托吡酯對腦缺血再灌注損傷大鼠神經功能的影響

朱曉峰 徐 耀 張桁忠(通訊作者)

蘇北人民醫院神經內科 揚州 225001

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托吡酯對腦缺血再灌注損傷大鼠神經功能的影響

朱曉峰 徐 耀 張桁忠(通訊作者)

蘇北人民醫院神經內科 揚州 225001

目的 分析托吡酯對腦缺血再灌注損傷大鼠神經功能的影響。方法 隨機雙盲法將36只雄性SD大鼠分為3組，各12只，通過線栓法形成腦缺血再灌注模型，A組大鼠行假手術，B組大鼠行8 mg/mL托吡酯治療，A組、C組(腦缺血再灌注)則于同時間點給予10 mL/kg生理鹽水干預，比較B、C 2組大鼠神經功能評分，同時比較3組大鼠腦組織Glu、GABA、GABA/Glu水平。結果 A組大鼠無神經功能缺損癥狀發生，B組神經功能評分為(2.90±0.92)分，顯著高于C組的(1.55±0.74)分，差異有統計學意義(P<0.001)。3組大鼠Glu、GABA、GABA/Glu水平兩兩比較差異均有統計學意義(P<0.05)。結論 托吡酯能明顯促進腦缺血再灌注損傷大鼠神經功能改善，可能是通過抑制Glu水平，增多GABA含量達到神經保護的目的。

托吡酯；腦缺血再灌注；大鼠模型；神經功能

相關研究發現，γ-氨基丁酸(GABA)、谷氨酸(Glu)在缺血性損傷中起重要參與作用，前者為中樞系統重要抑制性神經遞質，且它由Glu脫羧而成，兩者于大腦皮質及海馬神經元中共存[1]。為此可將GABA、Glu作為神經保護的可能作用機制之一。托吡酯作為臨床一種常見抗癲癇藥物，近年來較多研究發現它能明顯提高抑制性遞質GABA功能，拮抗Glu相關受體亞型，對腦損傷神經保護功能明顯，同時可明顯減少其毒性作用[2]，理論上可用于腦損傷后神經保護。鑒于對人類的保護，本研究對雄性SD大鼠進行實驗，探討托吡酯對腦缺血再灌注損傷大鼠神經功能的影響，以為臨床腦缺血疾病治療提供參考。報告如下。

1 材料與方法

1．1 材料 選擇36只健康雄性SD大鼠，由揚州大學提供，質量282～322 g，平均(295.5±10.2)g。隨機雙盲法將大鼠分為A組(假手術)、B組(缺血再灌注大鼠，托吡酯干預)與C組(缺血再灌注大鼠，生理鹽水注射)，各12只。

1．2 方法 通過線栓法完成腦缺血再灌注大鼠模型，具體操作：3 mL/kg水合氯醛(濃度10%)于大鼠腹腔注射，成功麻醉后于頸正中行切口，頸外動脈遠端、頸總動脈近端(活結)均由4-0絲線結扎，然后將3/0號單股尼龍線(事前將線頂端燒鈍)由頸外動脈插入頸內動脈，栓線深度19～21 mm，待大腦中動脈起始端被阻斷后于頸外動脈近分叉處結扎固定線栓，縫合皮膚。缺血120 min后抽出線栓，同時將頸總動脈活結松開，形成缺血再灌注模型。A組假手術，除開不插線，其他操作相同。B組大鼠在插線、拔線時行8 mg/mL托吡酯(西安楊森制藥有限公司生產，國藥準字H20020555)腹腔注射，A組、C組大鼠則于相同時間點行10 mL/kg生理鹽水腹腔注射。

1．3 觀察指標

1．3．1 神經功能評分：通過Zausinger 6分法[3]評價，0分：不能行走；1分：可自由行走，但會向病變對側旋轉；2分：固定尾巴后向病變對側旋轉；3分：若向病變對側施壓，大鼠難以抵抗；4分：病變對側前爪不能伸直或全身對側屈曲；5分：不存在神經功能缺損癥狀。于大鼠清醒狀態下再灌注2～24 h評分。

1．3．2 Glu、GABA、GABA/Glu水平：大鼠再灌注24 h后馬上將其處死取腦，分離出右側額葉頂葉皮質，稱重后加入預冷腦組織勻液(比例1：10)，超聲勻漿后常規離心，轉速12 000 r/min，20 min，提取出上清液保存在-70℃冰箱中。GABA、Glu均通過高效液相色譜法測定。

2 結果

2．1 神經功能評分 A組大鼠均存活，可自由行走，無1例表現出神經功能缺損癥狀。B組大鼠于再灌注2 h內死亡1只。C組大鼠于再灌注后2 h內死亡1只，再灌注后12 h死亡1只。B組大鼠神經功能評分明顯高于C組，差異有統計學意義(P<0.01)。見表1。

表1 B組、C組大鼠神經功能評分比較，分)

2．2Glu、GABA、GABA/Glu水平B組Glu水平明顯低于A組、C組(t值分別為3.841、4.707，P<0.05)；B組GABA、GABA/Glu分別明顯高于A組(t值為5.914、2.305，P<0.05)，均明顯低于C組(t值為4.065、13.484，P<0.05)。A組、C組Glu、GABA、GABA/Glu水平比較差異有統計學意義(t值分別為3.254、8.872、17.994，P<0.05)。見表2。

表2 3組大鼠 Glu、GABA、GABA/Glu水平比較

注：與A組比較，*P<0.05；與C組比較，#P<0.05

3 討論

受腦組織缺血缺氧、血管再灌注損傷等多種因素影響，缺血性腦血管疾病神經元可能變性壞死或凋亡[4]。腦缺血后中樞神經系統興奮性氨基酸大量釋放，致使細胞外液中谷氨酸、γ-氨基丁酸上升，產生神經毒性加快神經元變性壞死速度，可能機制包括：(1)腦缺血后興奮性氨基酸增多，對N-甲基-D-門冬氨酸受體刺激而讓鉀離子、氯離子至細胞內，易引發神經元水腫癥狀[5]；(2)腦缺血后增加鈣離子內流幾率，致使細胞內鈣離子數目太多而將磷脂酶A2或C等激活，損傷神經細胞。可見神經保護重點在于抑制神經元興奮，而神經元興奮抑制關鍵在于氨基酸抑制，進而減少其毒性作用。

現代醫學認為中樞神經系統重要成分包括Glu、GABA等，正常生理環境下，因機體內有Glu攝取系統且攝取能力強，可保持細胞Glu維持低水平，僅有少許Glu作為興奮性神經遞質在大腦學習、記憶等多種信號傳導功能中起參與作用[6]。而一旦腦缺血發生，Glu釋放過度，激活n-甲基-D-天門冬氨酸產生興奮毒性作用，促進神經元壞死或死亡。GABA主要由Glu脫羧而來，存在于大腦皮質及海馬神經元中，通常情況下Glu含量為GABA的4倍左右。當Glu產生興奮性毒性后，抑制性遞質GABA通過對GABA投射神經元位相性抑制可達到拮抗神經元的目的。于海寧等[7]人研究表明腦缺血時除了Glu水平上升外，抑制性氨基酸GABA濃度亦明顯上升，且兩者呈正相關性。托吡酯作為臨床一種新型抗癲癇藥物，主要成分為氨基硫酸酯，近年來較多研究及臨床表明托吡酯在神經細胞元中有一定的作用，可能機制包括：(1)托吡酯對神經元方便可有效阻斷，但該作用與托吡酯使用后時間有關，主要是通過阻斷鈉通道達到阻斷神經元放電的目的；(2)該藥物通過激活GABAA受體頻率，以提高氯離子內流，進而以增強抑制中樞神經遞質作用；(3)托吡酯通過使谷氨酸AMPA受體活性下降以抑制中樞神經遞質[8]。本文結果顯示，B組大鼠Glu、GABA水平明顯比C組低，差異有統計學意義(P<0.05)，提示托吡酯能明顯降低腦缺血再灌注大鼠Glu、GABA水平，有利于其神經功能恢復，與劉姜冰等[9]研究結果基本一致。另外，B組大鼠神經功能評分明顯比C組高，差異有統計學意義(P<0.05)，提示托吡酯對腦缺血再灌注大鼠有神經保護作用，可能與其降低Glu、GABA水平有關。

綜上所述，托吡酯對腦缺血再灌注損傷大鼠神經有保護作用，可能是通過降低Glu及GABA水平達到明顯改善大鼠神經功能的目的，值得臨床進一步研究應用。

[1] 盧艷秋，婁季宇．托吡酯對大鼠腦缺血再灌注后氨基酸釋放的影響[J]．中國實用神經疾病雜志，2009，12(6)：11-13．

[2] 高俊淑，李娜，陳景紅，等．托吡酯單藥治療癲癇的臨床和動態腦電圖分析[J]．中國老年學雜志，2011，31(24)：4 919-4 920．

[3] Zausinger S，Hungerhuber E，Baermanna A，et a1．Neurological impairment in rats after transient minddle cerebral artery ocelursion：a comparative study under various treatment paradigms[J]．BrainRes，2000，863(12)：94．

[4] 歐小凡，林斯革，蔡雪峰，等．托吡酯治療偏頭痛的臨床療效及其對腦血管病變和神經元放電的影響研究[J]．中國全科醫學，2013，16(02)：161-163．

[5] 王曉梅，張秀花，劉冰，等．托吡酯對大鼠脊髓損傷后神經的保護機制[J]．中國康復醫學雜志，2013，28(5)：403-408．

[6] 吳丹紅，鐘萍，包關水，等．不同劑量托吡酯對癲大鼠海馬組織中NCAM和GAP- 43 mRNA表達的影響[J]．上海交通大學學報(醫學版)，2009，29(12)：1 459-1 462．

[7] 于海寧，張秀清，韓巨，等．托吡酯對大鼠局灶性腦缺血再灌注后神經功能及神經元烯醇化酶表達的影響[J]．山東醫藥，2007，47(22)：5-6．

[8] 金杰．托吡酯片在人體內的藥物動力學及生物等效性研究[J]．中南藥學，2013，11(3)：166-169．

[9] 劉姜冰，石靜萍，趙薛旭，等．托吡酯對急性腦缺血后大鼠腦皮層氨基酸類神經遞質含量的影響及神經保護作用[J]．重慶醫科大學學報，2010，35(05)：692-694．

(收稿2015-09-26)

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1673-5110(2016)22-0109-03