女性不孕癥患者血清及宮頸黏液中自身抗體檢測對病情的評估價值

蔡智慧，梁義娟，李瑞，王敬，楊媛媛，馬曉慧

（1.河北大學附屬醫院婦科，河北 保定 071000；2.河北省望都縣醫院婦產科，河北 保定 071000）

論著

女性不孕癥患者血清及宮頸黏液中自身抗體檢測對病情的評估價值

蔡智慧1，梁義娟1，李瑞1，王敬1，楊媛媛1，馬曉慧2

（1.河北大學附屬醫院婦科，河北 保定 071000；2.河北省望都縣醫院婦產科，河北 保定 071000）

目的分析女性不孕癥患者血清及宮頸黏液中自身抗體檢測對病情的評估價值。方法選取2012年7月-2014年7月間至該院接受檢查的女性不孕患者138例作為觀察組對象。另取同期在該院因宮頸炎癥接受檢查的已育女性106例作為對照組。比較兩組研究對象的血清及宮頸黏液自身抗體水平、外周血調解性T細胞（Treg）水平，進一步分析觀察組患者中自身抗體與Treg水平的相關性。結果①觀察組患者的血清及宮頸黏液中抗精子抗體（AsAb）、抗卵巢抗體（AoAb）、抗人絨毛膜促性腺激素（AhCGAb）、抗子宮內膜抗體（EMAb）、甲狀腺自身抗體（ATA）、抗-β-2糖蛋白1抗體（α-β-2GP1）水平高于對照組女性（P＜0.05）；②觀察組患者的外周血Treg水平低于對照組（P＜0.05）；③不孕癥女性血清及宮頸黏液中的AsAb、AoAb、AhCGAb、EMAb、ATA、α-β-2GP1等自身抗體水平與外周血Treg水平呈負相關（P＜0.05）。結論女性不孕癥患者血清及宮頸黏液中自身抗體水平大幅上升，與患者的疾病發生發展以及病情嚴重程度均關系密切，是臨床診斷及指導治療的理想指標。

不孕癥；自身抗體；調解性T細胞

不孕癥的臨床發病率不低，其中女性不孕癥占50%以上，發生原因至今仍未完全明了，主要包括炎癥、組織損傷、自身免疫等等，其中自身免疫學說被較多學者認可。研究認為女性不孕癥患者體內生殖相關抗體大量產生，通過與針對性抗原形成復合物導致性器官的病理損傷，最終導致受精卵形成、受精卵著床、胚胎生長等受阻。本次研究主要分析女性不孕癥患者血清及宮頸黏液中自身抗體檢測對病情的評估價值，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2012年7月-2014年7月于河北大學附屬醫院接受檢查的女性不孕患者138例作為觀察組對象。另取同期在本院因宮頸炎癥接受檢查的已育女性106例作為對照組。均抽取外周靜脈血及宮頸黏液。觀察組患者年齡28～38歲，平均（32.18± 4.66）歲；對照組女性年齡27～38歲，平均（31.79± 4.35）歲。本次研究經醫院倫理委員會批準，所有研究對象在了解研究過程后均簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 抗體檢測標本采集抽取所有研究對象肘靜脈血5 ml，經3 000 r/min離心后取上清液；用窺陰器暴露宮頸后，采用棉簽擦拭宮頸管內約0.5 cm吸取宮頸黏液，隨后置入試管內送檢。

1.2.2 自身抗體檢測采用抗體定性試劑盒檢測所有研究對象血清及宮頸黏液中的自身抗體水平，具體包括：抗精子抗體（anti-sperm antibodies，AsAb）、抗卵巢抗體（anti-ovarian antibodies，AoAb）、抗人絨毛膜促性腺激素（anti-human chorionic gonadotropin antibodies，AhCGAb）、抗子宮內膜抗體（endometrial antibody，EMAb），甲狀腺自身抗體（anti-thyroid autoantibody，ATA），抗-β-2糖蛋白1抗體（anti-β-2 glycoprotein 1 antibodies，α-β-2GP1），所有操作均按照試劑盒說明書進行。

1.2.3 調節性T細胞（regulatory cells，Treg）檢測抽取患者外周靜脈血，肝素抗凝后加入抗體，室溫孵育后加入細胞裂解液，1 000 r/min洗滌5 min后棄上清液，震蕩均勻后采用流式細胞儀測定其中Treg水平。1.3統計學方法

采用SPSS 20.0統計軟件進行數據分析，計量資料用t檢驗，計數資料用χ2檢驗，相關性分析用Pearson分析、以相關系數r表示組間的相關性，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 血清自身抗體水平

觀察組患者的血清AsAb、AoAb、AhCGAb、EMAb、ATA、α-β-2GP1水平高于對照組女性（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組研究對象的血清自身抗體水平比較（ng/ml，±s）

表1 兩組研究對象的血清自身抗體水平比較（ng/ml，±s）

組別AsAbAoAbAhCGAbEMAbATAα-β-2GP1觀察組3.26±0.632.71±0.693.46±0.723.15±0.592.67±0.353.15±0.47對照組0.92±0.071.05±0.121.42±0.210.92±0.091.14±0.150.89±0.11 t值8.247.248.459.636.537.26 P值0.0150.0230.0130.0110.0270.021

2.2 宮頸黏液自身抗體水平

觀察組患者的宮頸黏液AsAb、AoAb、AhCGAb、EMAb、ATA、α-β-2GP1水平高于對照組女性（P＜0.05）。見表2。

表2 兩組研究對象的宮頸黏液自身抗體水平（ng/ml，±s）

表2 兩組研究對象的宮頸黏液自身抗體水平（ng/ml，±s）

組別AsAbAoAbAhCGAbEMAbATAα-β-2GP1觀察組3.82±0.491.92±0.191.91±0.271.76±0.271.82±0.191.76±0.35對照組1.01±0.090.74±0.081.08±0.180.72±0.081.02±0.131.18±0.21 t值6.385.887.128.368.729.27 P值0.0240.0290.0210.0170.0130.011

2.3 Treg水平

觀察組患者的外周血TREG比例為（3.27± 0.38）%，水平低于對照組的（8.93±1.21）%（P＜0.05）。見附圖。

2.4 自身抗體與Treg水平相關性

不孕癥女性血清及宮頸黏液中的AsAb、AoAb、AhCGAb、EMAb、ATA、α-β-2GP1等自身抗體水平與外周血TREG水平呈負相關（P＜0.05）。見表3。

附圖兩組患者外周血中Treg比例比較

表3 不孕癥患者的自身抗體與TREG水平的相關性

3 討論

全球不孕不育癥發病率呈遞增趨勢，目前我國不孕癥患病率約為5%～10%，其中以女方因素導致的不孕不育占50%以上。女性不孕癥的發生因素較多，包括子宮、輸卵管、卵巢等生育器官因素，炎癥因素，自身免疫因素等。有研究顯示免疫因素導致的女性不孕占12%以上，且有遞增趨勢，說明自身免疫原因已經成為造成女性不孕的最主要因素之一。

生殖免疫抗體可以從精子活性、受精卵形成、胚胎著床等多個環節干擾女性生殖過程，嚴重影響女性生育能力。AsAb是不孕不育患者體內最多見的自身抗體，在正常女性中當精子進入生殖道后，女性生殖道的自身屏障作用可以抑制對精子抗原產生免疫應答，故無AsAb產生。當生殖道炎癥、出血等異常情況下，黏膜屏障被破壞，精子與血液接觸后將激發女性免疫系統而產生AsAb，阻礙精子活力以及受精卵的形成。AoAb可以由卵巢任何一種成分在感染或者手術等誘因下產生，是卵巢組織的多靶位抗體，其與異常表達的抗原結合可以導致卵巢病理損傷，當發生顆粒細胞變性壞死、黃體細胞膽固醇代謝困難時，可以影響雌孕激素產生，引起強烈的抗生育作用。AhCGAb可以與hCG特異性結合降低hCG活性及濃度，致使hCG無法有效支配受精卵著床以及維持妊娠。EMAb是子宮內膜異位癥的標志性抗體，以子宮內膜為靶細胞，可以導致子宮內膜免疫性損傷，最終引發子宮內膜發育不良、內膜細胞結構改變，導致受精卵著床困難，患者不孕或者流產概率成倍增加。本次研究對不孕癥女性及正常可以生育的女性進行血清及宮頸黏液中上述抗體水平檢測，結果顯示，觀察組患者的血清及宮頸黏液中AsAb、AoAb、AhCGAb、EMAb水平明顯高于對照組女性（P＜0.05），提示不孕癥女性體內存在高水平的生殖免疫抗體，與不孕癥的發生關系密切。

α-β-2GP1是導致APS的主要抗體，當α-β-2GP1與ATA結合后可以導致血液凝固調節發生障礙，血管內血栓形成阻礙胎盤循環，胎盤功能迅速減低，最終導致流產發生。ATA普遍存在于育齡期女性中，在復發性流產女性中表達率大幅增加，是導致不孕、流產及早產等的獨立危險因子之一。上述研究檢測了不孕癥及健康女性的血清及宮頸黏液中上述抗體水平，結果顯示：觀察組患者的血清及宮頸黏液中ATA、α-β-2GP1水平明顯高于對照組女性（P＜0.05），提示ATA、α-β-2GP1在女性不孕癥發生中也發揮了重要作用，是不孕癥產生的因素之一。

Treg是一類控制體內自身免疫反應的T細胞亞群，與各類自身免疫性疾病的發生均關系密切。有研究顯示Treg的異常表達是導致女性不孕癥的一個重要因素，當Treg表達量降低時，對機體的自身抗體抑制性降低，最終導致自身抗體大量表達并引起組織病理損傷，最終導致不孕、流產及早產的發生。上述研究結果顯示觀察組患者的外周血Treg水平顯著低于對照組女性（P＜0.05），提示Treg對自身免疫反應的抑制減弱與不孕癥的發生關系密切，也間接證明了自身抗體的表達量增加及自身免疫反應的增強是導致不孕癥發生的關鍵環節。在進一步對自身抗體水平與外周血Treg水平進行相關性分析后發現，不孕癥女性血清及宮頸黏液中的AsAb、AoAb、AhCGAb、EMAb、ATA、α-β-2GP1等自身抗體水平與外周血TREG水平呈負相關（P＜0.05），提

示自身抗體水平的升高可以直接表明不孕癥患者自身免疫水平的紊亂，且與紊亂程度直接相關，可以作為判斷病情嚴重程度以及指導臨床治療的重要指標之一。

綜上所述，得出以下結論：女性不孕癥患者血清及宮頸黏液中自身抗體水平大幅上升，與患者的疾病發生、發展以及病情嚴重程度均關系密切，是臨床診斷及指導治療的理想指標，值得在日后臨床實踐中推廣應用。

[1]安利峰,勝利,趙霏,等.不孕癥患者外周血中Th1、Th2細胞因子與自身抗體產生的相關性[J].細胞與分子免疫學雜志,2014,30(5): 527-530.

[2]陸杉,倪運萍,王愛愛,等.宮頸黏液抗精子抗體聯合性交試驗對不孕癥患者的檢測意義[J].臨床和實驗醫學雜志,2014,13(13): 1104-1107.

[3]DURAN B,OZLü T,KO? O,et al.Relationship of thyroid hormone levels and thyroid autoantibodies with early pregnancy loss andinfertility[J].J Obstet Gynaecol,2013,33(8):862-864.

[4]張麗,焦凱.甲狀腺自身抗體對不孕癥婦女進行輔助生殖技術后妊娠結局影響的Meta分析[J].實用醫學雜志,2014,30(24):4011-4014.

[5]李娜,榮揚,王珍光.抗-β2糖蛋白1抗體在女性不孕癥及先兆性流產中的檢測及意義[J].現代檢驗醫學雜志,2015,30(3):42-45.

[6]AGHAMIR S M,SALAVATI A,YOUSEFIE R,et al.Does bone marrow-derived mesenchymal stem cell transfusion prevent antisperm antibody production after traumatic testis rupture[J].Urology,2014,84(1):82-86.

[7]王春風.女性不孕癥患者抗精子抗體及抗子宮內膜抗體檢測分析[J].中國實用醫刊,2014,41(13):109-112.

[8]劉彩霞,高美華,常繼賢.自身抗體和生殖激素失調與女性不孕癥的相關性研究[J].吉林醫學,2011,32(2):219-223.

（張蕾 編輯）

Evaluation of autoantibodies in serum and cervical mucus of female infertility patients

Zhi-hui Cai1,Yi-Juan Liang1,Rui Li1,Jing Wang1,Yuan-yuan Yang1,Xiao-hui Ma2
(1.Department of Gynecology,the Affiliated Hospital of Hebei University,Baoding,Hebei 071000, China;2.Department of Gynecology,the People's Hospital of Wangdu County, Baoding,Hebei 071000,China)

Objective To analyze the assessed value of autoantibodies in female infertility patients'serum and cervical mucus.Methods Totally 138 cases of female infertility patients in our hospital between July 2012 and July 2014 were chosen as observation group,at same time 106 cases of female with cervix inflammation were chosen as control group.Serum and cervical mucus levels of autoantibodies and peripheral Treg level were compared between the two groups.The relationships between the autoantibodies with Treg level in the observation group were further analyzed.Results The serum and cervical mucus levels of AsAb,AoAb,AhCGAb,EMAb,ATA and α-β-2GP1 in the observation group were significantly higher than those in the control group(P＜0.05).The peripheral Treg level in the observation group was significantly lower than that in the control group(P＜0.05).In the observation group, serum and cervical mucus levels of AsAb,AoAb,AhCGAb,EMAb,ATA,α-β-2GP1 were inversely related with peripheral blood Treg level(P＜0.05).Conclusions In infertile females,serum and cervical mucus levels of antibodies significant increase,which are closely related to the development and severity of th disease,and are ideal indicators for clinical diagnosis and treatment guidance.

infertility;autoantibody;Treg

R711.6

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2016.22.008

1005-8982（2016）22-0038-04

2016-02-23

梁義娟，Tel：0312-5981092，15833868558