排氚片的利尿作用及急性毒性研究

馬　萍，李志韌，雷　寧，曹　淼，張智杰，劉麗宏，周湘艷，辛艷茹（.火箭軍總醫(yī)院藥劑科，北京 00088；.中國疾病預防控制中心輻射防護與核安全醫(yī)學所，北京 00088）

·實驗研究·

排氚片的利尿作用及急性毒性研究

馬萍1，李志韌1，雷寧1，曹淼1，張智杰1，劉麗宏1，周湘艷2，辛艷茹1（1.火箭軍總醫(yī)院藥劑科，北京 100088；2.中國疾病預防控制中心輻射防護與核安全醫(yī)學所，北京 100088）

目的：探討排氚片的利尿作用，并進行急性毒性實驗研究，為其臨床應用提供理論依據(jù)。方法：采用大鼠代謝籠法測量給藥后各組大鼠的排尿量，低、中、高3個劑量組的灌胃給藥量分別為4.8、9.6、19.2 g生藥·kg-1，評價排氚片利尿作用；采用小鼠4 h內灌胃2次，給藥后連續(xù)觀察2周，觀察小鼠對排氚片的最大耐受劑量。結果：大鼠給藥后1 ～ 2 h和2 ～ 3 h，中、高劑量組的排尿量顯著高于空白對照組，差異均有統(tǒng)計學意義（P ＜ 0.05）；給藥后1 ～ 3 h，低、中、高3個劑量組的利尿作用強度分別相當于空白對照的130.0%、140.0%和155.7%，其差異均有統(tǒng)計學意義（P ＜ 0.05）；小鼠未出現(xiàn)嚴重的毒性反應和死亡。結論：排氚片對大鼠有一定的利尿作用，其有效劑量為9.6 g生藥·kg-1，相當于成人擬用劑量的15倍。小鼠4 h內2次給藥的最大耐受劑量（MTD）大于333.8 g生藥·kg-1，相當于臨床一日擬用量的521.6倍。

排氚片；利尿作用；急性毒性試驗

排氚片為第二炮兵總醫(yī)院多年的臨床經(jīng)驗方，由黃芪、茯苓、桂枝、白術、澤瀉、豬苓、桔梗等組成，具有補肺健脾、通陽益腎、利尿滲濕、排氚解毒的功效，用于人體感受氚輻射后的排氚治療。目前課題組已完成了排氚片的藥學研究[1-2]、藥效學和毒理學研究，進行了軍隊特需藥品的申報，并已獲得總后軍特藥臨床研究的批準（批件號2009JTL002）。排氚片是通過利尿作用而起到排氚的功效，本文詳述了其利尿作用的藥效學試驗研究，及其臨床前安全性評價的急性毒性試驗研究，為排氚片的臨床應用提供參考依據(jù)。

1　材料與方法

1.1藥物與試劑

排氚片（本院自制，批號041222）；氫氯噻嗪（天津力生制藥股份有限公司，批號040526）；氯化鈉（分析純，北京益利精細化學品有限公司，批號981023）。

1.2動物

選用ICR小鼠，雌雄各半，6周齡，體質量18 ～ 20 g；健康的SD雄性大鼠，體質量150 ～ 158 g，均由北京大學醫(yī)學部實驗動物科學部提供，實驗動物生產許可證號：SCXK（京）2002-0001，使用許可證號：SYXK（京）2002-0002。動物室符合國家二級標準，合格證號：SYXK（京）2002-002。飼養(yǎng)室溫度（22±2） ℃，濕度（60±5）%。由北京維通利華實驗動物技術有限公司提供大小鼠飼養(yǎng)用的塊料[京動（2000）第015號]。

1.3儀器

大鼠代謝籠、移液管、刻度離心管、灌胃針管。

2　方法

2.1對大鼠利尿作用的實驗[3-6]

SD雄性大鼠預先置于代謝籠中1 d適應環(huán)境。禁食不禁水18 h，按體質量每100 g灌胃去離子水2.2 mL，灌胃前輕壓大鼠下腹部，排盡余尿。在每個代謝籠中放置1只大鼠，收集2 h尿液，凡排尿量超過給水量40%者用作正式利尿試驗。篩選動物60只，53只合格，合格率為88.3%。將篩選出的大鼠隨機分成5組，分別為空白對照組（1%鹽水）、陽性對照氫氯噻嗪組（10 mg·kg-1）以及低、中、高3個劑量排氚片組（4.8、9.6、19.2 g生藥·kg-1），每組10只大鼠。試驗前禁食不禁水18 h，試驗開始時輕壓動物下腹部，排盡余尿，空白對照組每100 g灌胃37 ℃ 1%鹽水5 mL，將試驗用藥物溶于等量的1%鹽水中灌胃。在每個代謝籠中放置2只大鼠，給藥后每隔1 h收集尿液一次，連續(xù)收集6 h，并記錄各時間點收集的排尿量。

2.2急性毒性實驗[7-8,3]

取ICR小鼠24只，雌雄各半，給藥前禁食14 h，不禁水，每只小鼠灌胃26.7 g干膏·kg-1（相當于166.9 g生藥·kg-1），每10 g體質量灌胃0.4 mL，4 h后重復灌胃一次，連續(xù)觀察14 d。給藥后，立即觀察動物的反應及死亡情況，第2天開始，每天觀察一次。記錄動物的外觀、行為活動、精神狀態(tài)、食欲飲水、大小便及顏色、皮毛、膚色、呼吸、有無分泌物、體質量變化等。

2.3統(tǒng)計學分析[9]

計算一定時間排尿量的平均值及其標準差，顯著性測定采用t檢驗。

3　結果

3.1對大鼠排尿的影響

大鼠灌胃氫氯噻嗪后1 ～ 2 h和2 ～ 3 h排尿量顯著多于空白對照組（P ＜ 0.001）。大鼠灌胃排氚片后1 ～ 2 h和2 ～ 3 h排尿量也明顯多于空白對照組，隨著給藥劑量的增加大鼠排尿量有增加的趨勢，其中高劑量組和中劑量組的排尿量高于空白對照組，差異均有統(tǒng)計學意義（P ＜ 0.05），詳見表1。結果顯示，給藥后排尿量的增加主要集中在第1 ～ 2 小時和第2 ～ 3 小時。將給藥后大鼠1 ～ 3 h的排尿量合并后列于表2，結果表明，以空白對照組的排尿量為100%，則排氚片低、中、高3個劑量組的利尿作用強度分別為130.0%、140.0%和155.7%，與空白對照組相比差異均有統(tǒng)計學意義（P ＜ 0.05）。

表1　給藥后不同時間段大鼠的排尿量分布情況Tab 1　Distribution of the rat urine output at different times after administration

表2　給藥后1 ～ 3 h內大鼠的排尿量分布情況Tab 2　Distribution of the rat urine output during 1 - 3 h after administration

3.2急性毒性實驗

因為預試驗和正式試驗的方法一致，所以將資料合并分析。 給藥后24只雌雄各半的小鼠中幾乎所有的小鼠立即出現(xiàn)行動遲緩，眼無神，迷眼，多半小鼠出現(xiàn)呼吸急促，其中部分小鼠出現(xiàn)稀便，見表3。給藥后20 ～ 30 min，24只雌雄各半的小鼠癥狀緩解，小鼠開始正常活動，攝食。14 d內未觀察到小鼠死亡，體質量均有增加，見表4。

表3　給小鼠灌胃排氚片后的癥狀表現(xiàn)Tab 3　The symptoms in mice with the intragastric administration of Paichuan tablets

表4　給小鼠灌胃排氚片后的體質量變化Tab 4　The weight changes in mice with the intragastric administration of Paichuan tablets

4　討論

4.1排氚片功效的中醫(yī)理論基礎

氚毒主要通過污染肌膚或誤吸、誤飲，致使氚毒由肌膚、氣道、食道侵入機體，傷及臟腑，多損及肺、脾、腎三臟，故治療氚中毒主要在于調補肺、脾、腎三臟的氣化功能，通調水道，排氚解毒。課題組在中醫(yī)名方五苓散的基礎上完成排氚片的組方，五苓散出自《傷寒論》71條“太陽病、發(fā)汗后，大汗出……若脈浮，小便不利，微熱消渴者，五苓散主之”[10]，排氚片方中黃芪，既可上補肺氣、下輸膀胱，又可中健脾氣、以運化水濕達到排氚解毒的主要目的，故為君藥。方中白術和茯苓健脾益氣、淡滲利濕、利尿排氚，輔助君藥增強調補脾腎、排氚解毒之功，故為臣藥。方中豬苓、澤瀉和桂枝三藥合用，溫腎陽、助氣化、通膀胱、排氚毒，共為佐藥。方中桔梗，開提肺氣、通調水道、下輸膀胱，升清降濁，佐助君藥利尿排氚，故為使藥。

4.2排氚片的利尿作用

排氚片中君藥黃芪具有補氣升陽、固表止汗、利水消腫等功能主治[11]，有學者對黃芪藥材利尿作用的譜效關系進行了系統(tǒng)研究[12]。方中茯苓、豬苓和澤瀉是常見的中藥利尿藥，有學者通過綜述，分析討論了其活性成分及利尿作用機制[13]。本文通過藥效學試驗也表明，中藥排氚片對大鼠有明顯的利尿作用，其有效劑量為9.6 g生藥·kg-1，相當于成人擬用劑量的15倍。

4.3排氚片的臨床前安全性的初步評價

在急性毒性的預試驗中，將每克受試藥加水至1.5 mL，給每只小鼠灌胃0.4 mL·10g-1體質量，未觀察到小鼠出現(xiàn)明顯的毒性反應和死亡，主要癥狀為活動遲緩，部分小鼠拉稀便，且30 min后恢復正常。為了觀察小鼠對排氚片的耐受情況，4 h后又重復給藥一次。第2次給藥后小鼠的反應同第一次給藥。考慮到再增加給藥量有困難，因此對本試藥進行小鼠最大耐受劑量（MTD）測定。一天內間隔4 h給小鼠2次受試藥，總劑量為333.8 g生藥·kg-1。給藥后連續(xù)觀察2周，小鼠未出現(xiàn)嚴重的毒性反應和死亡。給藥后小鼠立即出現(xiàn)一過性的癥狀可能是由于灌藥的機械刺激造成的胃腸不適。小鼠對排氚片一日2次給藥的MTD大于333.8 g生藥·kg-1，相當于臨床一日擬用量的521.6倍。

[1] 馬萍，李志韌，雷寧，等.HPLC-ELSD法測定排氚片中黃芪甲苷的含量[J].解放軍藥學學報，2014，30（5）：447-448.

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Study on the diuretic effects and acute toxicity of the Paichuan tablets

MA Ping1,LI Zhi-ren1,LEI Ning1,CAO Miao1,ZHANG Zhi-jie1,LIU Li-hong1,ZHOU Xiang-yan2,XIN Yan-ru1(1. Department of Pharmacy,General Hospital of the Rocket Forces,Beijing 100088,China; 2. National Institute for Radiological Protection,Chinese Center for Disease Control and Prevention,Beijing 100088,China)

Objective: To study the diuretic effect and acute toxicity of Paichuan tablets,in order to offer references for its clinical application. Methods: Metabolic cage method of rats was used to measure urine volume after the treatment. The rats were divided into low,medium and high three dose groups. The amounts of intragastric administration dose for each group were 4.8,9.6,19.2 g·kg-1in crude drug,respectively. The rats were given twice dose in 4 hours each day and continuously observed for two weeks to find out the maximum tolerated dosage of Paichuan tablets.Results: The amount of urine volume in medium and high dose groups were significantly higher than the blank control group in 1 – 2 h or 2 – 3 h (P ＜ 0.05). The urine volume showed that the diuretic effect intensity in the low,medium and high dose group was 130.0%,140.0% and 155.7% compared with the blank control group. The differences among each groups were statistically significant (P ＜ 0.05). No severe toxicity response and death were observed. Conclusion: Paichuan tablets has diuretic effect. The effective dose is 9.6 g·kg-1in crude drug,which is 15 times of the adult planning dose. The maximum tolerated dose (MTD) is greater than 333.8 g·kg-1in crude drug for 4 hours twice dose regimen,which is 521.6 times of the clinical planning daily dose.

Paichuan tablets; Diuretic effect; Acute toxicity test

R917

A

1672 - 8157(2016)01 - 0014 - 03

國家科技重大專項（2009ZXJ09001-022）

辛艷茹，女，主任藥師，主要從事醫(yī)院藥學管理工作。E-mail：xinyanru@sina.cn

馬萍，女，副主任藥師，主要從事軍特藥及醫(yī)院新制劑的研發(fā)。E-mail：maping691009@126.com

（2015-08-10

2015-11-19）