板栗殼生藥研究及有效成分沒食子酸、綠原酸、蘆丁含量測(cè)定

蘇麗娜,王小慶

(曲靖醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校藥學(xué)系,云南曲靖 655000)

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板栗殼生藥研究及有效成分沒食子酸、綠原酸、蘆丁含量測(cè)定

蘇麗娜,王小慶

(曲靖醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校藥學(xué)系,云南曲靖 655000)

采用性狀鑒別、組織切片鑒別、粉末鑒別對(duì)板栗殼進(jìn)行生藥研究。建立HPLC法同時(shí)測(cè)定板栗殼中沒食子酸、綠原酸和蘆丁含量,色譜條件為C18柱,甲醇-0.4%磷酸為流動(dòng)相梯度洗脫,檢測(cè)波長(zhǎng)275 nm,流速1 mL/min,柱溫30 ℃。結(jié)果表明,板栗殼橫切面、縱切面果皮細(xì)胞特點(diǎn)、中果皮的石細(xì)胞群和石細(xì)胞環(huán)帶、內(nèi)果皮較多的非腺毛、種脊部位的三角形維管束及粉末中果皮細(xì)胞、石細(xì)胞、非腺毛特征均可作為板栗殼的生藥鑒別特征,為板栗殼生藥學(xué)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究奠定基礎(chǔ)。測(cè)定11批云南不同產(chǎn)地板栗殼樣品中沒食子酸含量為0.328～0.362 mg/g,綠原酸含量為0.129～0.141 mg/g,蘆丁含量為0.180～0.230 mg/g。該含量測(cè)定方法操作簡(jiǎn)單,結(jié)果準(zhǔn)確,專屬性強(qiáng),為板栗殼質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立提供依據(jù)。

板栗殼,沒食子酸,綠原酸,蘆丁,高效液相色譜,生藥研究

板栗殼為殼斗科植物板栗(Castanea mollissima Blume)的外果皮,藥性甘、澀、平,具有降逆、止血的功效,主治反胃、鼻衄、便血等癥[1]。現(xiàn)代藥理研究表明:板栗殼的乙醇、乙酸乙酯、氯仿、正丁醇和水提取液具有不同程度的抑菌、抗氧化及抑制α-葡萄糖苷酶活性的作用[2-8],因此板栗殼提取物在醫(yī)藥和保健品等領(lǐng)域有廣闊的應(yīng)用前景。板栗殼主要含有異澤蘭黃素、酚類、黃酮(或其苷類)、有機(jī)酸、植物甾醇(或三萜)、內(nèi)酯、香豆素(或其苷類)、糖、多糖(或苷類)、鞣質(zhì)等成分[9-12],其中有機(jī)酸的主要成分沒食子酸、綠原酸及黃酮類化合物蘆丁均具有抗炎、抗菌、抗突變、抗氧化、抗自由基、抗腫瘤等藥理活性[13-15],對(duì)其進(jìn)行含量測(cè)定,對(duì)板栗殼藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立及應(yīng)用研究有實(shí)際意義。

目前已有報(bào)道[16-18]板栗殼質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究,但研究對(duì)象主要是板栗總苞。韋琴[19]采用高效液相色譜法和鐵鹽催化比色法測(cè)定了板栗殼中原花青素的含量,而沒食子酸、綠原酸和蘆丁的含量測(cè)定未見報(bào)道。因此本實(shí)驗(yàn)采用反相高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定板栗殼中沒食子酸、綠原酸、蘆丁三種有效成分的含量,并對(duì)板栗殼藥材性狀特征,組織切片特征、粉末特征進(jìn)行生藥學(xué)鑒別研究,為板栗殼質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

11批云南不同產(chǎn)地板栗樣品(見表3) 農(nóng)貿(mào)市場(chǎng),剔除栗仁,將板栗殼置于潔凈陰涼處備用;沒食子酸對(duì)照品 中國(guó)食品藥品檢定研究院,純度為89.9%,批號(hào)110831-201204;綠原酸對(duì)照品 中國(guó)食品藥品檢定研究院,純度為96.6%,批號(hào)110753-201314;蘆丁對(duì)照品 中國(guó)食品藥品檢定研究院,純度為90.5%,批號(hào)100080-200904;甲醇和乙腈 色譜純,美國(guó)JT.Baker公司;超純水為本實(shí)驗(yàn)室超純水器自制 南京易普易達(dá)科技發(fā)展有限公司;其他試劑 均為分析純。

1510系列高效液相色譜儀 包括高壓四元泵,在線脫氣機(jī),自動(dòng)進(jìn)樣器,PDA二極管陣列檢測(cè)器,柱溫箱,美國(guó)科學(xué)系統(tǒng);NikonE400數(shù)碼一體化顯微鏡系統(tǒng)和NikonDXM1200攝像頭 日本尼康;KQ-250VDB超聲波清洗器 昆山市超聲儀器有限公司;MS105DU電子天平 瑞士梅特勒-托利多公司;DFY-200搖擺式高速萬能粉碎機(jī) 溫嶺市林大機(jī)械有限公司;RE52CS-1旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 上海亞榮生化儀器廠。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 板栗殼顯微切片和粉末切片的制備 顯微切片:選取適當(dāng)材料放入丙三醇-50%乙醇(1∶1)溶液中軟化48 h依次轉(zhuǎn)移到70%乙醇、80%乙醇、90%乙醇中脫水各3 h后用無水乙醇浸泡兩次使脫水完全,每次10 min。脫水后將材料依次放于正丁醇-無水乙醇(1∶1)1 h、正丁醇-無水乙醇(4∶1)30 min和正丁醇(重復(fù)1次)30 min透明。透明后在正丁醇溶液中少量多次加入已熔化的石蠟,待石蠟-正丁醇為1∶1時(shí),倒出混合溶液,加入純石蠟55 ℃浸蠟24～48 h。浸蠟完全后將材料包埋于石蠟中,待完全凝固后切成10～16 μm的切片,將切片放入滴有蒸餾水的干凈載玻片上置于恒溫臺(tái)上展片,待切片完全展開用吸水紙吸去蒸餾水置于電熱干燥箱中36 ℃烘片24 h,以二甲苯熔蠟兩次,每次30 min,后依次放入二甲苯-無水乙醇(1∶1)、無水乙醇、95%乙醇、80%乙醇、70%乙醇中各15 min,然后放入0.5%番紅(50%乙醇溶液)中染色24 h后依次放入50%乙醇、70%乙醇中各15 min后,放入0.1%固綠(95%乙醇溶液)中對(duì)染5 s,過95%乙醇、無水乙醇(兩次)、二甲苯(兩次)洗去殘留的固綠。切片從二甲苯中取出后直接用中性樹膠封片后數(shù)碼攝影顯微鏡觀察,拍照。

粉末切片:藥材粉碎后過40目篩,取少許粉末放于干凈的載玻片上,滴加水合氯醛溶液,于酒精燈外焰處加熱透化,反復(fù)透化三次,再滴加稀甘油溶液,封片后數(shù)碼攝影顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)特征,拍照。

1.2.2 色譜條件 采用反相高效液相色譜法測(cè)定沒食子酸、綠原酸和蘆丁的含量。Hypersil ODS2色譜柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);參考文獻(xiàn)[20-24]分別采用乙腈-水,甲醇-水,加入不同比例的冰醋酸或磷酸作流動(dòng)相,利用等度洗脫或梯度洗脫分離沒食子酸、綠原酸和蘆丁。檢測(cè)波長(zhǎng)275 nm;流速1 mL/min,柱溫30 ℃,進(jìn)樣體積10 μL。

1.2.3 對(duì)照品溶液的制備 取沒食子酸、綠原酸、蘆丁對(duì)照品適量,加甲醇溶解并定容,分別得1.44、1.76、1.35 mg/mL貯備液。量取貯備液適量,加50%甲醇制成對(duì)照品混合溶液,其中沒食子酸、綠原酸、蘆丁的質(zhì)量濃度分別為53.33、65.18、50.00 μg/mL。所有對(duì)照溶液制備后避光儲(chǔ)存于4 ℃?zhèn)溆谩?/p>

1.2.4 供試品溶液的制備 板栗殼晾干粉碎過200目篩,干燥至恒重。精密稱取板栗殼粉末0.2 g,分別加入極性不同的甲醇、75%甲醇、50%甲醇,95%乙醇、75%乙醇、50%乙醇、乙酸乙酯和石油醚各30 mL,40 ℃超聲(頻率20 kHz)間歇提取45 min,冷卻,濾過,濾液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去提取溶劑,殘?jiān)舆m量甲醇溶解定容至25 mL,用0.22 μm有機(jī)濾膜過濾,即得。

1.2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密量取1.2.3項(xiàng)下對(duì)照品混合溶液適量,加50%甲醇稀釋使沒食子酸的含量為10.67、5.34、2.66、1.34、0.67、0.34 μg/mL,綠原酸含量為13.04、6.52、3.26、1.63、0.81、0.41 μg/mL,蘆丁含量為10.00、5.00、2.50、1.25、0.63、0.32 μg/mL。取10 μL注入高效液相色譜儀進(jìn)樣后以峰面積為縱坐標(biāo),對(duì)應(yīng)的各對(duì)照品的濃度為橫坐標(biāo),得出各對(duì)照品濃度與峰面積的線性關(guān)系式。

2 結(jié)果與分析

2.1 性狀鑒別

本品破碎為大小不等的不規(guī)則塊片,厚約1 mm。外表面褐色或棕褐色,頂端密被淡黃色絨毛,其余部位絨毛稀疏稍光滑,內(nèi)表面淡黃色至淡褐色,被密集長(zhǎng)絨毛。基底淺棕色,表面粗糙,無絨毛。質(zhì)堅(jiān)硬,易折斷,斷面凹凸不平。氣微、味微澀。見圖1。

圖1 板栗殼性狀圖Fig.1 Characters of chestnut epicarp

2.2 顯微鑒別

2.2.1 板栗殼組織切片 板栗殼橫切面:外果皮細(xì)胞長(zhǎng)圓柱形,淡黃色呈柵狀排列,壁稍厚,外被角質(zhì)層;中果皮由數(shù)列細(xì)胞構(gòu)成,散有小型外韌型維管束;內(nèi)果皮為一列小方形薄壁細(xì)胞。種皮由一列細(xì)胞構(gòu)成,內(nèi)可見外胚乳。見圖2。板栗殼縱切面:外果皮由一列長(zhǎng)方形細(xì)胞構(gòu)成,外被角質(zhì)層,中果皮層和內(nèi)果皮層細(xì)胞呈黃棕色,多皺縮。見圖3。

圖2 板栗殼橫切面圖Fig.2 Transverse section micrographs of chestnut epicarp注:1角質(zhì)層,2外果皮,3中果皮,4維管束, 5內(nèi)果皮,6種皮,7外胚乳。

圖3 板栗殼縱切面圖Fig.3 Longitudinal section micrographs of chestnut epicarp注:1角質(zhì)層,2外果皮,3中果皮,4內(nèi)果皮。

2.2.2 板栗殼基底組織切片 板栗殼基底橫切面:外果皮由數(shù)列細(xì)胞構(gòu)成,可見草酸鈣簇晶、方晶;外果皮內(nèi)側(cè),中果皮外側(cè)有較多石細(xì)胞群,石細(xì)胞較大,多為類圓形、不規(guī)則形、分枝狀,層紋較明顯,有的可見孔溝。中果皮由十余列薄壁細(xì)胞構(gòu)成,內(nèi)含棕色色素。中果皮內(nèi)側(cè)有一石細(xì)胞環(huán)帶,石細(xì)胞較小,呈類圓形、類方形和不規(guī)則形,層紋和孔溝隱約可見。石細(xì)胞環(huán)帶的上下兩側(cè),均散在草酸鈣簇晶。內(nèi)果皮內(nèi)側(cè)有較多非腺毛,種脊部位有維管束。見圖4。板栗殼基底縱切面:外果皮由數(shù)列細(xì)胞構(gòu)成。中果皮外側(cè)有較多石細(xì)胞群及少量小型維管束。石細(xì)胞群成類圓形散在,石細(xì)胞多為類圓形、不規(guī)則形,壁較厚,層紋明顯,有的可見孔溝。石細(xì)胞群周圍、維管束及種脊維管束旁可見草酸鈣方晶。內(nèi)果皮由一列細(xì)胞構(gòu)成,內(nèi)含棕色色素,可見較多非腺毛。見圖5。

圖4 板栗殼基底橫切面圖Fig.4 Base transverse section micrographs of chestnut epicarp注:1:外果皮,2:石細(xì)胞群,3:草酸鈣方晶,4:草酸鈣簇晶, 5:中果皮,6:石細(xì)胞帶,7:內(nèi)果皮,8:非腺毛,9:種脊維管束。

圖5 板栗殼基底縱切面圖Fig.5 Base longitudinal section micrographs of chestnut epicarp注:1:外果皮,2:維管束,3:石細(xì)胞群,4:中果皮, 5:內(nèi)果皮,6:非腺毛,7:種脊維管束。

2.2.3 板栗殼粉末 粉末灰褐色,氣微,味微澀。果皮表皮細(xì)胞表面觀呈多角形,壁厚,表面有角質(zhì)紋線,內(nèi)含黃棕色物質(zhì)。中果皮細(xì)胞多角形,呈淡黃色。內(nèi)果皮細(xì)胞多為方形,有網(wǎng)狀紋理。胚乳細(xì)胞呈黃褐色,含糊粉粒。中果皮外側(cè)石細(xì)胞極多,較大,呈類圓形、不規(guī)則形、分枝狀,壁厚,層紋較明顯,有的可見孔溝及壁孔,大小約為60～100 μm。中果皮內(nèi)側(cè)石細(xì)胞較小,呈類圓形、類方形和不規(guī)則形,層紋和孔溝隱約可見,大小約為20～50 μm。導(dǎo)管多為螺紋導(dǎo)管,直徑約為18～30 μm。非腺毛為單細(xì)胞,長(zhǎng)80～400 μm,常彎曲,壁增厚。纖維呈束。草酸鈣方晶直徑約為6～50 μm。草酸鈣簇晶直徑約為15～80 μm。

圖6 板栗殼粉末顯微圖Fig.6 Microscopic images of tissue powder of chestnut epicarp注:1:非腺毛,2:石細(xì)胞,3:果皮表皮細(xì)胞,4:草酸鈣方晶, 5:胚乳細(xì)胞,6:中果皮細(xì)胞,7:內(nèi)果皮細(xì)胞, 8:導(dǎo)管,9:果皮纖維,10:草酸鈣簇晶。

2.3 沒食子酸、綠原酸和蘆丁含量測(cè)定

2.3.1 樣品處理?xiàng)l件的優(yōu)化 實(shí)驗(yàn)中選用不同比例的甲醇或乙醇,板栗殼提取液顏色較深,存在大量板栗殼色素,干擾沒食子酸、綠原酸及蘆丁的含量測(cè)定,采用石油醚萃取后,效果仍然不佳。用石油醚浸泡后,再用乙酸乙酯超聲提取,能減少色素及其他成分對(duì)測(cè)定的影響。

因此供試品的制備方法為:精密稱取板栗殼粉末0.2 g,加30 mL石油醚浸泡24 h,棄去石油醚液,藥渣揮干;加30 mL乙酸乙酯,超聲間歇提取45 min,濾過,濾液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙酸乙酯,殘?jiān)舆m量甲醇溶解定容至25 mL,即得。

2.3.2 色譜條件的優(yōu)化 流動(dòng)相為乙腈-0.4%磷酸或甲醇-0.4%磷酸,采用梯度洗脫均能將三種成分分離且不受其它成分的干擾。最終確定色譜條件:流動(dòng)相A(甲醇),流動(dòng)相B(0.4%磷酸),梯度洗脫,見表1,檢測(cè)波長(zhǎng)275 nm;流速1 mL/min,柱溫30 ℃,進(jìn)樣體積10 μL。此色譜條件下所測(cè)定各成分色譜峰與相鄰色譜峰的分離最度均大于1.5,且各色譜峰的對(duì)稱性良好,見圖8。

表1 梯度洗脫Table 1 Gradient elution

2.3.3 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 本實(shí)驗(yàn)采用二極管陣列檢測(cè)器多波長(zhǎng)掃描(見圖7),沒食子酸在220 nm及270 nm處有最大吸收,綠原酸在218 nm及327 nm處有最大吸收,蘆丁在257 nm及350 nm處有最大吸收,分別在各成分的最大紫外吸收附近即254,275,280,290,295,300,310,320 nm波長(zhǎng)處進(jìn)行檢測(cè),在275 nm三種成分檢測(cè)靈敏度較好,故本實(shí)驗(yàn)確定檢測(cè)波長(zhǎng)為275 nm。

圖7 三維光譜圖Fig.7 Three-dimension spectrum注:1.沒食子酸，2.綠原酸，3.蘆丁,圖8同。

圖8 對(duì)照品混合液(A)和板栗殼樣品(B)HPLC色譜圖Fig.8 HPLC chromatograms of reference substances(A)and Chestnut Epicarp(B)

2.3.4 方法學(xué)驗(yàn)證 線性范圍與專屬性:樣品和對(duì)照品的HPLC圖譜見圖8。結(jié)果表明,沒食子酸的保留時(shí)間約為6.0 min,線性回歸方程為y=501.21x+2762.7,r=0.9998,0.34～10.67 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好;綠原酸的保留時(shí)間約為16.0 min,線性回歸方程為y=357.58x+4018.4,r=0.9997,0.41～13.04 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好;蘆丁的保留時(shí)間約為25.1 min,線性回歸方程為y=1073.9x+2380.6,r=0.9997,0.32～10.00 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

表2 加樣回收率測(cè)定結(jié)果Table 2 Results of recovery tests

表3 樣品測(cè)定結(jié)果Table 3 Analytical results of ±s)

精密度實(shí)驗(yàn):精密吸取對(duì)照品混合溶液,用0.22 μm微孔濾膜濾過,取續(xù)濾液,每次進(jìn)樣10 μL,重復(fù)進(jìn)樣6次,測(cè)定峰面積,計(jì)算沒食子酸峰面積RSD為1.54%,綠原酸峰面積RSD為1.81%,蘆丁峰面積RSD為1.86%,結(jié)果表明儀器精密度良好。

重復(fù)性實(shí)驗(yàn):精密吸取2.3.1項(xiàng)下制備的同一批次供試品溶液,用0.22 μm微孔濾膜濾過,棄去粗濾液,取續(xù)濾液,每次進(jìn)樣10 μL,重復(fù)進(jìn)樣6次,測(cè)定峰面積,沒食子酸、綠原酸和蘆丁峰面積RSD分別為1.23%、1.82%、2.35%,結(jié)果表明方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn):精密吸取重復(fù)性實(shí)驗(yàn)項(xiàng)下制備的供試品溶液室溫避光放置,分別在0、2、4、6、8、12、24 h進(jìn)樣,按2.3.2項(xiàng)下色譜條件測(cè)定峰面積。沒食子酸、綠原酸、蘆丁的峰面積RSD分別為1.85%、2.02%、1.97%,結(jié)果表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收率實(shí)驗(yàn):精密稱取6份已知含量的板栗殼粉末0.2 g,分別精密加入對(duì)照品混合溶液(每1 mL含沒食子酸、綠原酸和蘆丁1.44、1.76、1.35 mg)0.02 mL,按2.3.1項(xiàng)下制備供試品溶液,用0.22 μm微孔濾膜濾過,棄去粗濾液,取續(xù)濾液,按2.3.2項(xiàng)下色譜條件測(cè)定計(jì)算回收率。各成分平均回收率分別為91.15%、94.69%、98.59%,RSD%分別為7.99%、7.11%、7.54%,見表2,結(jié)果表明各成分加樣回收率良好。

2.3.5 樣品測(cè)定 按2.3.1項(xiàng)下制備11批云南不同產(chǎn)地供試品溶液,用0.22 μm微孔濾膜濾過,棄去粗濾液,取續(xù)濾液,按2.3.2項(xiàng)下色譜條件可同時(shí)測(cè)定供試品溶液中沒食子酸、綠原酸和蘆丁的具體含量值,結(jié)果見表3。11批云南不同產(chǎn)地板栗殼中沒食子酸含量在0.328～0.362 mg/g,綠原酸含量在0.129～0.141 mg/g,蘆丁含量在0.180～0.230 mg/g。

3 結(jié)論

生藥研究實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明板栗殼的主要顯微鑒別特征為:板栗殼橫切面外果皮細(xì)胞長(zhǎng)圓柱形,呈柵狀排列。板栗殼基底橫切面中果皮外側(cè)有較大石細(xì)胞構(gòu)成的石細(xì)胞群,中果皮內(nèi)側(cè)有一石細(xì)胞環(huán)帶,周圍分布較多的草酸鈣簇晶和方晶;內(nèi)果皮內(nèi)側(cè)有較多非腺毛,種脊部位有一類三角形維管束。粉末特征中,果皮表皮細(xì)胞和中果皮細(xì)胞呈多角形,內(nèi)果皮細(xì)胞多為方形,有較多層紋明顯的大型厚壁分枝狀石細(xì)胞及層紋和孔溝隱約可見的小型石細(xì)胞,非腺毛為厚壁單細(xì)胞。本文從板栗殼性狀、組織切片、粉末特征對(duì)其做了全面的生藥研究,這些特征在文獻(xiàn)中未見報(bào)道,為板栗殼生藥學(xué)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究奠定了基礎(chǔ)。

采用反相HPLC法,梯度洗脫,可同時(shí)測(cè)定板栗殼樣品中沒食子酸、綠原酸和蘆丁的含量,各成分質(zhì)量濃度與峰面積在測(cè)定范圍內(nèi)均呈良好的線性關(guān)系(r≥0.9997),平均加樣回收率分別為91.15%、94.69%、98.59%,RSD%分別為7.99%、7.11%、7.54%,該方法操作簡(jiǎn)單,結(jié)果準(zhǔn)確,專屬性強(qiáng),為板栗殼質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立提供依據(jù)

[1]中華本草編輯委員會(huì).中華本草(第二卷)[J].上海:科學(xué)技術(shù)出版社,1999:419-421.

[2]陳曉天,李俊卿,宋元達(dá).栗殼抑菌物質(zhì)的提取及其抑菌作用的研究[J].食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào),2016,35(8):54-58.

[3]鄭佳欣,李怡婧,汪晨陽(yáng),等.板栗殼鞣質(zhì)提取及其對(duì) DPPH自由基清除活性的研究[J].食品工業(yè)科技,2016,37(3):211-215.

[4]韋琴,樂薇,呂凱波,等.板栗殼原花青素的提取及體外抑菌作用研究[J].食品與發(fā)酵工業(yè),2016,42(4):214-219.

[5]金黎明,陳苛蒙,王寧,等.板栗殼棕色素的提取及性質(zhì)研究[J].食品研究與開發(fā),2016,37(6):50-54.

[6]冉靚,李素蓮,楊慶,等.板栗殼不同溶劑提取物抗氧化活性的研究[J].食品工業(yè),2013,34(5):156-158。

[7]許衛(wèi)軍,張紅霞,吳長(zhǎng)忠,等.板栗殼水提物對(duì)缺氧小鼠氧自由基的影響[J].臨床醫(yī)學(xué),2012,32(4):104-105.

[8]劉莉,唐新玥,張欣珂,等.板栗殼中多酚的提取純化及其抑制α-葡萄糖苷酶活性的研究[J].食品工業(yè)科技,2015,36(6):265-268.

[9]賈陸,席芳,王娜,等.栗殼化學(xué)成分研究[J].中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志,2010,41(2):98-102.

[10]趙德義,高文海,花成文,等. 板栗殼化學(xué)成分的初步研究[J].陜西林業(yè)科技,2003,2:14.

[11]盧川,吳兆華,高慧嬡,等.板栗種皮化學(xué)成分的分離與鑒定[J].沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào),2009,26(5):357-360.

[12]盧川,吳迪,高慧媛,等.板栗種皮化學(xué)成分的分離與鑒定[J].沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào),2010,27(6):440-442.

[13]常連舉,張宗,黃嘉玲,等.沒食子酸的制備與應(yīng)用綜述[J].生物質(zhì)化學(xué)工程,2010,44(4):48-52.

[14]劉穎,郭明曄,白根本.綠原酸的研究進(jìn)展[J].中藥材,2012,35(7):1180-1185.

[15]艾鳳偉,李詩(shī)瑩,成效天,等.蘆丁制劑的研究新進(jìn)展[J]. 中成藥,2012,34(7):1347-1350.

[16]王世偉,張小慧,劉霞,等. 板栗殼質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究[J].中國(guó)藥物與臨床,2015,15(7):947-9455.

[17]和靜萍,武尉杰,譚睿,等.板栗殼的生藥鑒別研究[J]. 世界科學(xué)技術(shù)—中醫(yī)藥現(xiàn)代,2014,16(9):1908-1911.

[18]劉淑萍,王蕾.栗蓬抗菌成分提取工藝的優(yōu)化與聯(lián)合測(cè)定[J]. 浙江大學(xué)學(xué)報(bào)：農(nóng)業(yè)與生命科學(xué)版,2016,42(1):23-29.

[19]韋琴.板栗殼中原花青素含量檢測(cè)方法的比較研究[J]. 食品與機(jī)械,2016,32(3):77-81.

[20]謝苗,楊淋,楊曉珍,等.HPLC 法同時(shí)測(cè)定紫地榆3 種提取物中4 種成分[J].中成藥,2016,38(5):1066-1070.

[21]劉宇,張明明,劉墨祥.速效止瀉膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究[J].中成藥,2015,37(9):1969-1972.

[22]邸學(xué),谷麗艷,王海波,等.HPLC同時(shí)測(cè)定桑葉中綠原酸、蘆丁、異槲皮苷、紫云英苷、槲皮素含量[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2014,20(15):92-95.

[23]陳曉鵬,鄂秀輝,夏忠庭,等.HPLC法同時(shí)定量測(cè)定養(yǎng)血清腦顆粒中7個(gè)主要成分[J].中成藥,2013,35(9):1921-1924.

[24]章運(yùn)典,周里欣,陳洪英.RP-HPLC法同時(shí)測(cè)定天智顆粒中天麻素、梔子苷、蘆丁和黃芩苷[J].中成藥,2014,36(8):1670-1673.

Pharmacognostical studies of Chestnut Epicarp and determination of active ingredients including gallic acid,chlorogenic acid and rutin

SU Li-na,WANG Xiao-qin

(Department of pharmacy,Qujing Medical College,Qujing 655000,China)

PharmacognosticalstudiesofChestnutEpicarpwerecarriedoutbyusingmorphologicalidentification,tissuesliceidentificationandpowderidentification.Gallicacid,chlorogenicacidandrutinweresimultaneousdeterminedbyHPLCequippedwithHypersilODS2columnandUVdetectionwasused,thedetectionwavelengthwassetat275nm.Themobilephasewasconsisitedofmethanoland0.4%phosphoricacidwithgradientelution.Theflowratewas1.0mL/minandthecolumntemperaturewasat30 ℃.TheresultsshowedthatthesefeaturesintransverseandlongitudinalsectionsofChestnutEpicarp,pericarpcell,stonecellsgroupsandstonecellringofsarcocarp,alargenumberofnon-glandularhairsofendocarpandtriangularvascularbundlelocatedattheraphesitecouldbeusedasChestnutEpicarppharmacognosticalcharacteristics,additionally,thepowdercharacteristicsofpericarpcell,stonecellsandnon-glandularhairswerepharmacognosticalcharacteristicsofChestnutEpicarp,whichlaidthefoundationtofurtherstudypharmacognosticalqualitystandardofchestnutepicarp.Thecontentrangeofgallicacidwas0.328～0.362mg/g,chlorogenicacidwas0.129～0.141mg/g,andrutinwas0.180～0.230mg/ginthechestnutepicarpproducedat11differentplacesinYunnan.Themethodwassimple,accurateandspecific.Itcanprovidebasisfortheestablishmentofqualitystandardofchestnutepicarp.

ChestnutEpicarp;gallicacid;chlorogenicacid;Rutin;HPLC;pharmacognosticalstudies

2016-04-21

蘇麗娜(1980-), 碩士研究生，副教授，研究方向：藥物質(zhì)量控制及體內(nèi)藥物分析， E-mail：sulina828@163.com。

云南省教育廳科學(xué)研究基金項(xiàng)目(2012Y210)。

TS207.3

A

1002-0306(2016)21-0323-06

10.13386/j.issn1002-0306.2016.21.054