高效液相色譜法測定荊芥飲片煎煮過程中胡薄荷酮含量的變化

趙玉靜

高效液相色譜法測定荊芥飲片煎煮過程中胡薄荷酮含量的變化

趙玉靜

目的 探討荊芥飲片煎煮過程中胡薄荷酮含量變化的高效液相色譜（HPLC）測定方法及效果，為促進(jìn)含荊芥復(fù)方湯劑臨床煎煮規(guī)范化提供理論借鑒。方法 將胡薄荷酮作為參考指標(biāo)，并在給定色譜條件下，應(yīng)用HPLC法檢測荊芥飲片煎煮5 min、10 min、20 min、30 min、45 min后水煎液內(nèi)胡薄荷酮含量。結(jié)果 加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，荊芥飲片中胡薄荷酮的平均回收率是103.77%，其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）是1.8%；荊芥飲片在使用傳統(tǒng)砂鍋并以文火煎煮5 min時，其胡薄荷酮含量是0.548 mg/L；煎煮10 min時，其胡薄荷酮含量是0.082 mg/L；煎煮20 min時，其胡薄荷酮含量是0.022 mg/L；煎煮30 min和45 min時，其胡薄荷酮含量均為0。結(jié)論 胡薄荷酮是荊芥飲片內(nèi)的主要有效成分，其具有揮發(fā)性特征，應(yīng)依據(jù)傳統(tǒng)中藥材煎煮要求中“后下”標(biāo)準(zhǔn)煎煮，其中5 min是荊芥飲片的最佳煎煮時間，可最大限度地確保胡薄荷酮的高濃度，進(jìn)而保證荊芥“解表”效果。

荊芥飲片；煎煮過程；胡薄荷酮；含量變化；高效液相色譜法

荊芥屬于唇形科中一年生的草本植物荊芥干燥地上部位，具有透疹消瘡、祛風(fēng)解表之功效[1]，常用于治療麻疹不透、外感表證、風(fēng)疹瘙癢以及出血癥等疾病。荊芥的主要有效成分是揮發(fā)油類物質(zhì)，包括胡椒酮、胡薄荷酮以及薄荷酮等[2]，不適宜長時間煎煮，以免其因長時間受熱而主要藥物成分揮發(fā)。《中國藥典》（2015年版，1部）內(nèi)有規(guī)定：荊芥中揮發(fā)油含量不可低于0.3%（mg/L）[3]，胡薄荷酮為荊芥內(nèi)揮發(fā)油的主要有效成分，相關(guān)報道表明，采用高效液相色譜（HPLC）法檢測胡薄荷油含量的準(zhǔn)確性較高，且操作簡便，易于推廣[4-5]。本研究為明確荊芥飲片煎煮過程中胡薄荷酮含量變化，促進(jìn)荊芥煎煮工藝的規(guī)范性，使用傳統(tǒng)砂鍋煎煮荊芥，并以HPLC法檢測其煎煮期間胡薄荷酮的含量變化，從而確定荊芥的最佳煎煮時間，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試劑

1.1 藥品與試劑 荊芥飲片，遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院；胡薄荷酮對照品，中國藥品生物制品鑒定所，純度為98.6%，批號：111802-201106；色譜純甲醇，美國Merck公司；其余試劑為分析純。

1.2 儀器 LC-20AB型高效液相色譜儀，其中包含CTO-20A柱溫箱、SIL-20A自動進(jìn)樣器、DGU-20A3在線脫氣機(jī)、Class-VP色譜工作站以及SPD-M20A檢測器；梅特勒-托利多儀器。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：YMC-Pack ODS-A（4.6 mm× 250 mm，5 μm）；柱溫：35 ℃；檢測波長：254 nm；流速：1 ml/min；流動相：甲醇與水的比例是80∶20。

2.2 供試品溶液制備 精密稱取30 g荊芥飲片，將其置入300 g清水內(nèi)浸泡0.5 h，并使用傳統(tǒng)砂鍋，以武火煮沸后改為文火煎煮5 min，隨后將藥液濾出，藥液體積為175 ml，將其作為1號樣品備用；以相同方法制備荊芥飲片2號樣品備用，采用文火煎煮10 min，其藥液體積與1號樣品相同；隨后，再以相同方法制備3號樣品、4號樣品、5號藥品備用，其文火煎煮時間分別是20 min、30 min、45 min，每一份藥液均加入純凈水，將其體積定為175 ml。

量取1～5號樣品，分別置入10～50 ml容量瓶內(nèi)，并加入無水乙醇，將其定容到刻度，注意應(yīng)一邊加一邊輕輕振搖，靜置后即可獲得供試品溶液。

2.3 對照品儲備液制備 精密稱取17.46 mg胡薄荷酮對照品置入10 ml容量瓶內(nèi)，加入無水乙醇予以溶解，并將其定容至刻度，即可獲得對照品儲備液。

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 精密量取胡薄荷酮對照品儲備液1 ml置入100 ml容量瓶內(nèi)，加入無水乙醇將其定容至刻度，獲得1.76 mg/L濃度的胡薄荷酮對照溶液，分別稀釋成為濃度為3.4920 mg/L、1.7460 mg/L、0.8730 mg/L、0.4365 mg/L、0.2182 mg/L、0.0875 mg/L、0.0106 mg/L的胡薄荷酮對照品溶液。應(yīng)用YMCPack ODS-A色譜柱分別進(jìn)樣10 μl，并記錄峰面積。將峰面積作為縱坐標(biāo)，并將胡薄荷酮對照品溶液濃度作為橫坐標(biāo)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制，并計算其回歸方程：Y=27 975X+804.69（r=0.9999），可見胡薄荷酮濃度在0.0106～17.4600 mg/L時線性關(guān)系良好。

2.4.2 精密度試驗(yàn) 精密抽取1號樣品溶液（煎煮5 min的荊芥飲片）10 μl，予以5次重復(fù)進(jìn)樣后，樣品內(nèi)胡薄荷酮面積相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）的計算結(jié)果是1.6%，則表示儀器的精密度較高。

2.4.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密抽取1號樣品溶液（煎煮5 min的荊芥飲片）10 μl，將其分別在0 h、4 h、8 h、12 h、16 h、24 h時予以進(jìn)樣檢測，樣品內(nèi)胡薄荷酮的峰面積RSD的計算結(jié)果是0.8%，則表示樣品溶液24 h內(nèi)的穩(wěn)定性較高。

2.4.4 重復(fù)性試驗(yàn) 在同一批荊芥飲片中重復(fù)制備2號樣品溶液（煎煮10 min的荊芥飲片）5份，并精密吸取10 μl予以檢測，計算其胡薄荷酮含量RSD是2.66%。

2.4.5 回收率試驗(yàn) 取15 g荊芥飲片，并將其置入150 g清水中浸泡0.5 h，使用傳統(tǒng)砂鍋并以武火煮沸，隨后轉(zhuǎn)為文火煎煮，10 min后濾出藥液，將其定容在175 ml。將上述樣品溶液分別量取6份，10 ml/份，將其分別加入0.8 ml、0.8 ml、1.0 ml、1.0 ml、1.2 ml、1.2 ml的胡薄荷酮對照品溶液內(nèi)，而胡薄荷酮對照品溶液濃度是1.746 g/L。取無水乙醇加入其中并定容至50 ml，搖勻后靜置。精密抽取各個樣品10 μl予以進(jìn)樣檢測，計算其胡薄荷酮的平均回收率。

2.4.6 檢測樣品含量 取制備好的供試品溶液，在YMC-Pack ODS-A色譜柱條件下予以進(jìn)樣、分析，其進(jìn)樣體積是10 μl，分析荊芥飲片的煎煮期間的胡薄荷酮濃度變化。

2.5 胡薄荷酮加樣回收率 加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，荊芥飲片中胡薄荷酮的平均回收率是103.77%，其RSD是1.8%，詳細(xì)數(shù)據(jù)見表1。

表1 胡薄荷酮加樣回收率

2.6 樣品含量檢測結(jié)果 荊芥飲片在使用傳統(tǒng)砂鍋并以文火煎煮5 min時，其胡薄荷酮含量為0.548 mg/L；煎煮10 min時，其胡薄荷酮含量是0.082 mg/L；煎煮20 min時，其胡薄荷酮含量是0.022 mg/L；煎煮30 min和45 min時，其胡薄荷酮含量均為0。

3 討論

荊芥最早記載于《神農(nóng)本草經(jīng)》中，名字為“假蘇”，屬于中藥材，在《吳普本草》中以“荊芥”之名被記載[6]。荊芥味辛、性溫，也有部分中醫(yī)學(xué)者認(rèn)為其性涼或性平，生品具有宣毒透疹、祛風(fēng)解表、散瘀止血的藥效，主要用于治療咽喉腫痛、風(fēng)寒感冒以及皮膚科疾病，屬于臨床上常用的中藥材。荊芥具有解表效果的有效部分是揮發(fā)油，而荊芥中揮發(fā)油的主要成分是胡薄荷酮[7]。通常來講，氣相色譜法為揮發(fā)油類成分的常規(guī)檢測方法，然而，氣相色譜法的色譜條件極為復(fù)雜，與其他色譜條件相比出峰較多，易干擾檢測結(jié)果[8]。與之相比，HPLC的出峰數(shù)量較少，對檢測結(jié)果造成的干擾也較少，色譜條件相對簡單，可將其作為紫外吸收的揮發(fā)性成分含量檢測方法。

荊芥的主要藥物成分為單萜類化合物胡薄荷酮，其具備共軛結(jié)構(gòu)，且紫外最大吸收峰為252 nm，在252 nm波長下其他成分對檢測結(jié)果造成的干擾較小，且能夠縮短分析時間[9]。因此，本研究采用HPLC檢測荊芥飲片煎煮期間胡薄荷酮含量變化。本研究結(jié)果提示，應(yīng)用傳統(tǒng)砂鍋煎煮荊芥飲片，并前后使用武火、

文火煎煮，其煎煮時間不同，荊芥飲片中胡薄荷酮含量的變化也存在較大差異。文火煎煮5 min的樣品溶液內(nèi)胡薄荷酮含量較高，而煎煮10 min后樣品溶液內(nèi)胡薄荷酮濃度與之相比減少了7倍左右，煎煮20 min的樣品溶液內(nèi)胡薄荷酮含量則減少了25倍左右。同時，在煎煮30 min和45 min樣品溶液中，胡薄荷酮色譜峰完全消失。據(jù)此可知，伴隨文火煎煮時間延長，荊芥飲片內(nèi)胡薄荷酮含量也隨之減少，直至完全消失，印證了中國古今中醫(yī)學(xué)家對于含揮發(fā)性藥物成分藥材煎煮期間“勿過煮”“香氣大出”理論。現(xiàn)代藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，含有較多揮發(fā)油成分的藥物，一般需在湯劑煎煮完畢前的5～10 min煎煮即可，以免長時間煎煮導(dǎo)致?lián)]發(fā)油成分揮發(fā)，影響藥物療效。中藥湯劑的入藥療效與其煎煮方式存在直接關(guān)系，著名醫(yī)者徐靈胎言：“大都發(fā)散之藥，及芳香之藥，不宜多煎，取其生而疏蕩……故方藥雖中病，而煎法失度，其藥必?zé)o效。[10]”可見荊芥飲片的煎煮時間與其入藥療效密切相關(guān)，醫(yī)務(wù)人員在指導(dǎo)患者用藥時應(yīng)著重強(qiáng)調(diào)這一點(diǎn)，以確保用藥效果。

綜上所述，胡薄荷酮是荊芥飲片內(nèi)的主要藥物成分，其具有揮發(fā)性特征，應(yīng)依據(jù)傳統(tǒng)中藥材煎煮要求中“后下”標(biāo)準(zhǔn)煎煮，其中5 min是荊芥飲片的最佳煎煮時間，可最大限度地確保胡薄荷酮的高濃度，進(jìn)而保證荊芥“解表”效果。

[1] 丁安偉,耿婷,姚衛(wèi)峰,等.荊芥內(nèi)酯在大鼠尿液中代謝產(chǎn)物的分離與鑒定[C].蘭州∶海峽兩岸暨Csnr全國中藥及天然藥物資源學(xué)術(shù)研討會論文集,2012.

[2] 吳錦萍,于生,錢巖,等.GC-MS法測定荊芥-桂枝藥對揮發(fā)油中胡薄荷酮和桂皮醛的含量[J].江蘇中醫(yī)藥,2016,48(7)∶71-73.

[3] 何婷,湯奇,曾南,等.荊芥揮發(fā)油及其主要成分抗流感病毒作用與機(jī)制研究[J].中國中藥雜志,2013,38(11)∶1772-1777.

[4] 胡方.不同產(chǎn)地的當(dāng)歸中紫花前胡素HPLC法含量測定[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)刊,2015,17(5)∶533-534.

[5] 高鴻彬,傅芃,王曉君,等.HPLC法測定養(yǎng)陰清肺口服液中芍藥苷的含量[J].西北藥學(xué)雜志,2016,31(3)∶254-256.

[6] 李植飛,唐祖年,戴支凱.土荊芥果實(shí)揮發(fā)油GC-MS分析及其生物活性研究[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2013,19(5)∶265-269.

[7] 杜成智,覃潔萍,陳玉萍,等.不同產(chǎn)地荊芥揮發(fā)油化學(xué)成分的GC-MS分析[J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué),2014,53(1)∶188-190.

[8] 劉淼,鄧雪,周杰.氣相色譜法檢測食品中甜蜜素的實(shí)驗(yàn)條件優(yōu)化[J].中國調(diào)味品,2013,38(11)∶81-83.

[9] 解宇環(huán),郭沛鑫,繆飛,等.胡薄荷酮對急性炎癥動物模型影響的實(shí)驗(yàn)研究[J].時珍國醫(yī)國藥,2013,24(6)∶1344-1346.

[10] 趙海峰,鄭潔,張萌,等.芳香性中藥煎藥方法研究[J].陜西中醫(yī), 2013,34(1)∶84-86.

R972.2

A 【DOI】10.12010/j.issn.1673-5846.2016.11.004

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