土貝母正丁醇部位化學(xué)成分研究

李 娟，何 峰，尹 嫻，洪宗國(guó)，劉新橋，向梅先

(中南民族大學(xué) 藥學(xué)院，武漢 430074)

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土貝母正丁醇部位化學(xué)成分研究

李 娟，何 峰，尹 嫻，洪宗國(guó)，劉新橋，向梅先*

(中南民族大學(xué) 藥學(xué)院，武漢 430074)

采用薄層色譜，正相、反相硅膠，葡聚糖凝膠，半制備高效液相柱對(duì)土貝母正丁醇部位進(jìn)行了分離研究.分離得到10個(gè)化合物，分別為：6-C-葡萄糖-5，7，3′，4′-四羥基黃酮 (1)，胡蘿卜苷 (2)，胡蘿卜苷棕櫚酸酯(3)，豆甾醇 (4)，β-谷甾醇(5)，β-谷甾醇棕櫚酸酯 (6)，正丁基-β-D-吡喃果糖苷(7)，大黃素(8)，大黃素甲醚(9)，麥芽酚(10).除化合物(8)外，其余化合物都是首次從該植物中分離得到.

土貝母； 正丁醇部位； 化學(xué)成分研究

乳腺癌是全球婦女面臨最為常見(jiàn)和危險(xiǎn)的癌癥，其發(fā)病率和死亡率都很高.目前對(duì)乳腺癌的治療，早期采用切除乳房的方法；對(duì)于中晚期，癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的患者，采用放化療的方法，此種方法副作用大，病人生活質(zhì)量低.因而，越來(lái)越多的專(zhuān)家將目光聚焦在中醫(yī)藥上，希望能在中藥中尋求療效好、副作用低的藥材.中藥土貝母是一種傳統(tǒng)藥材，具有較好的抗癌活性，尤其在對(duì)乳腺癌的治療方面取得了較好的研究效果.古書(shū)記載，土貝母具清熱解毒，散結(jié)消腫之功效.主治：內(nèi)服治療淋巴結(jié)結(jié)核，骨結(jié)核，乳腺炎，瘡癰腫毒；外用治蛇、蟲(chóng)咬傷，外傷出血等癥[1].現(xiàn)代藥理研究表明：土貝母具有抗腫瘤活性[2-3].土貝母來(lái)源于葫蘆科植物土貝母屬土貝母Bolbostemmapaniculatum(Maxim.) Franquet，也稱(chēng)為藤貝母，以鱗莖入藥.主要生于山坡草叢或平地，在河北、山西、陜西、山東、甘肅、寧夏、河南和云南等省區(qū)有大量分布，現(xiàn)有栽培.秋、冬季節(jié)采挖，洗凈，掰開(kāi)，煮至無(wú)白心，取出曬干保存.基于土貝母的較好的應(yīng)用功效和具抗癌的潛在用途，為了弄清其抗腫瘤的物質(zhì)基礎(chǔ)，本文對(duì)土貝母的化學(xué)成分進(jìn)行了相關(guān)研究.采用正相硅膠柱層析、凝膠色譜、制備薄層色譜、半制備高效液相色譜等多種方法，從土貝母正丁醇部位分離得到并鑒定了10個(gè)化合物.

1 材料和方法

1.1 材料

土貝母藥材采自湖北恩施地區(qū)，經(jīng)中南民族大學(xué)藥學(xué)院萬(wàn)定榮教授鑒定為葫蘆科土貝母屬植物土貝母Bolbostemmapaniculatum(Maxim.) Franquet [ActinostemmapaniculatumMaxim.] 的鱗莖.

1.2 儀器

ZF-6型三用紫外光譜儀；Bruker AM-400型核磁共振儀；Finnigan LCQ-Deca型質(zhì)譜儀；戴安Ultimate 3000型高效液相色譜儀；5C18-MS-Ⅱ(10mm×250mm) 型色譜柱；RE-52AA型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海亞榮生化儀器廠；KQ-500E型超聲波清洗儀；紫外分光光度儀；Nicolet NEXUS-670傅里葉變更紅外光譜儀.

1.3 試劑

石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、乙醇、甲醇為分析純(國(guó)藥集團(tuán))，95%的乙醇為工業(yè)級(jí)，色譜級(jí)甲醇(天地公司).柱層析用硅膠(100～200目，200～300目)，硅膠G高效預(yù)制板(青島海洋化工產(chǎn)).

1.4 提取與分離

取土貝母10 kg 淋洗后曬干，用粉碎機(jī)粉碎成粗粉.加10倍量的95% 的乙醇在室溫下浸泡提取3 次，每次24 h.過(guò)濾，合并濾液，減壓濃縮得浸膏2.1 kg，將浸膏用90%甲醇水溶液溶解，然后用等體積石油醚萃取.減壓回收下層的甲醇溶液得浸膏，用蒸餾水溶解浸膏后，依次用等體積乙酸乙酯和正丁醇萃取，分別減壓回收乙酸乙酯和正丁醇，得到乙酸乙酯提取物600 g(乙酸乙酯部位) 和正丁醇提取物900 g(正丁醇部位)，余下為水部位，蒸干水分后稱(chēng)重(水部位) .稱(chēng)取正丁醇部位浸膏500 g上D101大孔樹(shù)脂，依次用不同比例的乙醇-水梯度洗脫( 0%，10%，30%，50%，70%，95%)，收集各洗脫液，500 mL為一餾分，TLC檢測(cè)合并相同餾分后得到Fr.1～Fr.6六個(gè)部分.其中Fr.2經(jīng)正相硅膠柱和半制備高效液相(HPLC)分離得到化合物豆甾醇(17 mg)和β-谷甾醇(9 mg); Fr.3經(jīng)正相硅膠柱分離得化合物β-谷甾醇棕櫚酸酯(21 mg)、胡蘿卜苷(23 mg)和胡蘿卜苷棕櫚酸酯(10 mg); Fr.4經(jīng)葡聚糖膠柱和半制備HPLC得化合物大黃素(6 mg)和大黃素甲醚(9 mg); Fr.5分別經(jīng)正相硅膠柱和半制備HPLC分離，得到化合物麥芽酚(14 mg); Fr.6分別經(jīng)正相硅膠柱和凝膠柱、半制備HPLC分離得到化合物正丁基-β-D-吡喃果糖苷(16 mg).

2 結(jié)構(gòu)鑒定與結(jié)果

2.1 化合物(1)6-C-葡萄糖-5，7，3′，4′-四羥基黃酮(6-C-glucose-5，7，3′，4′-tetrahydroxy flavone)

黃色粉末，分子式：C21H20O11，MW=448.37.1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ:13.54(1H，s，5-OH)，7.42(2H，m，H-2′，6′)，6.89(1H，d，J=8.2 Hz，H-5′)，6.67(1H，s，H-3)，6.48(1H，s，H-8)，4.59(1H，d，J=9.8 Hz，H-1″);13C NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ:181.9(C-4)，163.7(C-7)，163.4(C-2)，160.7(C-5)，156.2(C-9)，149.8(C-4′)，145.8(C-3′)，121.4(C-1′)，119.0(C-6′)，113.3(C-2′)，116.1(C-5′)，108.9(C-6)，103.4(C-10)，102.8(C-3)，93.5(C-8)，81.6(C-1″)，79.0(C-5″)，73.1(C-2″)，70.6(C-3″)，70.2(C-4″)，61.5(C-6″).1H NMR和13C NMR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[4-5]報(bào)道基本一致，故鑒定化合物(1)為6-C-葡萄糖-5，7，3′，4′-四羥基黃酮.

2.2 化合物(2)胡蘿卜苷(Daucossterol)

EI-MSm/z顯示分子離子峰為576.1H NMR(CD3OD):0.71(s，3H，CH3)，0.80(brs，6H，2CH3)，0.85(brs，3H，CH3)，0.88(brs，3H，CH3)，1.01(s，3H，CH3)，5.31(brs，1H)，3.40～4.60(m，11H);13C NMR (CD3OD):37.7(C-1)，30.3(C-2)，78.6(C-3)，41.1(C-4)，140.5(C-5),121.4(C-6)，31.7(C-7)，31.7(C-8)，50.8(C-9)，36.6(C-10)，20.9(C-11)，39.6(C-12),42.5(C-13)，56.7(C-14)，24.4(C-15)，28.9(C-16)，56.5(C-17)，13.2(C-18)，20.8(C-19)，36.1(C-20)，19.7(C-21)，34.6(C-22)，30.1(C-23)，46.5(C-24)，26.4(C-25)，19.3(C-26)，20.2(C-27)，23.7(C-28)，11.6(C-29)，102.2(C-1′)，75.4(C-2′)，78.8(C-3′)，71.6(C-4′)，78.4(C-5′)，62.6(C-6′).1H NMR和13C NMR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6]報(bào)道基本一致，故鑒定化合物(2)為胡蘿卜苷.

2.3 化合物(3)胡蘿卜苷棕櫚酸酯(Daucosterol palmitate)

2.4 化合物(4)豆甾醇(Stigmasterol)

2.5 化合物(5)β-谷甾醇(β-sitosterol)

2.6 化合物(6)β-谷甾醇棕櫚酸酯(β-Sitosteryl palmitate)

2.7 化合物(7)正丁基-β-D-吡喃果糖(n-butyl-β-D-fructopyranoside)

2.8 化合物(8)大黃素(Emodin)

EI-MS(m/z):270(M)，255(M-CH3)，253(M-OH)，242(M-CO);分子離子峰為270.1H NMR(CD3OD):7.11(1H，s，H-2)，7.28(1H，d，J=2.5 Hz，H-5)，7.34(1H，s，H-4)，6.68(1H，d，J=2.5 Hz，H-7)，2.41(3H，s，CH3);13C NMR(CD3OD):164.2(C-1)，107.7(C-2)，165.2(C-3)，108.6(C-4)，120.4(C-5)，148.3(C-6)，124.2(C-7)，161.0(C-8)，189.5(C-9)，181.4(C-10)，133.1(C-11)，113.6(C-12)，108.7(C-13)，135.4(C-14)，21.3(CH3).1H NMR和13C NMR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12]報(bào)道基本一致，故鑒定化合物(8)為大黃素．

2.9 化合物(9)大黃素甲醚(Emodin monomethyl ether)

EI-MS(m/z):284[M]+，256[M-CO]+，255[M-CH3O]+，241[M-COCH3]+.1H NMR(CD3OD):2.37(3H，s，CH3)，3.86(3H，s，OCH3)，6.84(1H，d，J=2.1，H-7),7.16(1H，brs，H-2)，7.24(1H，brs，H-5)，7.47(1H，brs，H-4);13C NMR(CD3OD):162.5(C-1)，106.7(C-2)，165.2(C-3)，108.2(C-4)，120.4(C-5)，148.4(C-6)，121.3(C-7)，161.0(C-8)，190.8(C-9)，182.0(C-10)，133.2(C-11)，113.4(C-12)，110.2(C-13)，135.4(C-14)，56.1(OCH3)，21.3(CH3).1H NMR和13C NMR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[13]報(bào)道基本一致，故鑒定化合物(9)大黃素甲醚．

2.10 化合物(10)麥芽酚(Maltol)

EI-MS顯示分子離子峰為126.1H NMR(CD3OD):2.35(3H，s，CH3)，6.39(1H，d，J=5.7 Hz，H-5)，7.95(1H，d，J=5.7 Hz，H-6);13C NMR(CD3OD):14.3(CH3)，113.4(C-5)，143.2(C-3)，149.3(C-2)，154.9(C-6)，172.3(C-6).1H NMR和13C NMR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[14]報(bào)道基本一致，故鑒定化合物(10)麥芽酚．

3 討論

土貝母來(lái)源于葫蘆科土貝母屬植物土貝母Bolbostemmapaniculatum(Maxim.) Franquet [ActinostemmapaniculatumMaxim.]. 以鱗莖入藥.具清熱解毒，散結(jié)消腫的功效.現(xiàn)代藥理研究表明：土貝母具有抗腫瘤活性.那么本藥材抗腫瘤的活性部位及物質(zhì)基礎(chǔ)是什么？為了弄清這個(gè)問(wèn)題，本研究首先對(duì)土貝母進(jìn)行了活性篩選研究，發(fā)現(xiàn)正丁醇部位具有較好的抗癌活性.為了進(jìn)一步弄清其抗癌物質(zhì)基礎(chǔ)，接著對(duì)該部位進(jìn)行了分離，采用D101大孔吸附樹(shù)脂和乙醇溶液梯度洗脫，合并相同RF值餾份得Fr.1～Fr.6，然后采用正相硅膠柱層析、凝膠色譜、半制備薄層色譜、半制備高效液相色譜等多種方法，從中分離得到了10個(gè)化合物，并鑒定為：6-C-葡萄糖-5，7，3′，4′-四羥基黃酮(1)；胡蘿卜苷(2)；胡蘿卜苷棕櫚酸酯(3)；豆甾醇(4)；β-谷甾醇(5)；β-谷甾醇棕櫚酸酯(6);正丁基-β-D-吡喃果糖苷(7)；大黃素(8)；大黃素甲醚(9)；麥芽酚(10).所有化合物的結(jié)構(gòu)如圖1所示.查閱文獻(xiàn)資料，除化合物(8)外，其余化合物都是首次從該植物中分離得到，下一步本課題組將對(duì)分離得到的化合物進(jìn)行抗腫瘤活性的篩選，以弄清其抗腫瘤的物質(zhì)基礎(chǔ).

圖1 化合物的結(jié)構(gòu)Fig.1 Structure of the compounds

[1] 南京中醫(yī)藥大學(xué)編寫(xiě)組. 中藥大辭典[M].上冊(cè).上海:科學(xué)技術(shù)出版社，2005:114．

[2] 全國(guó)中草藥匯編編寫(xiě)組. 全國(guó)中草藥匯編[M].下冊(cè).北京:人民衛(wèi)生出版社，1978:323．

[3] 何 峰，向梅先，胡亞京，等. 藤貝母乙酸乙酯部位化學(xué)成分研究[J]. 華中師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2015，49 (4): 563-566．

[4] NAM T G，LEE S M，PARK J H，et al. Flavonoid analysis of buckwheat sprouts[J]. Food Chem，2015，170: 97-101．

[5] XIANG M X，SU H W，SHU G W，et al. Antitumor effect ofamplexicaulea through induction of apoptosis on Human breast cancer[J]. Oncotogart，2016, 7(14): 18521-18530.

[6] 葉文才，趙守訓(xùn)，沈漪漣，等. 安徽銀蓮花化學(xué)成分的研究[J].中國(guó)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，1990，21(3): 139．

[7] 華會(huì)明，李 銑，張海泉. 柳穿魚(yú)中的甾體化合物[J]. 沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2000，17(1): 40-42．

[8] 姜 勇，劉 蕾，屠鵬飛. 遠(yuǎn)志的化學(xué)成分研究III [J]. 中國(guó)天然藥物，2003，1(3): 142-145．

[9] 吳新安，趙毅民.骨碎補(bǔ)化學(xué)成分研究[J]. 中國(guó)中藥雜志，2005，30(6): 443-444．

[10] 孫紅樣，葉益萍，楊 可. 落新婦化學(xué)成分研究[J]. 中國(guó)中藥雜志，2002，7 (10): 751-754．

[11] ZHANG C Z，XU X Z，LI C. Fructosides fromCynomoriumsongaricum[J]. Phytochemistry，1996，41 (3): 975-976．

[12] 封士蘭，何 蘭，王 敏，等. 百合花化學(xué)成分的研究[J]. 中國(guó)中藥雜志，1994，19(10): 611-612．

[13] 胡 軍，屠鵬飛，果德安，等. 秦嶺大黃化學(xué)成分研究[J]. 西北藥學(xué)雜志，1997，12(4): 153-155．

[14] 張麗玲，肖英龍，李向高，等. 中國(guó)紅參麥芽酚的分離與鑒定[J]. 中成藥，1989，11(6): 32-33．

Study on chemical compound of n-butyl alcohol fraction fromBolbostemmapaniculatum(Maxim.) Franquet

LI Juan，HE Feng，YIN Xian，HONG Zhongguo，LIU Xinqiao，XIANG Meixian

(School of Pharmaceutical Sciences，South-Central University for Nationalities，Wuhan 430074)

In the present work，thin layer chromatography (TLC)，normal-phase silica gel column，reveres-phase silica gel column，Sephadex-LH，semi-preparative HPLC column were used to isolate and analyze the chemical compositions ofn-butyl alcohol fraction fromBolbostemmapaniculatum(Maxim.) Franquet. Ten compounds were obtained and identified as: 6-C-glucose-5，7，3′，4′-tetrahydroxy flavone (1)，Daucossterol (2)，Daucosterol palmitate (3)，Stigmasterol (4)，β-sitosterol (5)，Sitosteryl palmitate (6)，n-butyl-β-D-fructopyranoside (7)，Emodin (8)，Emodin monomethyl ether (9)，and Maltol (10). Except for compound 8，the compounds were isolated for the first time from this plant．

Bolbostemmapaniculatum(Maxim.) Franquet;n-butyl alcohol fraction; chemical composition

2016-04-23.

武漢市科技晨光計(jì)劃項(xiàng)目(2014070404010210)．

1000-1190(2016)05-0721-05

O629

A

*通訊聯(lián)系人. E-mail: xiangmeixian99@163.com.