利福平耐藥實時熒光定量核酸擴增技術檢測333例肺結核患者痰標本的結果分析

林日文,李 靜

(廣東省惠州市結核病防治研究所檢驗科 516008)

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·臨床研究·

利福平耐藥實時熒光定量核酸擴增技術檢測333例肺結核患者痰標本的結果分析

林日文,李 靜△

(廣東省惠州市結核病防治研究所檢驗科 516008)

目的 探討采用利福平(RFP)耐藥實時熒光定量核酸擴增技術(Xpert MTB/RIF)檢測肺結核患者痰標本的結果并進行分析。方法 選擇2015年1～12月該所就診的肺結核患者痰標本333例，分別進行抗酸染色涂片鏡檢、Xpert MTB/RIF、傳統羅氏培養法檢測，使用Xpert MTB/RIF檢測痰標本的結核分枝桿菌(MTB)和RFP耐藥的敏感度和特異度，并與傳統羅氏培養法檢測結果進行一致性比較。結果 Xpert MTB/RIF檢測MTB的敏感度為93.6%，特異度為92.0%，2種方法進行Kappa檢驗，Kappa=0.82，具有良好的一致性；RFP耐藥的敏感度和特異度分別為78.6%和93.4%，2種方法的Kappa=0.78，具有良好的一致性。結論 應用Xpert MTB/RIF檢測肺結核患者痰標本，檢測速度快，準確性高，快速獲得患者是否耐藥的結果，可指導臨床準確用藥，值得臨床應用和推廣。

肺結核； 利福平； Xpert MTB/RIF檢測技術

我國屬于全球22個結核病高負擔國家之一，患者數據居全球第2位[1]。結核病疫情具有高患病率、高耐藥率、高感染率的特點。廣東地區人口流動性大，外來人口多，結核病疫情尤為嚴峻。目前結核病比較突出的問題是患者產生耐藥性，治療效果差。如何早期發現患者對抗結核藥產生耐藥性是臨床面臨的挑戰。耐多藥結核病是指至少對抗結核藥物中異煙肼(INH)和利福平(RFP)產生耐藥，由于90%的結核桿菌對RFP耐藥同時也對INH耐藥，因此RFP耐藥被認為是耐多藥的重要標志[2-3]。傳統羅氏結核桿菌耐藥檢測法，需要的檢測時間至少2個月，因為檢測時間長，對患者的及時治療和臨床用藥造成障礙，利福平耐藥實時熒光定量核酸擴增技術(Xpert MTB/RIF)快速檢測法則彌補了其不足。現檢測111株結核分枝桿菌，并對RFP耐藥情況進行總結分析，為臨床提供科學依據和經驗用藥參考。報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2015年1～12月在惠州市結核病防治研究所就診的肺結核患者痰標本333例，年齡19～69歲，男170例，女163例，囑患者清晨清理口腔后用力咳出深部濃痰，一式2份。進行涂片鏡檢，分別標記出涂片陰性和陽性的標本，采用Xpert MTB/RIF核酸檢測和改良羅氏培養，培養陽性者進行藥物敏感試驗[3-4]。評價2種方法檢測結核分枝桿菌(MTB)和RFP耐藥的敏感度和特異度，并對2種方法結果的一致性進行比較。

1.2 儀器與試劑 使用珠海Baso公司生產的培養基和標準菌株HRV,抗結核藥由華南制藥生產，Xpert MTB/RIF核酸檢測儀是美國Motyd公司生產，Cartridge反應盒由北京芬尼公司提供。

1.3 方法 Xpert MTB/RIF核酸檢測采用Cepheid公司Gene-Xpert 檢測系統是一種半巢式定時熒光PCR體外診斷技術，針對rpoB基因81 bp利福平耐藥核心區間(RRDR)設計引物、探針、檢測其是否發生突變，進而用于診斷患者是否結核及是否對RFP耐藥(rpoB序列存在突變)。打開 Gene-Xpert 檢測儀的電源開關，然后運行Gene-Xpert 操作軟件，使用掃碼器掃描反應盒正面的識別碼。軟件將全自動填寫所需信息。點擊“開始測試”，2 h出結果，可判讀是否MTB感染及是否RFP耐藥。MTB檢出高度：CT<16，陽性級別高，定義為4+： MTB檢出中度：16

1.4 統計學處理 采用SPSS13.0統計軟件進行數據分析，0

2 結 果

2.1 Xpert MTB/RIF檢測MTB效能分析 333例初診患者痰標本進行涂片染色鏡檢，其中陽性111例，陰性222例，以羅氏培養法為標準，Xpert MTB/RIF涂片陽性患者檢測MTB的敏感度為94.9%(93/98)，特異度為69.2%(9/11)；Xpert MTB/RIF涂片陰性患者檢測MTB的敏感度為83.3%(10/12)，特異度為94.7%(199/210)；全部患者檢測的敏感度93.6%(103/110)，特異度為92.0%(208/226)。2種方法進行Kappa檢驗，Kappa=0.82，具有良好的一致性。見表1。

表1 Xpert MTB/RIF檢測MTB效能分析(n)

2.2 Xpert MTB/RIF檢測痰標本對RFP耐藥的結果分析 333例初診患者痰標本進行涂片染色鏡檢，涂片陽性111例，涂片陰性222例，以羅氏培養法為標準，Xpert MTB/RIF涂片陽性患者檢測RFP耐藥的敏感度為72.7%(8/11)，特異度為98.0%(98/100)；Xpert MTB/RIF涂片陰性患者檢測RFP耐藥的敏感度為100%(3/3)，特異度為91.3%(200/219)。全部患者檢測的敏感度為78.6%(11/14)，特異度為93.4%(298/319)。2種方法進行Kappa檢驗，Kappa=0.78，具有良好的一致性。見表2。

表2 Xpert MTB/RIF檢測痰標本對RFP耐藥的結果分析(n)

3 討 論

肺結核發病例數逐年升高，每年新增患者130萬例。傳統羅氏固體培養法是目前常用的診斷耐藥結核的方法，其結果可靠，是診斷耐藥結核的金標準。但其耗時較長，平均 1～2 個月的操作時間易造成診斷延誤，期間耐藥結核患者無法得到有效化療，容易導致獲得性耐藥、結核復發或切口處竇道形成[8]。因此，需開發或尋找快速、準確、安全的檢測結核耐藥性的分子藥敏診斷技術。近年來，Xpert MTB/RIF受到國內外廣泛關注和探討，臨床應用處于初級起步階段。本研究Xpert MTB/RIF檢測333例肺結核患者痰標本結果表明,Xpert MTB/RIF檢測MTB的敏感度為93.6%，特異度為92.0%，2種方法進行Kappa檢驗，Kappa=0.82，具有良好的一致性格；RFP耐藥的敏感度和特異度分別為78.6%和93.4%，2種方法進行Kappa檢驗，Kappa=0.78，具有良好的一致性。

Xpert MTB/RIF 作為一種全新的結核病快速檢測新方法，具有如下特點：(1)集成性：將樣品準備、擴增、定量檢測進行統一。(2)快捷性：擁有極速加熱和制冷的能力，可在2 h內提供精確穩定的試驗結果。(3)靈活性：可配置多個模塊同時進行多種不同的檢測，任何1個反應都可隨時啟動和終止。(4)易操作：系統軟件實時監測 PCR 進行情況，一旦 PCR 完成自動給出試驗結果。(5)安全性：獨立并自成體系的一次性反應盒增加了設備的安全性。(6)精確性：多個光譜的光學檢測可以提供準確的實時定量 PCR 結果[9-10]。

Xpert MTB/RIF 檢測方法是全球結核病診斷和治療方面的一個重要里程碑，為面臨罹患結核病和耐藥結核病危險的人群帶來新希望。 耐藥結核病常規疫情的監測不僅是臨床用藥和評價化療的重要依據，也是流行病學和結核病工作的重要指標。結核分枝桿菌耐藥，特別是對 RFP 耐藥，比對 RFP 敏感的結核患者有更高的病死率。RFP 耐藥非常廣泛，且是耐多藥的一個重要標志。MDR-TB 患者很難被治愈，將帶來潛在 MDR-TB 的傳染性。因此，結核分枝桿菌耐藥性快速檢測對結核患者的有效治療至關重要，特別是 RFP 耐藥性快速檢測具有重要的臨床意義。

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10.3969/j.issn.1673-4130.2016.20.041

A

1673-4130(2016)20-2901-02

2016-04-18

2016-07-21)

△通訊作者，E-mail：ldwt010203@126.com。