錦州市豬O型口蹄疫免疫抗體水平調查

連鵬

（遼寧省錦州市動物疫病預防控制中心121004）

錦州市豬O型口蹄疫免疫抗體水平調查

連鵬

（遼寧省錦州市動物疫病預防控制中心121004）

在2013～2015年，從錦州市各豬養殖場共采集了20567份血清，應用口蹄疫O型液相阻斷ELISA實驗方法，進行抗體監測，結果為2013～2015年養殖場整體抗體合格率86.48%，表明，錦州市本地養殖場豬口蹄疫抗體水平整體比較高，并有逐年上升的趨勢。

豬O型口蹄疫；抗體；液相阻斷ELISA；調查

口蹄疫是由口蹄疫病毒引起偶蹄獸的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病。該病的臨診特征是傳播速度快、流行范圍廣，成年動物的口腔黏膜、蹄部和乳房等處皮膚發生水皰和潰爛，幼齡動物多因心肌炎使其死亡率升高。世界動物衛生組織將該病例為A類傳染病之一，在我國也列為一類傳染病，屬于國家強制免疫項目。自1999年我國爆發第5次O型口蹄疫疫情以來，由于近年來貫徹實施以免疫預防為主的防治策略，各地均未出現豬O型口蹄疫的急性爆發和大面積流行情況，此病得到了有效控制。為了了解近3年來錦州市本地養殖場和外地調入錦州豬的豬O型口蹄疫抗體水平情況，在2013～2015年，從本地養殖場采集了20567份血清進行抗體監測，現將調查結果報告如下。

1 材料與方法

1.1 待檢血清

2013～2015年，從錦州市的5個縣市區豬場采集的血清。

1.2 試劑

口蹄疫O型液相阻斷ELISA抗體檢測試劑盒，包括96孔酶標板、液體加樣槽、U型96孔抗原抗體反應板、封板膜、口蹄疫O型病毒抗原、口蹄疫O型病毒兔抗血清、口蹄疫O型病毒豚鼠抗血清、兔抗豚鼠血清IgG-辣根過氧化物酶結合物、口蹄疫O型陽性對照血清、口蹄疫陰性對照血清、3%雙氧水、PBST濃縮液、豚鼠抗血清稀釋液、終止液、碳酸鹽緩沖液膠囊、檸檬酸-磷酸鹽緩沖液片劑、OPD片劑。購自中國農業科學院蘭州獸醫研究所。

1.3 檢測方法

（1）包被：ELISA板每孔用50ul兔抗病毒血清包被，室溫下置濕盒過夜。

（2）洗滌：用PBS液洗板5次。

（3）加被檢血清，在另一酶標板中加入50ul被檢血清 （每份血清重復做2次），2倍連續稀釋起始為1：4。

（4）向稀釋好的酶標板中加入抗原，每孔內加入相應的同型病毒抗原50ul，混合后置4℃過夜，或在37℃孵育1h，加入抗原后使血清的起始稀釋度為1： 8。

（5）將50ul的血清/抗原混合物轉移到兔血清包被的ELISA板中，置37℃孵育 1h。

（6） 洗板同 （2）。

（7）每孔滴加50ul前一步使用的同型病毒抗原的豚鼠抗血清，置37℃孵育1h。

附表 2013～2015年錦州市豬養殖場豬O型口蹄疫抗體水平監測結果

附圖 2013～2015年錦州市豬O型口蹄疫抗體水平趨勢圖

（8）洗板：每孔加50ul酶結合物，置37℃孵育1h。

（9）再洗板每孔加50ul含0.05%過氧化氫 （3%質量濃度）的鄰苯二胺。

（10）加50ul1.25mol/L硫酸終止反應，15min后，將板置于分光光度計上，在492nm波長條件下讀取光吸收值。

1.4 判定標準

抗體滴度以50%終滴度表示，即該稀釋度50%孔的抑制率大于抗原對照孔抑制率均數的50%。置37℃孵育1h。 ≥1： 64， 99%以上保護； ＜1： 4，不保護； 1： 4～1： 45， 50%保護。

2 結果

（1） 2013～2015年共監測本地豬養殖場1351個，20567份樣品，抗體合格數17786份，抗體合格率86.48%，其中2013～2015年抗體合格率分別為86.62%，86.18%，86.63% （監測結果詳見附表）。

（2）錦州市本地豬養殖場豬O型口蹄疫抗體水平趨勢 （見附圖）。

3 討論

（1）本次調查結果表明，經過這幾年實施豬O型口蹄疫強制免疫，本地養殖場豬O型口蹄疫抗體一直處于較高水平，都在70%以上，近3年相差不大，都維持在較高的抗體水平，易感動物長期處于有效的保護狀態。

（2）雖然錦州地區豬O型口蹄疫抗體一直較高，但是由于是抽檢，并不能完全客觀的反應所有豬群的情況，絕大多數豬O型口蹄疫抗體保護率符合國家標準，但同時存在少部分在50%保護或不保護的狀態，這點應引起重視，保證免疫抗體達到較高的均勻度至關重要。

（3）少部份不合格樣品的原因可能有以下3點，一是與疫苗質量有關，國產疫苗在生產工藝上仍然存在很多問題，免疫期短，不能完全有效阻斷病毒的感染復制，需要嚴把質量關。二是我國防疫體系還不健全，特別是基層，管理松散，村防疫員素質有待提高。三是免疫操作不規范，一些村防疫員不按照免疫程序操作，漏免，免疫劑量不夠等情況時有發生，需要加大管理及檢查力度，做到應免盡免。

總之，我國應繼續實行以免疫為主的綜合防治措施，切實改善疫苗質量，提高免疫效果，減少不良反應，共同把好免疫關、檢測關，將防控工作做好。

連鵬 （1984.5-），男，遼寧省錦州市人，本科，獸醫師，從事動物疫病監測、診斷、流行病學調查等工作。