MMP-2的表達及微血管密度與乳腺癌淋巴結轉移的關系

任俊玲，王亞兵，陳 斌

(1.蕪湖市第一人民醫院 普外科，安徽 蕪湖 241000；2.皖南醫學院第一附屬醫院 弋磯山醫院 甲乳外科，安徽

蕪湖 241001)

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·臨床醫學·

MMP-2的表達及微血管密度與乳腺癌淋巴結轉移的關系

任俊玲1，王亞兵2，陳 斌2

(1.蕪湖市第一人民醫院 普外科，安徽 蕪湖 241000；2.皖南醫學院第一附屬醫院 弋磯山醫院 甲乳外科，安徽

蕪湖 241001)

目的：探討乳腺癌組織中基質金屬蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)的表達及微血管密度(microvessel density,MVD)與乳腺癌生物學特性的相關性。方法：采用免疫組織化學方法檢測62例乳腺癌組織中MMP-2和MVD(CD34)表達。結果：淋轉組MMP-2的陽性表達率(74%)、表達強度及MVD值(48.05±13.49)明顯高于非淋轉組(P<0.05)；MVD值在MMP-2不同表達中存在差異；MMP-2的表達和MVD的含量在不同乳腺癌TNM分期中存在差異。結論：MMP-2可通過促進降解細胞外基質、促進乳腺癌新生血管形成而促進乳腺癌的進展，MMP-2及MVD在乳腺癌發展及轉移中可能發揮重要作用。

乳腺癌；基質金屬蛋白酶-2；微血管密度

【DOI】10.3969/j.issn.1002-0217.2016.06.008

乳腺癌是女性中位列第一的惡性腫瘤，是危害婦女身心健康的常見疾病[1]。腫瘤血管密度與腫瘤的增殖、生長、侵襲轉移直接相關，也和多種細胞因子的作用相關?；|金屬蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)是MMPs的一員，它在腫瘤的浸潤轉移中起重要作用，研究提示其可通過降解細胞基底膜和細胞外基質,促進新生血管發生[2]。本文采用免疫組化法檢測淋轉組和非淋轉組乳腺癌組織中的MVD值和MMP-2表達，為闡述其在乳腺癌淋巴結發生轉移中的生物學意義提供理論依據。

1 資料與方法

1．1 一般資料 62例皖南醫學院弋磯山醫院甲乳外科2008年1月～2010年12月收治并行乳腺癌改良根治術的患者，根據病理有無淋巴結轉移分成兩組，淋轉組38例，非淋轉組24例。年齡32～68歲，中位年齡49歲，均為女性。全組病例經病理確診，包塊浸潤性小葉癌3例，浸潤性導管癌50例，其他9例。

1．2 標本及試劑 標本用10%甲醛固定，石蠟包埋、切片。試劑：標記的山羊抗兔IgG、兔抗人MMP-2多克隆抗體、生物素標記的羊抗鼠IgG、鼠抗人CD34單克隆抗體均購自福州邁新公司；DAB顯色試劑盒由北京中衫金橋公司提供。

1．3 檢測方法 采用免疫組織化學法(SABC法)，將標本4 μm厚切片，常規脫蠟，去除內源性過氧化物酶，微波修復抗原，分別滴加MMP-2和CD34 40℃過夜，同時，用不加一抗的切片作陰性對照，滴加生物素化二抗工作液，滴加三抗SABC試劑 DAB顯色，蘇木精輕度復染，中性樹膠封片，顯微鏡下觀察。

1．4 結果 染色后，400高倍視野下，觀察10個視野，陽性表現為胞質內出現棕黃色顆粒，每個視野選100個腫瘤細胞，按腫瘤細胞中陽性比例計算百分率，<10%為陰性(-)；10%～24%為陽性(+)；25%～50%為陽性()；>50%為陽性()。因至少出現兩個T<1的情況，予合并同類項，即：陽性細胞<10%為陰性(-)；陽性細胞>10%為陽性(+)；陽性對照取博士德公司提供的陽性切片，陰性對照取PBS液代替一抗的乳腺癌組織切片。MVD計數參照Weidner方法[3]進行，即低倍鏡下選取熱點(高血管密集區)，計數高倍鏡下棕色顆粒的數目，以3個視野下微血管數的平均數表示。

1．5 統計學處理 應用SPSS 13.0統計軟件進行統計分析，有序變量、連續變量之間的比較分別采用χ2檢驗、t檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2．1 MMP-2的表達與乳腺癌淋巴結轉移的關系 MMP-2以胞漿著色為主，淋轉組38例患者中陽性表達28例(74%)，陰性表達10例(26%)；非淋轉組24例患者中陽性表達5例(21%)，陰性表達19例(79%)，兩組比較差異有統計學意義(P<0.01)，見表1。MMP-2的陽性和陰性表達分別見圖1A、B。

圖 1 MMP-2在乳腺癌組織的陽性(A)和陰性(B)表達

2.2 MVD與乳腺癌淋巴結轉移的關系 腫瘤血管內皮細胞染色呈棕黃色、均勻一致。通常腫瘤邊緣MVD值高，也可位于腫瘤組織內的任何部位。本研究顯示乳腺癌淋轉組MVD值(40.85±13.49)明顯高于非淋轉組的MVD值(32.96±8.44)，見表2、圖2,可見CD34標記的MVD的含量在乳腺癌淋轉組與非淋轉組之間存在差異。

表1 淋轉組與非淋轉組MMP-2的比較

組別nMMP-2-+χ2P淋轉組38102816.5040.000非淋轉組24195

注：淋轉組與非淋轉組比較P<0.01。

表2 淋轉組與非淋轉組MVD的比較

組別nMVDtP淋轉組3848.05±13.494.900.000非淋轉組2432.96±8.44

注：淋轉組與非淋轉組比較P<0.01。

a：淋轉組，B：非淋轉組。

圖2 MVD在乳腺癌組織中的表達

2.3 MVD在MMP-2陽性與陰性表達中的差異 62例乳腺癌組織中MMP-2陽性33例，其MVD值49.67±12.15，MMP-2陰性29例，其MVD值33.72±10.47，二者差異有統計學意義，表明MVD在MMP-2陽性與陰性表達中存在差異(P<0.01)。見表3。

MMP-2nMVDtP陽性3349.67±12.155.490.000陰性2933.72±10.47

注：MMP-2與MVD的比較P<0.01。

2.4 MMP-2的表達和MVD的含量在不同乳腺癌TNM分期中的差異 見表4、5。62例乳腺癌中TNM分期Ⅰ期26例，MMP-2陽性5例(19.2%)，MVD值32.04±8.73；Ⅱ期26例，MMP-2陽性19例(73.1%)，MVD值44.31±7.49；Ⅲ期10例，MMP-2陽性9例(90%)，MVD值63.20±11.57；Ⅲ期MMP-2陽性表達率、MVD值顯著高于Ⅰ期、Ⅱ期，MMP-2的表達和MVD的含量在乳腺癌TNM分期中存在差異(P<0.01)。見表4、5。

表4 MVD含量在乳腺癌TNM分期中的差異

TNM分期nMVDFPⅠ期2632.04±8.7347.140.000Ⅱ期2644.31±7.49Ⅲ期1063.20±11.57

表5 MMP-2表達在乳腺癌TNM分期中的差異

TNM分期nMMP-2-+χ2PⅠ期2621521.620.000Ⅱ期26719Ⅲ期1019

3 討論

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤，且發病趨于年輕化[4]。浸潤和轉移是乳腺癌致死的重要原因，乳腺癌組織中MVD、MMP-2的表達與其浸潤、轉移、預后的關系成為目前研究的熱點。

腫瘤的浸潤、轉移是個多步驟、多階段、多基因參與的復雜過程，其中基底膜細胞基質的降解是其發展的必要階段，因此，細胞外基質的降解過程的研究成為熱點[5]?；|金屬蛋白酶(metalloprpteinases,MMPs)是一組肽鏈內切酶，能裂解維系蛋白結構的肽鍵，主要參與結締組織的降解，在腫瘤的生長及轉移中起重要作用，研究認為，MMP-2與乳腺癌關系密切，特別與乳腺癌的侵襲和轉移有關[6]。MMP-2表達增高者，乳腺癌惡性程度高，侵襲、轉移發生率高，且預后較差[7]。MMP-2使基底膜喪失完整性的重要原因是降解其主要成分Ⅳ型膠原和層粘連蛋白，MMP-2可通過影響毛細血管內皮細胞，促進新生血管形成，從而促進腫瘤生長、擴散，還可通過降解基底膜及腫瘤基質，突破基底屏障，促使腫瘤侵襲轉移。本組實驗發現淋轉組38例患者中陽性表達28例(74%)，陰性表達10例(26%)；非淋轉組24例患者中陽性表達5例(21%)，陰性表達19例(79%)，兩組比較差異顯著(P<0.01)。 這與尚培中等[8]報道結果相似，由此可見，MMP-2在乳腺癌的浸潤和轉移中起重要作用，可作為乳腺癌預后的標記物，對腫瘤的侵襲、轉移范圍及程度進行評估。

MVD不但可以確定血管生長水平、腫瘤位置，還可用來評估腫瘤靶向治療的療效，是目前檢測腫瘤微血管水平的金標準[9]。腫瘤血管生成是實體瘤生長和轉移的必要條件。乳腺癌的生長、轉移是一個極為復雜的過程，其中腫瘤組織內MVD是較為重要的影響因素。本研究顯示：淋轉組MVD值(40.85±13.49)明顯高于非淋轉組MVD值(32.96±8.44),可見CD34標記的MVD的含量在乳腺癌淋轉組與非淋轉組之間存在差異，這可能與乳腺癌組織中MVD越高，就越容易為癌細胞提供營養，促進癌細胞的增殖、分化有關。大量研究表明：MVD在乳腺癌淋轉組和非淋轉組間存在差異，MVD高，轉移率高，這與Shpitz等[10]報道一致。

本研究表明，淋轉組MMP-2的陽性表達率(74%)、表達強度及MVD值(48.05±13.49)明顯高于非淋轉組(P<0.05)；MMP-2的表達和MVD的含量在不同乳腺癌TNM分期中存在差異；MVD值在MMP-2不同表達中存在差異。 提示MMP-2的陽性表達及CD34標記的MVD的含量越高，乳腺癌細胞的浸潤與轉移越高，MMP-2可通過促進降解細胞外基質、促進乳腺癌新生血管形成而促進乳腺癌的進展。因此，MMP-2及MVD在乳腺癌發展及轉移中可能發揮重要作用，檢測乳腺癌中MMP-2的表達及MVD值可能有助于判斷乳腺癌預后。

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MMP-2 expression,microvessel density and metastasis of lymph node in breast cancer

REN Junling,WANG Yabing,CHEN Bin

Department of Surgery,Wuhu No.1 People′s Hospital,Wuhu 241000,China

Objective：To investigate the relationship between matrix metalloproteinase-2(MMP-2) expression,microvessel density(MVD) and the biological property in breast carcinoma.Methods:Immunohistochemistry was used to detect MMP-2 expression and MVD in the breast cancer tissues obtained from 62 patients.Results:Patients with lymph node metastasis had significantly higher positive rate of MMP-2(74%) and MVD(48.05±13.49) than those without lymph node involvement(P<0.05).MVD value varied to a certain extent in diverse MMP-2 expression,and MMP-2 expression and MVD content were distinct in patients with diverse TNM staging for breast cancer.Conclusion:MMP-2 may promote the progression of breast cancer through hastening the degradation of extracellular matrix and accelerating neovascularization,suggesting that MMP-2 and MVD play critical part in the development and lymph node metastasis of breast carcinoma.

breast carcinoma;matrix metalloproteinase-2;microvessel density

1002-0217(2016)06-0537-03

安徽省衛生廳醫學科研項目(09B132)

2016-07-15

任俊玲(1982-)，女，主治醫師，碩士,(電話)15357886268，(電子信箱)94366511@qq.com； 王亞兵，主任醫師，(電子信箱)Wangeb3@sina.com，通信作者.

R 737.9

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