）。

1.3儀器FA1104N電子天平（上海民橋精密科學儀器有限公司）；TGL-16G低溫離心機（上海安亭科學器材公司）；Bayer ADVIA2400全自動生化分析儀（德國西門子公司）；64R低溫高速離心機（美國Backman公司）；ELX808酶標儀（德國寶特公司）。

2　實驗方法

2.1動物分組、模型制備及給藥SPF級雄性大鼠60只，體質量（180±10）g，10只作為正常對照組（空白組）飼養，為防止空白組在長時間飼養后出現脂肪肝，依經驗每周給予2 d全粗糧飼料喂養。其余動物進行造模，以乙醇合高脂飼料干預，每日1次。造模前3天用15%乙醇0.7 mL／100 g進行適應性灌胃，第4天開始每日定時以30%乙醇0.7 mL／100 g灌胃。2周后，造模大鼠隨機分為5組：模型組、600 mg／kg水飛薊賓葡甲胺片陽性對照組（陽性對照組）、150 mg／kg肝寶組（肝寶低劑量組）、300mg／kg肝寶組（肝寶中劑量組）、600mg／kg肝寶組（肝寶高劑量組），每組10只，定時給藥，灌藥時間與灌乙醇時間間隔2 h，連續4周，空白組、陰性對照組灌胃等量的生理鹽水。第4周末次給藥24 h后，用3%戊巴比妥鈉60 mg／kg腹腔注射麻醉，腹主動脈采血，分離血清，-20℃保存，用于血液生化指標的測定，取肝臟右中央葉作病理學分析。

2.2生化分析取大鼠腹主動脈血，2 000 r／min離心10 min，分離得到血清，用全自動生化分析儀檢測大鼠血清中TG、ALT、AST、TBiL、ALP、LDH、LDL-c、HDL-c活性。

2.3炎癥因子檢測按照酶聯免疫吸附試驗試劑盒操作說明，檢測血清中IL-1β、IL-4、IL-8、IL-10含量。

2.4肝組織形態學觀察取全肝，拍照記錄，觀察肝組織形態改變。多聚甲醛固定肝右中央葉組織，制備石蠟切片，HE染色，光鏡下觀察肝組織病理改變。

2.5統計學處理數據用x±s表示，用SPSS 18.0軟件分析，多組均數間比較用單因素方差分析檢驗，P＜0.05為差異具有統計學意義。

3　結果

3.1一般行為狀態實驗期間正常組大鼠精力充沛，靈活，飲食正常，毛色有光澤，尿液淺黃色。造模后，除正常對照組外，其余各組大鼠的活動明顯下降，飲水進食明顯減少，毛色缺乏光澤，尿液深黃色。復方片仔癀肝寶組及陽性組較模型組稍好，尿色較模型組略淡。

3.2指標測定見表1、表2。

表1　復方片仔癀肝寶對血清TG、ALT、AST、TBiL、ALP、LDH、LDLD和HDLD的影響U／L

表2　復方片仔癀肝寶對血清中炎癥因子含量的影響pg／mL

3.3病理組織學結果肉眼觀察正常對照組大鼠肝臟呈紅褐色，表面光滑，質軟。模型組大鼠的肝臟腫大，呈白褐色，邊緣鈍，質硬，表面有大量纖維滲出物，同時出現細小顆粒，淤血明顯。復方片仔癀肝寶各劑量組和陽性對照組有效改善大鼠肝臟的顏色及質地，其中高劑量組變化明顯。光鏡下觀察6組大鼠肝臟病理組織學改變，正常對照組可見肝小葉輪廓清晰，小葉中央靜脈向四周呈放射狀排列，肝細胞排列尚整齊，細胞分界清，核圓，位于細胞中央，無脂肪變性。模型組可見肝小葉結構破壞，肝板排列紊亂，呈點、片狀壞死，肝細胞腫脹明顯，胞質疏松，可見大小不等脂肪空泡，伴有脂滴融合將細胞核擠壓在細胞一側。肝寶治療組大鼠肝細胞內脂肪空泡明顯減少，以中、小空泡為主，肝細胞體積減小，部分肝細胞形態趨于正常，見圖1。

4　討論

4.1長期飲酒引起的酒精性脂肪肝，屬TG堆積的脂肪肝類型，會引起血液中TG升高。當肝組織處于正常狀態時，肝細胞中的ALT、AST無明顯外漏，故血清中的ALT、AST屬于正常較低的水平。當肝臟受到損害時，胞漿內的ALT和AST向肝血竇溢出，并進入周圍血流，血清ALT、AST活性增加，提示肝細胞破壞，細胞膜通透性增強及線粒體受到損傷［6－7］。模型組大鼠血清中TG、ALT、AST、TBiL、ALP、LDH、LDL-c水平明顯升高，HDL-c水平降低，表明模型大鼠肝損傷明顯。給予不同劑量復方片仔癀肝寶和陽性藥物干預后大鼠血清中TG、ALT、AST、TBiL、ALP、LDH和LDL-c活性不同程度地降低，HDLD升高，說明復方片仔癀肝寶片對酒精誘導所致大鼠慢性肝損傷起到了明顯的保肝降酶作用。

4.2乙醇進入人體后可損傷小腸黏膜，使腸黏膜的通透性增大，腸源性的內毒素入血增多。血液中的內毒素可激活肝臟中的固有免疫細胞-Kupffer細胞，產生大量的炎癥因子，如IL-1β、IL-4和TNF-α，大量的炎癥因子可導致炎癥級聯反應，導致肝細胞損傷和凋亡［8］。受損的肝細胞釋放的IL-8會導致炎癥的持續發生，并刺激Kupffer細胞產生更多的TNF-α，進一步增加肝細胞凋亡［9］。IL-10是一種具有調節細胞增殖分化、免疫及非免疫活性的負性調節因子，ALD時，IL-10通過抑制Kupffer細胞的活化，減少炎癥因子的產生，負向調控炎癥反應強度，起到保護肝細胞的作用［10］。實驗結果提示復方片仔癀肝寶在不影響IL-10的前提下，能有效降低炎癥因子IL-1β、IL-4和IL-8，說明其在ALD的發生、發展全過程中，都起到了對抗、治療肝損傷的作用。

復方片仔癀肝寶能夠顯著改善ALD模型大鼠肝臟損傷程度，降低血清TG、ALT、AST、TBiL、ALP、LDH、LDL-c水平提高HDL-c水平，提示復方片仔癀肝寶對ALD有一定的抗炎作用，進一步研究發現其可調控IL-1β、IL-4和IL-8等炎癥因子，推測其抗炎作用與通過抑制巨噬細胞的產生和釋放炎癥因子，降低炎癥反應強度有一定關系。

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R285.5

B

1000-338X（2016）05-0006-03

2016-07-06

福建省科技廳資助課題（2010YZ0001-1）

陳達鑫（1987—），男，助理實驗師，主要從事中西醫結合基礎研究。

洪振豐（1953—），男，教授。E-mail：zfhong1953@163.com