茶葉種類及添加量對斑點叉尾鮰谷胱甘肽抗氧化指標的影響

岳鼎鼎 宛曉春，周裔彬 楊嚴鷗，張建立 桑八一，張堯北平

(安徽農業大學動物科技學院，安徽 合肥 230036) 安徽農業大學茶與食品科技學院，農業部茶葉生物技術重點開放實驗室，安徽合肥230036 (安徽農業大學動物科技學院，安徽 合肥 230036) 安徽農業大學茶與食品科技學院，農業部茶葉生物技術重點開放實驗室，安徽合肥230036

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茶葉種類及添加量對斑點叉尾鮰谷胱甘肽抗氧化指標的影響

岳鼎鼎 宛曉春，周裔彬 楊嚴鷗，張建立 桑八一，張堯北平

(安徽農業大學動物科技學院，安徽 合肥 230036) 安徽農業大學茶與食品科技學院，農業部茶葉生物技術重點開放實驗室，安徽合肥230036 (安徽農業大學動物科技學院，安徽 合肥 230036) 安徽農業大學茶與食品科技學院，農業部茶葉生物技術重點開放實驗室，安徽合肥230036

選擇屏山炒青、霍山黃芽、黃山毛峰、龍井4種非發酵茶和祁門紅茶、普洱茶2種發酵茶，分別按1%和2%添加量加入斑點叉尾鮰(Ietaluruspunetaus)基礎飼料中，進行為期8周的養殖試驗。試驗結束后，每箱隨機撈取7尾試驗魚，測定各組魚體肝臟組織的谷胱甘肽(GSH)含量、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、谷胱甘肽還原酶(GR)活性；然后降低水位，對每箱剩余的23尾試驗魚進行3d的擁擠脅迫，再每箱隨機撈取7尾測定肝臟組織的3項指標。結果顯示：龍井(1%、2%組)在脅迫前可顯著提高GSH含量，霍山黃芽(1%、2%組)和祁門紅茶(1%組)在脅迫后提高GSH含量的作用更為顯著；脅迫前，所有茶葉都不能提高GSH-Px活力；脅迫后，1%屏山炒青、霍山黃芽、祁門紅茶組和2%霍山黃芽、龍井組可使GSH-Px活力顯著高于對照組；龍井(1%組)在脅迫前能夠顯著提高GR活力；脅迫后，多數1%組能顯著提高GR活力，2%組中，霍山黃芽和龍井組顯著高于對照組。結果表明：茶葉可提高GSH含量以及GSH-Px與GR活性，這種提高主要是在脅迫后體現出來，其中霍山黃芽、龍井和祁門紅茶的效果更為明顯；2種添加量中，1%添加量效果更為明顯。

斑點叉尾鮰(Ietaluruspunetaus)；茶葉；谷胱甘肽抗氧化

谷胱甘肽抗氧化體系是生物體抗氧化體系的重要組成部分，其主要指標包括還原型谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、谷胱甘肽還原酶(GR)等[1,2]。GSH是生物體內重要的抗氧化劑，能夠清除活性氧自由基[3]。GSH-Px是清除過氧化氫和氫過氧化物的重要過氧化物酶，并且是肝胰腺中最敏感的抗氧化酶[4]。GR能將GSSG催化反應成GSH[5]，GR通過保持較高的GSH/GSSG比率在維持細胞內穩定的氧化還原水平中具有重要作用[6]。茶葉具有抗氧化的功能[7,8]，并且可作為添加劑應用于飼料中[9]。但關于茶葉對魚類的谷胱甘肽抗氧化體系影響的研究目前還很缺乏。本研究以斑點叉尾鮰(Ietaluruspunetaus)為對象，通過在日糧中按不同添加量分別添加6種不同品種的茶末，測定斑點叉尾鮰肝臟的GSH含量和GSH-Px、GR活性的變化，探討茶葉對斑點叉尾鮰谷胱甘肽抗氧化體系指標的影響，以期為茶葉在斑點叉尾鮰飼料中的應用提供參考依據。

1 材料與方法

1.1 試驗魚與飼料

試驗魚購自安徽合肥市巢湖三珍養殖場，運回后用2%食鹽水消毒。試驗開始前，將試驗魚在循環水水族箱內暫養2周，以適應試驗環境和試驗飼料。

暫養期間投喂基礎飼料，基礎飼料營養需求參考NRC(2011)，其干物質含量92.20%，粗蛋白含量35.20%，粗脂肪5.56%，灰分10.51%，能值17.52kJ/g；基礎配方為：白魚粉含量18.50%，豆粕40.00%，面粉28.50%，維生素C 0.11%，色拉油2.50%，維生素預混料0.39%，礦物鹽預混料1.50%，磷酸二氫鈣2.00%，氯化膽堿0.10%，α-淀粉4.00%，纖維素2.00%，甜菜堿0.40%。

試驗設置1對照組，投喂基礎飼料；設置12個試驗組，各試驗組分別投喂由6種茶葉(祁門紅茶、黃山毛峰、屏山炒青、普洱、霍山黃芽和龍井茶)的加工下腳料碾磨成粉后分別按1%、2%的添加量加入基礎飼料中配制而得的飼料。試驗所用飼料通過顆粒機制成直徑2mm顆粒，60℃烘干，過篩，4℃保存使用。

1.2 試驗方法

養殖試驗在循環水養魚系統中進行。每種飼料設置3個重復，共使用39個水族箱，箱體尺寸為60cm×60cm×65cm(有效水體180L)，為灰色塑料制成。水源為曝氣自來水，使用沸石、活性炭凈化水體；真空泵提水，單個箱體循環水量為2.5L/min；羅茨鼓風機間斷性充氧；自然水溫，變化范圍25.2～28.5℃；節能日光燈提供照明，光照時間8:30～20:00。選取體質健康、規格一致的個體進行試驗。試驗開始前，將試驗魚饑餓24h，然后隨機撈取稱重，每箱放入試驗魚30尾，每尾平均初始體重為1.80～1.90g。試驗持續8周，每天9:00和15:00各投適量飼料1次，1h后回收殘餌，70℃烘干。

1.3 指標測定方法

試驗結束時，將魚饑餓24h，再從每箱中隨機撈取7尾，取內臟團，冰浴條件下分離肝胰臟，每條魚切取部分肝臟，等量混合，-70℃冰箱保存。取樣后將養殖箱水體高度從60cm降至10cm，充氧，擁擠脅迫3d，再從每箱隨機撈取7尾，并按上述操作進行取樣。肝臟樣品谷胱甘肽(GSH)含量、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、谷胱甘肽還原酶(GR)的測定參考南京建成生物研究所生產的試劑盒方法進行測定。

1.4 數據處理

試驗所得描述性統計值用平均值±標準差表示(Mean±SD)。采用單因素方差分析(ANOVA)后進行組間差異的多重比較(Duncan’s procedure)，顯著性水平設置為α=0.05。脅迫前后比較用t檢驗表示，顯著性水平設置為α=0.05。

2 結果與分析

2.1 對還原型谷胱甘肽(GSH)含量的影響

由表1可知，試驗結束時，2種添加量的龍井組可顯著提高斑點叉尾鮰肝臟的GSH含量(P<0.05)，其余各組與對照組無顯著差異或顯著低于對照組。脅迫后，除個別組外，2種添加量的各茶葉組GSH含量均高于對照組，其中一些組的差異達到顯著水平(P<0.05)。脅迫前，茶葉組的GSH略低于對照組但無顯著差異(P>0.05)；脅迫后，茶葉組GSH含量有明顯提高，其中1%組提高了21.33%，2%組提高了15.70%。

表1 茶葉種類、添加量以及擁擠脅迫對斑點叉尾鮰魚體肝臟GSH 含量的影響

注：*表示1%組與對照組差異顯著(P<0.05)，#表示2%組與對照組差異顯著(P<0.05)；XY不同表示同種茶葉的不同添加量之間有顯著差異。表2、表3同。

2.2 對谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性影響

由表2可知，試驗結束時，除了2%黃山毛峰組，其余各茶葉組的GSH-Px活性均顯著低于對照組(P<0.05)。脅迫后，1%屏山炒青、霍山黃芽和祁門紅茶組與2%霍山黃芽和龍井組可使GSH-Px活性顯著高于對照組(P<0.05)。脅迫前，1%組的GSH-Px活性高于2%組，脅迫后與之相反，但均無顯著差異。

表2 茶葉種類、添加量以及擁擠脅迫對斑點叉尾鮰魚體肝臟GSH-Px活性的影響

2.3 對谷胱甘肽還原酶(GR)活性的影響

由表3可知，試驗結束時,1%龍井組GR活性顯著高于對照組(P<0.05)，其余各組與對照組無顯著差異或顯著低于對照組。脅迫后，1%茶葉組多數顯著高于對照組(P<0.05)，2%組中，霍山黃芽和龍井組顯著高于對照組(P<0.05)，其余各組與對照組無顯著差異。脅迫前，茶葉組的GR活性與對照組無顯著差異；脅迫后，茶葉組比對照組有所提高，1%組提高18.11%，2%組提高12.70%。

表3 茶葉種類、添加量以及擁擠脅迫對斑點叉尾鮰魚體肝臟GR活性的影響

3 討論

在生理條件下，谷胱甘肽主要以還原型(GSH)和氧化型(GSSG)2種形式存在,其中有活性的GSH約占90%[10]。本研究結果顯示，6種茶葉對GSH含量的提升作用主要表現在脅迫后，這可能是因為脅迫導致活性氧自由基增加[11]，機體產生應激反應，GSH含量升高以清除大量產生的活性氧自由基。從添加量來看，1%添加量效果更好。類似的研究表明，羅非魚(Oreochromisniloticus)飼料添加 333mg/kg茶多酚比666mg/kg對提升魚體抗氧化能力更有幫助[12]；飼料中添加50～100mg/kg茶多酚可提高虹鱒(Oncorhynchusmykiss)[13]抗氧化能力，但超過500mg/kg時未產生有益作用。這說明添加有一個適宜的量。

本研究結果顯示，茶葉導致魚體肝臟的GSH-Px活性顯著降低，在青魚(Mylopharyngodonpiceus)[14]和異育銀鯽(Carassiusauratusgibelio)[15]飼料中添加茶多酚，魚體血清與肝臟GSH-Px活性也分別有顯著下降。但本研究中，在脅迫后，部分茶葉組的GSH-Px活性獲得提高，而且這種變化趨勢與脅迫后GSH含量升高趨勢一致，由于GSH-Px能催化 GSH 變為 GSSG[16]，這種一致性的變化可能與脅迫造成的應激反應有關。本研究中，從添加量來看，1%組效果更為明顯。

GR能將GSSG催化反應成GSH[5,6]。本研究中，茶葉對GR活力的提高也主要是表現在脅迫后，與GSH含量的變化趨勢基本一致，其中屏山炒青(1%組)、黃山毛峰(1%組)、普洱(1%組)和祁門紅茶(1%組)以及霍山黃芽(2%組)和龍井(2%組)等有顯著提高。可以看出，茶葉種類對作用效果有顯著影響，這應該與不同茶葉中有效成分不同有關[17,18]。

本研究結果表明，茶葉可提高GSH含量、GSH-Px活性和GR活性，這種提高主要是在脅迫后體現出來，其中霍山黃芽、龍井和祁門紅茶的效果更為明顯；2種添加量中，1%添加量效果更為明顯。

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2016-10-05

國際交流合作項目(2011DFG33280)。

岳鼎鼎(1993-)，男，碩士生，研究方向為水產動物營養與飼料。通信作者:楊嚴鷗，cdyyo@126.com。

S963;S965.128

A

1673-1409(2016)33-0032-05

[引著格式]岳鼎鼎，宛曉春，周裔彬，等.茶葉種類及添加量對斑點叉尾鮰谷胱甘肽抗氧化指標的影響[J].長江大學學報(自科版)，2016，13(33)：32～36.