血栓通注射液對血管性癡呆大鼠的行為學改善作用研究*

王金鑫，楊紅云，郭虹，柴麗娟，張玥，王少峽，胡利民

（天津中醫藥大學中醫藥研究院，天津市中藥藥理學重點實驗室，教育部方劑學重點實驗室，天津300193）

血栓通注射液對血管性癡呆大鼠的行為學改善作用研究*

王金鑫，楊紅云，郭虹，柴麗娟，張玥，王少峽，胡利民

（天津中醫藥大學中醫藥研究院，天津市中藥藥理學重點實驗室，教育部方劑學重點實驗室，天津300193）

[目的]探討注射用血栓通（凍干）對血管性癡呆（VD）大鼠行為學的改善作用。[方法]將SD大鼠隨機分為4組：假手術組、模型組、他克林組、血栓通組，每組20只，采用結扎雙側頸總動脈的的方法復制VD大鼠模型，以他克林為對照，通過對給藥期間各組大鼠死亡率和體質量的變化，觀察生存質量的變化；通過水迷宮和Y迷宮的方法分別觀察術后20 d各組大鼠行為學的變化。[結果]與模型組比較，各組間死亡率及體質量變化無統計學意義。與假手術組比較，模型組大鼠學習記憶能力下降，表現為穿過平臺的次數減少（P＜0.01）；與模型組比較，血栓通可以使模型大鼠穿過平臺次數增加（P＜0.01），和陽性對照藥物他克林藥效相當；Y迷宮中，與模型組比較，低劑量組的空間記憶能力明顯提高（P＜0.05）。[結論]注射用血栓通（凍干）對VD大鼠的學習記憶能力有改善作用。

血管性癡呆；行為學；水迷宮；注射用血栓通

血管性癡呆（VD）是由多次腦卒中或長期慢性腦缺血所致的大腦皮質獲得性高級功能進行性衰退性疾病[1－3]。其臨床的主要表現為記憶力下降，表情淡漠或呆滯，人格的改變等[4－5]。隨著中國老齡化社會的到來，近年VD的發病率明顯上升，所以尋找有效預防和治療VD的藥物迫在眉睫。三七為五加科植物三七[Panax notoginseng（Burk.）F.H.Chen]的干燥根和根莖。主要功效為散瘀止血，消腫定痛，在臨床上及制劑方面應用都非常廣泛。注射用血栓通（凍干），采用三七主根為原料制成，主要成分為三七總皂苷，具有活血祛瘀，通脈活絡，擴張血管，改善腦供血、增加腦灌注、減輕缺血所致病理損害，降低膽固醇，抑制血小板聚集，降低血黏度等多種作用，在臨床中應用廣泛。注射用血栓通對VD是否具有治療和改善作用還未見報道。本實驗通過對大鼠雙側頸總動脈永久性結扎，建立VD大鼠模型。觀察注射用血栓通對血管性癡呆大鼠的神經保護性作用，為注射用血栓通在VD中的臨床應用提供科學理論依據。

1　材料與方法

1.1實驗材料

1.1.1實驗動物健康雄性SPF級SD大鼠80只，體質量250～280 g，由北京維通利華實驗動物技術有限公司提供（科學研究用SPF級SD大鼠，合格證號：11400700091178）。

1.1.2藥品及試劑注射用血栓通（凍干）：廣西梧州制藥股份有限公司生產（批號：13102015），他克林：Sigma公司生產，其他為市售分析純。

1.2方法

1.2.1分組及給藥SD大鼠進鼠后使其適應飼養環境1周，然后將大鼠按體質量由大到小排列，然后隨機分為4組：假手術組、模型組、他克林組、注射用血栓通組，每組20只。二次手術后第2天開始給藥，連續給藥至取材。注射用血栓通用生理鹽水溶解，進行腹腔注射，劑量50 mg/kg；假手術組和模型組腹腔注射等量的生理鹽水；他克林用生理鹽水配成混懸液，進行腹腔注射，劑量10 mL/kg。

1.2.2模型復制方法參照文獻[6]，將SD大鼠用10%的水合氯醛進行麻醉（3 mL/kg，），仰臥于固定臺上，固定四肢，頸部備皮并用碘伏進行消毒，頸部正中切口，分離左側頸總動脈，用4號線結扎，縫合皮膚，1周后重新麻醉，分離右側頸總動脈并用4號線進行結扎，縫合皮膚，兩次手術縫合傷口后都要在切口處局部注射硫酸慶大霉素0.2萬U。假手術組只分離頸總動脈，穿線但不結扎，其他處理一樣。

1.2.3檢測方法

1.2.3.1水迷宮檢測水迷宮實驗是研究大鼠的海馬等腦區受到損害后的學習、記憶和空間定向以及認知能力的實驗。分為環境熟悉、定位巡航和空間探索3個階段。第一階段主要使大鼠熟悉實驗環境及實驗人員；定位航行階段，主要記錄大鼠的逃避潛伏期的變化；空間探索階段，主要記錄大鼠穿過平臺的次數。

1.2.3.2Y迷宮檢測Y迷宮實驗是評價動物空間記憶能力的實驗，主要用于測試實驗動物的短期記憶能力。Y迷宮是將大鼠放在Y形迷宮一個特定的臂末端，自動記錄5 min內大鼠進入各個臂的順序和次數。記錄實際交替數，并計算自發交替百分數，記錄總進臂數作為自發活動的指標。

1.3統計學處理所有實驗數據采用SPSS 18.0軟件進行統計分析，死亡率統計采用百分比表示，其他數據采用均數±標準差（±s）表示。各組死亡率之間的差異進行卡方檢驗，各組大鼠的體質量變化和逃避潛伏期變化用重復測量的方差分析；各組大鼠穿越平臺次數和Y迷宮自發交替百分數先檢測其正態性及方差齊性，如果符合正太分布且方差齊則各組間比較采用單因素方差分析，然后用Newman－Keuls檢驗進行組間兩兩比較，若不符合正態分布或方差不齊，則采用秩和檢驗，P＜0.05位差異具有統計學意義。

2　結果

2.1各組大鼠死亡率及體質量變化成模后，統計各組大鼠在給藥期間的死亡率，經卡方檢驗，各組在實驗各個時期的死亡率沒有差異。從給藥期間各組大鼠的體質量變化中可以看出，血栓通組在各個時期的體質量變化與模型組相比沒有差異。見表1、表2。

表1　各組大鼠死亡率統計Tab.1　Morality of rats in each group%

表2　各組大鼠體質量變化（±s）Tab.2　Body weight of rats in each group（±s）g

表2　各組大鼠體質量變化（±s）Tab.2　Body weight of rats in each group（±s）g

組別動物數第1周第2周第3周第4周假手術組16274±18.4 266±16.7 327±18.9 345±26.4模型組19272±15.5 267±23.0 305±23.8 332±36.5他克林組（10 mL/kg）17271±15.5 257±10.6 276±38.9 300±41.7血栓通組（50 mg/kg）16271±15.0 271±15.0 257±16.6 292±22.7組別動物數第5周第6周第7周第8周假手術組16357±26.3 390±19.8 408±28.2 424±34.4模型組19351±25.9 373±29.0 382±25.4 391±25.1他克林組（10 mL/kg）17311±49.4 335±58.8 339±60.3 347±68.4血栓通組（50 mg/kg）16307±23.2 324±29.0 355±41.4362±48.6

2.2水迷宮結果統計從水迷宮中得到兩組數據，分別是定位航行階段各組逃避潛伏期的變化（見表3）和空間探索階段各組穿越平臺的次數（見表4）。從各組逃避潛伏期的變化來看，第1次定位航行時模型組與假手術組相比較，逃避潛伏期有統計學差異（P＜0.05），表明模型組巡航能力的下降；各組進入平臺期之間無統計學差異。空間探索階段，與假手術組比較，模型組大鼠學習記憶能力下降，表現為穿過平臺的次數減少（P＜0.01）；與模型組比較，血栓通組可以使大鼠穿過平臺次數增加（P＜0.01），和陽性對照藥物他克林藥效相當。

表3　各組大鼠逃避潛伏期的變化（±s）Tab.3　Escape latency of rats in each group（±s）

表3　各組大鼠逃避潛伏期的變化（±s）Tab.3　Escape latency of rats in each group（±s）

注：與假手術組比較，*P＜0.05。

組別動物數逃避潛伏期（s）第1次第2次第3次第4次第5次假手術組1655.8±28.94 19.8±18.63 16.3±16.4817.4±14.9310.3±10.37模型組1968.9±29.16*34.9±29.85 22.2±21.1523.7±21.9311.9±13.04他克林組（10 mL/kg）1756.3±31.11 31.2±26.52 27.7±26.0816.4±15.4717.0±19.17血栓通組（50 mg/kg）1769.1±25.86*40.2±34.00 28.6±30.7328.5±27.3920.7±20.22

表4　各組大鼠穿過平臺的次數（±s）Tab.4　Through the platform number of rats in each group（±s）

表4　各組大鼠穿過平臺的次數（±s）Tab.4　Through the platform number of rats in each group（±s）

注：與假手術組比較，##P＜0.01；與模型組比較，**P＜0.01。

組別動物數穿過平臺次數（次）假手術組162.6±1.58模型組191.3±0.50##他克林組（10 mL/kg）173.7±1.65**血栓通組（50 mg/kg）153.4±0.88**

2.3Y迷宮結果從Y迷宮中得到自發交替百分比（見表5）。與模型組比較，血栓通組自發交替百分比明顯增多（P＜0.05），說明血栓通對慢性腦缺血大鼠空間記憶障礙有改善作用。

表5　Y迷宮中自發交替百分數（±s）Tab.5　Spontaneous alternation percentage of Y-maze（±s）

表5　Y迷宮中自發交替百分數（±s）Tab.5　Spontaneous alternation percentage of Y-maze（±s）

注：與模型組比較，*P＜0.05。

組別動物數穿過平臺次數（次）假手術組853.8±24.5*模型組954.5±34.9*他克林組（10 mL/kg）942.4±31.1*血栓通組（50 mg/kg）567.2±19.6*

3　討論

VD是指各種腦血管病引起腦功能障礙而產生的獲得性智能損害綜合征，VD在歐洲和美國是僅次于阿茨海默氏病的第2位的最常見癡呆[7]。然而由于生存環境、生活方式、體質差異等原因,在亞洲及許多發展中國家,VD的發病率超過了阿茨海默氏病[8-9]。隨著中國老齡化社會的到來，VD的發病率也在逐年提高，VD已經成為威脅老年人身心健康的主要因素。因此筆者對VD的研究也具有十分重要的臨床及社會現實意義。

以往大量臨床及科學實驗研究[10-16]證明VD的致病過程與多種因素相關，主要的致病機制包括：炎性、凋亡、氧化應激、突觸結構和功能異常、中樞膽堿能及單胺能系統神經遞質功能紊亂、能量代謝障礙等。目前臨床常用的癡呆治療藥物[17-21]有：抗氧化劑、神經營養藥物、膽堿酯酶抑制劑、鈣通道阻滯劑、中醫中藥等，但這些藥物的長期治療效果有待進一步論證。

本實驗通過對SD大鼠兩側頸總動脈永久性結扎，得到VD模型。通過記錄給藥期間的死亡率和體質量變化，考察血栓通對VD大鼠生存質量的影響；采用水迷宮和Y迷宮的行為學方法，考察其對學習和記憶能力的影響。實驗表明，血栓通組的水迷宮的穿越平臺次數及Y迷宮的自發交替百分比較模型組有明顯的提高，說明血栓通對血管性癡呆大鼠的學習及記憶有明顯的改善作用。筆者的研究為注射用血栓通在VD中的臨床應用提供了一定的科學實驗依據。

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（本文編輯：馬英，滕曉東）

Study of the behavioral improvement effects of Xueshuantong for injection on vascular dementia rats

WANG Jin-xin,YANG Hong-yun,GUO Hong,CHAI Li-juan,ZHANG Yue,WANG Shao-xia,HU Li-min
（Institute of Traditional Chinese Medicine,Tianjin Key Laboratory of Chinese Medicine Pharmacology, Key Laboratory of Pharmacology of Traditional Chinese Medical Formulae,Ministry of Education, Tianjin University of Traditional Chinese Medicine,Tianjin 300193,China）

[Objective]To research the behavioral improvement effects of Xueshuantong for injection(lypolized)in curing vascular dementia(VD)rats.[Methods]SD rats were randomly divided into 4 groups(n＝20 per group):Sham group,Model group,Tacrine (Control)group and Xueshuantong group.All groups in addition to sham group

a surgery called bilateral common carotid artery occlusion(BCCAO)to establish VD models.The survival quality of all rats was recorded.Water morris and Y-maze were taken to be behavioral test.[Results]Compared with model group,there was no statistical significance among all groups in death rate and weight’s change of rat.Compared with sham group,learning and memory ability of model group dropped with a reduced number of crossing the platform(P＜0.01)in water morris test.Compared with model group,Xueshuantong could increase the number of crossing the platform(P＜0.01)in water morris test which is the same as Tacrine group.Compared with model group,spatial memory ability of low dose group (Xueshuantong)obviously improved in Y-maze test.[Conclusion]Xueshuantong for injection(lypolized)could improve learning and memory ability of VD rats.

vascular dementia；behavioral test；water morris,；Xueshuantong for injection

R749.1

A

1672-1519（2016）11－0682－04

“重大新藥創制”科技重大專項課題（2012ZX09 101201－004）；天津市應用基礎與前沿技術研究計劃（14JCYBJC28900）；廣西科學研究與技術開發計劃（14125008－2－5）。

王金鑫（1990－），男，碩士研究生，研究方向為腦血管病及糖尿病并發癥。

王少峽，E－mail:wangshaoxia1@163.com。

（2016-04-26）