金銀花中綠原酸提取純化工藝研究進展

摘要：在查閱、收集大量國內(nèi)金銀花中綠原酸提取、分離純化工藝文獻的基礎(chǔ)上，綜述近幾年來金銀花中綠原酸的提取、分離純化工藝研究進展，旨在為進一步開展金銀花相關(guān)研究提供理論參考。

關(guān)鍵詞：綠原酸；金銀花；提取；純化

中圖分類號：R932 文獻標(biāo)識碼：A 文章編號：1674-1161（2016）07-0055-03

金銀花（Flos Lonicerae）為忍冬科植物忍冬的干燥花蕾或初開花，具有清熱解毒、涼散風(fēng)熱、保肝利膽等功效，是常用中藥材之一。金銀花之所以具有清熱解毒等功效，是因為其含有一種有效成分—綠原酸（chlorogenic acid）。綠原酸是一種多酚類化合物，分式子為C16H18O9，易溶于水、醇、丙酮等，具有抗氧化、抗菌、抗病毒、抗腫瘤、降血壓、降血脂、提高白細胞數(shù)量、增強免疫調(diào)節(jié)、增香護色等作用。近年來，常以綠原酸含量高低來評價金銀花質(zhì)量好壞。國內(nèi)對于金銀花中綠原酸的提取、分離純化工藝等進行了大量研究，在查閱收集大量文獻的基礎(chǔ)上，綜述近幾年來金銀花中綠原酸的提取、分離純化工藝研究進展，旨在為相關(guān)研究提供參考。

1 金銀花中綠原酸提取方法

1.1 溶劑提取法

用溶劑提取金銀花中綠原酸是較為傳統(tǒng)的提取工藝，按提取介質(zhì)分為水提法和醇提法，按提取方式分為煎煮法和回流法。其中水提法成本低，操作簡單，但因提取物中蛋白質(zhì)、多糖、鞣質(zhì)等雜質(zhì)比較多，提取液易發(fā)霉等原因而應(yīng)用較少。目前較為常用的是醇提回流法，與水提法相比，該法提取時耗用大量乙醇，加大了生產(chǎn)成本，但提取物中水溶性雜質(zhì)少，且提取液不易發(fā)霉變質(zhì)，后期處理較方便。近幾年金銀花中綠原酸醇提研究的工藝參數(shù)見表1。

1.2 超聲波輔助提取

超聲波輔助提取是在水浸提的同時加超聲波輔助。此法不僅縮短提取時間、提高提取率，同時避免高溫對有效成分的影響。

袁飛采用正交試驗優(yōu)化綠原酸超聲波提取工藝，確定影響超聲提取綠原酸的因素為溶劑類型>預(yù)處理>提取時間>物料比，最佳提取工藝為：60%乙醇為溶劑，物料比1︰30，提取時間45 min，遠紅外微波1 min。試驗結(jié)果還表明，溶劑為60%乙醇得到的綠原酸含量比水、乙酸乙酯高近2倍。同時，微波破壁浸提加速綠原酸提取速率，超聲提高提取率。周蓮比較超聲波和索氏提取金銀花葉中綠原酸的效果，結(jié)果表明：超聲法的最優(yōu)工藝條件為提取溫度60 ℃、提取時間240 min、乙醇濃度35%、超聲功率200 W、料液比1︰40，綠原酸得率10.5 mg/g；索氏法的最優(yōu)工藝條件為提取時間240 min、乙醇濃度55%、料液比1︰10，綠原酸得率10.18 mg/g。從結(jié)果可以看出，雖然超聲法的得率和索氏提取法的得率幾乎一樣，但超聲提取的原料用量更少且能控制提取溫度。

1.3 微波輔助提取

微波輔助提取是在水浸提的同時加入微波，與傳統(tǒng)的水浸提法相比，微波輔助提取具有選擇性高、操作時間短、溶劑消耗小、有效成分收率高的特點。

李燕婷等研究乙醇體積分?jǐn)?shù)、料液比、微波功率和微波處理時間對綠原酸提取率的影響，采用單因素試驗和正交試驗確定微波輔助提取法的最佳工藝為：乙醇體積分?jǐn)?shù)60%、微波處理時間9 min、微波功率300 W、料液比1︰10（g︰mL），提取率3.779%；與傳統(tǒng)提取方法相比，操作時間明顯縮短，且無需回收溶劑。

張霞等以甲醇濃度、料液比、提取時間為考察因素，以提取液在327 nm波長的吸光度為響應(yīng)值，采用響應(yīng)曲面法確定最佳提取工藝為：43%的甲醇溶液做提取劑，液料比40 mL/g，微波功率400 W，提取時間8 min，綠原酸提取率為7.62%。

尤秀麗、肖卓炳等分別采用微波超聲雙輔助提取綠原酸，結(jié)果均表明：采用超聲波和微波雙輔助提取技術(shù)得到的綠原酸提取率較單獨采用超聲波或微波輔助得到的綠原酸高。

1.4 其他提取方法

除以上常用的提取方法外，有很多研究采用其他提取技術(shù)，如酶解法輔助提取、酶法輔助聚二乙醇（PEG）-200提取、微波輔助聚二乙醇（PEG）提取、破壁法輔助提取等，均取得了較好的提取效果。

2 金銀花中綠原酸純化方法

2.1 大孔樹脂柱層析

大孔樹脂吸附量大、選擇性好、易解吸、易再生、成本低、效率高，特別適用水溶性化合物的提取分離。利用大孔吸附樹脂分離純化綠原酸，工藝較簡單、成本低、產(chǎn)率高，現(xiàn)較多采用。

龔志華以金銀花粗提物為原料，比較NKA-2、D1400、聚酰胺、HP2MGL、ADS-21、D101及AB-8 等7種大孔吸附樹脂對金銀花綠原酸靜態(tài)吸附與解吸的效果，結(jié)果表明，NKA-2樹脂吸附效果最好，靜態(tài)飽和吸附量可達212.17 mg/g，在乙醇含量為90%下的解吸率達81.4%，綠原酸純度可達53.07%，得率達73.33%。蘭雪萍、凌益平等分別考察各種類型的大孔樹脂對金銀花中綠原酸的提取，結(jié)果表明，HPD450大孔樹脂、ADS-21型大孔樹脂和D101型大孔樹脂均對綠原酸有較好的純化效果，可用工業(yè)化大生產(chǎn)。

2.2 膜分離

膜分離技術(shù)對無機物、有機物等均適用，應(yīng)用范圍廣泛，尤其適用于對熱過敏物質(zhì)的分離。大多數(shù)膜分離過程不發(fā)生相的變化，具有無需加熱、能耗低、不需添加任何物質(zhì)的優(yōu)點。但膜面易污染，耐壓性、耐熱性、耐溶劑能力有限。

高紅寧等采用醇沉、離心-超濾、微濾-超濾、大孔吸附樹脂等4種工藝對金銀花水提液進行精制，并采用HPLC法測定金銀花水提液中綠原酸的含量。結(jié)果表明，金銀花水提液經(jīng)醇沉、離心-超濾、微濾-超濾、大孔吸附樹脂工藝處理后，其綠原酸的轉(zhuǎn)移率分別為59.30%，83.07%，80.13%，23.47%；固形物去除率分別為36.59%，40.12%，39.81%，90.07%。范遠景等以金銀花為原料，以平均通量、膜截留率、綠原酸透過率為指標(biāo)，比較3種微濾膜（MF1，MF2和MF3）、4種超濾膜（UF1、UF2、UF3和UF4）及2種兩種反滲透膜（RO1和RO2）對綠原酸提取液的過濾特性，并研究濃縮液洗濾對綠原酸截留率的影響。試驗結(jié)果表明：MF1、UF1和RO2膜的過濾性能明顯優(yōu)于其他同類型膜，使用MF1-UF1-RO2膜組合處理效果最佳，其綠原酸回收率可達67.75%，產(chǎn)品純度可達13.21%以上。

潘廣勇等以金銀花為原料，通過微濾、超濾、納濾3級膜純化金銀花中的綠原酸。結(jié)果表明：微濾膜Ⅱ、超濾膜Ⅰ、納濾膜Ⅰ組合能達到純化效果，微濾膜通量186.7 L/hm2，透過率92.2%；超濾膜通量50.1 L/hm2，透過率89.7%；納濾膜通量32.8 L/hm2，透過率1.5%。

2.3 凝膠柱層析

徐曉偉、闕斐在對金銀花提取液進行D101大孔樹脂純化和絮凝處理的基礎(chǔ)上，再通過SephadexLH-20層析柱進行分離純化，結(jié)果表明，綠原酸的純度分別為86.16%和98.3%。

3 結(jié)語

金銀花是一類傳統(tǒng)中藥材，具有較高的藥用價值和保健價值，而綠原酸是金銀花中的有效成分，開展綠原酸提取、分離純化等方面的研究，對金銀花資源的進一步開發(fā)利用具有重要意義。

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