尸體與活體供腎移植術前微量淋巴細胞毒交叉配型結果及與腎移植效果的關系

鐘 濤,廖貴益,許 偉,程 越,胡海亮,張循善,卞茂紅

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尸體與活體供腎移植術前微量淋巴細胞毒交叉配型結果及與腎移植效果的關系

鐘 濤1,廖貴益2,許 偉1,程 越1,胡海亮1,張循善1,卞茂紅1

回顧性分析同期完成的尸體與活體供腎移植術前微量淋巴細胞毒(CDC)交叉配型實驗檢測結果與術后臨床效果的內在關系。尸體供腎移植組術前CDC檢測結果相對于活體供腎移植組顯著增高(P<0.05)，術后受者死亡/腎丟失、排斥反應/延遲恢復發生率，尸體供腎移植組顯著高于活體供腎移植組(P<0.05)。移植后在出現受者死亡/腎丟失、排斥反應/延遲恢復以及肺部感染這些不良事件時，尸體供腎移植組CDC檢測結果在9%以上或者活體供腎移植組在4%以上的占比均顯著高于未發生臨床不良事件，兩種不同來源的腎臟移植都應盡可能的選擇術前CDC檢測結果偏低的受者進行移植。

活體供腎;尸體供腎;不良事件;交叉配型;腎移植

在臨床器官移植領域尤其是在腎移植手術前，補體依賴的微量淋巴細胞毒 (complement dependent cytotoxicity，CDC) 交叉配型實驗一直都是作為移植前預防排斥反應發生的重要和必需的實驗[1-2]。隨著新型免疫抑制劑的應用以及器官移植技術的不斷完善，同種異體腎移植已成為治療終末期腎臟疾病患者的最佳替代治療方法[3-4]。目前臨床醫師均普遍重視在術前針對受者體內預先存在的抗供者人類白細胞抗原(human leukocyte antigen，HLA)的HLA抗體做檢測以減少術后排斥反應及并發癥的發生[5-6]，而移植前供受者間交叉配型實驗可檢測受者血清中特異性針對供者HLA抗原的同種抗體[7]。筆者收集了137例初次腎移植患者的臨床資料，對兩種供體來源的移植術前以及術后與臨床療效相關的CDC實驗檢測結果進行對照研究，進一步探討受者在腎移植前做CDC實驗檢測的臨床意義，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 研究對象 收集安徽醫科大學第一附屬醫院泌尿外科2008年1月～2016年2月首次行腎臟移植患者的臨床資料。尸體供腎移植受者共53例，均明確診斷為慢性腎功能不全尿毒癥期，其中男37例，女16例，18～58(39.23±10.40)歲，ABO血型相同48例，相容5例，術前群體反應性抗體(panel reactive antibodies，PRA)檢測均為陰性；活體供腎移植受者共84例，同樣都明確診斷為慢性腎功能不全尿毒癥期，其中男60例，女24例，16～56(32.75±8.88)歲，ABO血型相同61例，相容23例，術前PRA檢測同樣均為陰性?；铙w供腎移植供者84例均為親屬，其中血緣親屬供腎79例(父母供給子女64例，子女供給父母1例，姑姑嬸嬸供給侄子2例，兄弟姐妹供腎12例)，非血緣親屬供腎5例(丈夫供給妻子1例，妻子供給丈夫4例)，均系自愿捐腎并嚴格遵守《人體器官移植條例》相關要求。

1.2 CDC交叉配型實驗結果的測定 采用Ficoll-Hypaque密度梯度離心法，從活體供腎者外周血或尸體供腎者脾臟分離出淋巴細胞，用PBS調節細胞濃度至(2～2.5)×106/ml(每孔約2 000個細胞)備用。在Terasaki-blank板上將每排第1孔設為細胞對照，第2孔設為補體對照，第3孔為血清對照，第4孔為陽性對照，第5孔為樣本孔，每孔加無菌礦物油10 μl和供者淋巴細胞1 μl，另外還需加入1 μl PBS至第1孔(細胞對照)，加3 μl兔補體至第2孔(補體對照)，加1 μl受者血清至第3孔(血清對照)，加1 μl陽性血清和3 μl兔補體至第4孔(陽性對照)，加1 μl受者血清和3 μl兔補體至第5孔(樣本孔)中，輕輕震蕩搖勻，恒溫(37 ℃)孵育60 min后每孔加入熒光終止劑5 μl，室溫放置15 min后于倒置相差熒光顯微鏡下計數200個淋巴細胞中死亡的淋巴細胞數，結果以百分數(%)表示。

2 結果

2.1 受體基本臨床資料及術前CDC實驗結果比較 尸體供腎移植組患者年齡以及術前CDC實驗結果顯著高于活體供腎移植組(P<0.05)，見表1。兩種供體來源的移植術前CDC實驗顯微鏡下可見：死淋巴細胞體積稍大，在熒光染色劑的作用下呈紅色，活淋巴細胞體積偏小，在熒光染色劑的作用下呈綠色，見圖1。

圖1 免疫熒光染色法觀察CDC實驗結果 ×200

A：活體供腎移植；B：尸體供腎移植；1：細胞對照；2：補體對照；3：血清對照；4：陽性對照；5：樣本

表1 尸體與活體供腎移植一般臨床資料及術前CDC實驗結果比較

2.2 兩種供體來源的移植術后一般臨床效果的比較 尸體供腎移植組與活體供腎移植組在術后未發生臨床不良事件率上無顯著性差異；尸體供腎移植組在術后1年內受者死亡/腎丟失率、排斥反應/延遲恢復發生率上顯著高于活體供腎移植組(P<0.05)，而在肺部感染發生率上，尸體供腎移植組要低于活體供腎移植組，但差異無統計學意義，見表2。

表2 兩種供體來源的移植術后一般臨床效果比較[n(%)]

2.3 與臨床效果相關的術前CDC實驗結果比較 移植后活體供腎移植組在發生受者死亡/腎丟失時其術前CDC檢查結果顯著高于未發生臨床不良事件的術前CDC檢測結果(P<0.05)，除此之外，兩組移植在發生臨床不良事件時其術前CDC檢查結果與未發生臨床不良事件的術前CDC檢測結果比較均無顯著性增加，見表3。但移植后在發生各種不良事件時尸體供腎移植組術前CDC實驗檢測結果在9%以上或者活體供腎移植組術前CDC實驗檢測結果在4%以上的占比與未發生臨床不良事件相比均顯著增高，見表4。

表3 與臨床效果相關的術前CDC檢測結果的比較±s，%)

活體供腎移植組中與未發生臨床不良事件比較：*P<0.05

表4 兩種供腎移植術前CDC檢測結果在各相關臨床效果中占比情況的比較[n(%)]

3 討論

近年來國內外醫學工作者均將術前PRA檢測陰性者作為移植受者的首選[8-9]，因此本次調查研究旨在探討在PRA檢測為陰性的情況下，不同來源的腎臟移植,術前CDC交叉配型結果的差異及與術后不良事件內在的關系，為臨床醫師在術前選擇更加合適的供體提供意見和幫助。結果顯示尸體供腎移植組CDC實驗結果顯著高于活體供腎移植組，這一方面可能因為本研究中活體供腎移植組供受者間94%以上有3代以內血緣關系，其體內存在的相同或部分相同的遺傳染色體導致供受體間有更好的組織相容性；而另一方面與前文列出的排斥反應/延遲恢復、1年內受者死亡/腎丟失的發生率相結合充分說明了CDC結果越高其術后發生急慢性排斥反應的可能性也就越大。大量研究[4,10-11]表明腎移植術后的不良事件主要有患者死亡、移植物失功、移植物丟失、急慢性排斥反應、腎功能延遲恢復以及并發的各種感染。而在術后感染中危害程度最大的、病死率最高的即為肺部感染[12]。因此，筆者本次研究將移植手術后的不良事件歸為3大類，通過對這些臨床資料的回顧性分析顯示雖然兩種來源的供腎移植在未發生臨床不良事件率上差異無統計學意義，但在1年內受者死亡/腎丟失、排斥反應/延遲恢復的發生率上，尸體供腎移植組顯著高于活體供腎移植組，然而在肺部感染發生率上活體供腎移植組反而略高于尸體供腎移植組，這可能與安徽醫科大學第一附屬醫院活體供腎移植短期內死亡率低、圍手術期大量免疫抑制劑的應用以及尸體供腎移植樣本數總體偏小有關。

CDC交叉配型實驗是最早的也是最經典的臨床器官移植領域實驗技術，不同于PRA檢測，它是特異性的針對供者體內抗體，實驗簡單易行。本研究顯示，不管是對于尸體供腎移植還是活體供腎移植，CDC交叉配型實驗結合PRA檢測，對選擇合適的受者、預防排斥反應及并發癥的發生以及改善移植物存活狀況等方面都有重要意義。

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Before surgery CDC test results and the internal relationship of clinical for cadaveric donor and living related donor kidney transplantation

Zhong Tao1, Liao Guiyi2, Xu Wei1, et al

(1DeptofBloodTransfusion，2DeptofUrology，TheFirstAffiliatedHospitalofAnhuiMedicalUniversity，Hefei230022)

To analyze the effect of the complement-dependent cytotoxicity (CDC) crossmatch and the internal relationship with the clinical results.The results of the cadaveric donor before kidney transplantation surgery CDC test with respect to the living related donors transplantation were significantly higher (P<0.05). After transplantation, for the death of the recipient(graft loss), graft rejection(incidence of delay recovery), cadaveric donor kidney transplantation group were significantly higher than that of living related donor kidney transplantation group(P<0.05). The deceased donor kidney transplantation in the event of the death(graft loss),graft rejection(delay recovery) and lung infections these adverse events CDC test resulted in more than 9%,which was significantly higher than the clinical adverse events that had not occurred;living donor kidney transplant recipients in the event of the death(graft loss),graft rejection(delay recovery) and lung infections these adverse events CDC test resulted in more than 4%,which was also higher than the clinical adverse event which had not occurred.The lower results of the preoperative CDC test should be selected for the two different sources transplant recipient of the kidney transplant.Key words cadaveric donor; living related donor; adverse event；crossmatch; kidney transplantation

安徽省自然科學基金(編號：1508085SMH226)

安徽醫科大學第一附屬醫院1輸血科、2泌尿外科，合肥 230022

鐘 濤，男，碩士，主管技師； 卞茂紅，男，副教授，主任技師，碩士生導師，責任作者，E-mail:mhbian@126.com

時間：2016-10-12 13:23:00

http://www.cnki.net/kcms/detail/34.1065.R.20161012.1323.036.html

R 699.2

A

1000-1492(2016)11-1704-04

10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2016.11.036

2016-08-05接收