兩種設備制備冷沉淀的效果比較

李建偉 蒲維薇 肖樂宇

(新鄉市中心血站 成分科 新鄉 河南 453000)

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兩種設備制備冷沉淀的效果比較

李建偉 蒲維薇 肖樂宇

(新鄉市中心血站 成分科 新鄉 河南 453000)

目的 對比分析恒溫搖擺式水浴箱(CT-4T.6C型)和冷沉淀凝血因子制備儀(ZBK-LCD-A1型)制備的冷沉淀凝血因子的回收率和合格率。方法 按照CT-4T.6C型恒溫搖擺式水浴箱的操作說明書操作，隨機制備30袋冷沉淀凝血因子，共20批次。 按照ZBK-LCD-A1型冷沉淀凝血因子制備儀操作說明書操作，隨機制備30袋冷沉淀凝血因子，共20批次。對比分析兩種設備制備的回收率和合格率。結果 采用冷沉淀凝血因子制備儀ZBK-LCD-A1所制備的冷沉淀凝血因子的回收率與合格率分別達95%、100%，明顯高于搖擺式水浴箱CT-4T.6C的75%和70%，差異有統計學意義(P<0.05)。結論 ZBK-LCD-A1型冷沉淀凝血因子制備儀所制備的冷沉淀凝血因子回收率及合格率高，且制備時間短，容量控制精準，在制備過程中能嚴格控制融化的環境溫度、水浴溫度和時間，有效減少人為因素的影響，最大限度地獲得Ⅷ因子、纖維蛋白原，值得推廣應用。

冷沉淀凝血因子；回收率；合格率

冷沉淀凝血因子是指采用特定的方法將保存期內的新鮮冰凍血漿在1～6 ℃融化后，分離出大部分的血漿，并將剩余的冷不溶解物質在1 h內速凍呈固態的成分血[1]。由于冷沉淀中不穩定凝血因子(Ⅷ因子)的損耗會隨著制備時間的延長和溫度的升高而增加。因此，不同制備工藝和設備所制備出的冷沉淀凝血因子在質量上存在較大的差異。良好而專業的融化設備和制備技術是保證冷沉淀凝血因子質量的重要因素[2]。本文分別采用恒溫搖擺式水浴箱(CT-4T.6C型)和冷沉淀凝血因子制備儀(ZBK-LCD-A1型)制備冷沉淀凝血因子，并對其質量進行比較，具體如下。

1 材料和方法

1.1 儀器 6000i大容量低溫離心機(Thermo Fisher)、血漿速凍機(鄭州飛龍公司)、EPAMATIC-SL(Ⅲ)高效型全自動全血成分分離機(德國LMB科技有限公司)、三洋低溫冷凍冰箱(日本三洋電機株式會社)、CT-4T.6C型恒溫搖擺式水浴箱(美國CytoTherm公司)、ZBK-LCD-A1型冷沉淀凝血因子制備儀(山東中保康)、CA-510血凝儀(希森美康醫用電子有限公司)、Ⅷ因子活性測定試劑盒(希森美康醫用電子有限公司)、纖維蛋白原測定試劑盒(希森美康醫用電子有限公司)。

1.2 原料漿的制備 采用山東威高集團生產的一次性白細胞濾除五聯袋(抗凝劑CPD)采集全血400 ml，于6 h內分離血漿。將血漿袋和空轉移袋疊加好迅速放入血漿速凍機進行速凍，在1 h內速凍呈固態的新鮮冰凍血漿。速凍后置入-35 ℃以下低溫冰箱中保存。實驗期內共計制備1 200袋原料漿。

1.3 操作方法 同時用兩種設備進行制備，隨機從-35 ℃以下低溫冰箱中取出保存的原料漿進行操作。(每次每種設備制備30袋，共計60袋)。

1.3.1 CT-4T.6C型恒溫搖擺式水浴箱操作過程 操作前人工開機將恒溫搖擺式水浴箱中的水預冷至6℃。每次隨機將30袋血漿垂直置于恒溫(6 ℃)的循環水浴箱中，水浴箱自動搖擺30 min后血漿開始融化，人工使融化的血漿虹吸到空轉移袋。當原血漿袋中剩余的白色絮狀冷不溶解物附著于冰塊上約為(25±5)ml時即成為冷沉淀。此過程約需50 min。

1.3.2 ZBK-LCD-A1型冷沉淀凝血因子制備儀操作過程 根據設定時間設備自動進水開機預冷。當制備儀內的環境溫度降至2～8 ℃、水溫降至2～6 ℃并恒定時，根據設備的智能顯示屏提示進行操作，每次將30袋新鮮冰凍血漿逐一放入上稱重掛盒(血漿)和下稱重掛盒(空轉移袋)，血袋管路安裝于蠕動泵及夾管閥內。啟動后待上稱重掛盒稱重完畢并存儲第一組數據后，上稱重掛盒自動沉入水浴箱，血漿袋垂直固定浸于水浴中進行血漿融化。新鮮冰凍血漿在2～6 ℃水浴箱內，經一段時間后蠕動泵開始工作，夾管閥打開，管路自動形成虹吸。融化的血漿經虹吸流入下稱重掛盒中的空轉移袋內，冷沉淀開始制備。這時設備對放入下稱重掛盒中的轉移袋和在融化過程中的血漿進行實時稱重(第二組數據)；并對存儲的第一組數據和實時稱重的第二組數據進行差值換算，當差值達到設定的參考值[(25±5)ml]后，控制系統發送信號通知夾管閥將血漿管路夾緊閉合，使管路內的血漿停止流動。上稱重掛盒中附著在血漿冰塊上的白絮狀冷不溶解物即為冷沉淀。此過程約需40 min。制備完成后上稱重掛盒自動將血漿袋從水浴箱內提升上來，取出血漿袋(冷沉淀)和轉移袋(冷上清)進行熱合，分別置于低溫速凍機進行速凍并保存。

1.4 檢測指標 將兩種設備制備的冷沉淀凝血因子從冰箱內取出，同時置于37 ℃水浴箱中融化，待其完全融化后各取2 ml冷沉淀凝血因子，嚴格按照希森美康公司生產的CA-510血凝儀操作使用說明書和纖維蛋白原測定試劑盒、Ⅷ因子活性測定試劑盒試劑說明書進行檢測，采用凝血酶法檢測纖維蛋白原，采用一期法檢測Ⅷ因子。Ⅷ因子回收率=冷沉淀Ⅷ因子獲得量(IU)/原料血漿Ⅷ因子總量(IU)×100%。

1.5 統計學處理 采用SPSS 18.0 統計學軟件進行數據處理，率的比較采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

通過兩種設備制備共計20批次1 200袋冷沉淀凝血因子。采用冷沉淀凝血因子制備儀ZBK-LCD-A1所制備的冷沉淀凝血因子的回收率與合格率分別達95%、100%，明顯高于搖擺式水浴箱CT-4T.6C的75%和70%，差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 兩種設備制備冷沉淀凝血因子的效果比較

3 討論

冷沉淀凝血因子主要富含Ⅷ因子、纖維蛋白原等活性物質。Ⅷ因子是一種性質不穩定的凝血因子，在2～6 ℃水浴中制備的回收率較高，但在8 ℃以上會產生自融[3]。血漿在1 h內融化所制備的冷沉淀質量最好[4]，故冷沉淀的制備對融化溫度、融化時間(速度)及操作方法均有較高的要求。

CT-4T.6C型恒溫搖擺式水浴箱的上水、排水均需人工操作，在制備時僅有一個水環境的局域溫度控制，虹吸出的血漿長時間暴露在外界高溫條件下，容易引起蛋白質等有效成分的破壞和損失；水浴箱體積小，且只能通過搖擺來達到水溫均衡和加速融化的目的，溫度交換慢，混勻不充分，影響融化速度。在搖擺過程中血袋不能始終處于垂直狀態，容易把剛剛析出未抱團的冷沉淀物質晃散而隨血漿被吸出，造成成品效價不足。本研究觀察到，在制備時有部分絮狀物(富含Ⅷ因子、纖維蛋白原等)會隨著融化的血漿轉移到空袋中。隨著血漿的不斷融化，轉移袋內液體血漿中的絮狀物成分也會明顯增多[5]。這實際上是纖維蛋白原等不溶物質未附著在冰塊上或血袋內表面，而是隨血漿流出來，這樣極易造成終產品的不合格。另外，其在開放環境下進行制備，環境溫度不能受到良好的控制，溫度偏高，受人為因素影響較多，這些因素均能直接影響冷沉淀中Ⅷ因子、纖維蛋白原的含量和回收率。

ZBK-LCD-A1型冷沉淀凝血因子制備儀具有微電腦自動系統，可自動上水、排水，并精確地將設備內的環境溫度控制在2～8 ℃，水浴溫度控制在2～6 ℃。上稱重掛盒自動升降確保血漿袋全部自動垂直固定浸于水浴中，通過低溫循環水流不停作用于血漿袋以加速融化。在融化虹吸階段，血漿中的絮狀物無明顯轉移現象，另蠕動泵的應用有效避免了血漿在形成虹吸過程中受人為因素的影響，這些均有利于Ⅷ因子、纖維蛋白原最大限度的收集以提高Ⅷ因子、纖維蛋白原的回收率。該設備為一鍵式智能操作，自動化程度高，安全可靠，有效節省人力，提高工作效率。

由以上兩種設備相比可知，ZBK-LCD-A1型冷沉淀凝血因子制備儀具有設備操作簡便、制備時間短、容量控制精準，在制備過程中能嚴格控制融化的環境溫度、水浴溫度和時間，有效減少人為因素的影響，最大限度地獲得Ⅷ因子、纖維蛋白原，回收率、合格率明顯高于CT-4T.6C型恒溫搖擺式水浴箱，值得推廣應用。

[1] 中華人民共和國衛生部,中國國家標準化管理委員會. GB18469-2012全血及成分血質量要求[S].北京:中國標準出版社,2012.

[2] 孫森,杜濱,許雷.虹吸法制備冷沉淀的關鍵控制點[J].中國醫療前沿,2008 3(22):109.

[3] 高峰.臨床輸血與檢驗[M].北京:人民衛生出版社,2007:139-140.

[4] 楊紹明.冷沉淀制備的關鍵點控制[J].贛南醫學院學報,2006,26(1):86.

[5] 陳峰,王麗,周華平,等.虹吸法制備冷沉淀的容量控制探討[J].中國輸血雜志,2011,24(11):974-975.

R 457.1+2

10.3969/j.issn.1004-437X.2016.10.011

2016-01-04)