含苦杏仁苷中藥材及其飲片二氧化硫超標問題研究

孟杰，王禮均，朱文俊，黃國杰，陳英，寧鶴

四川省中藥飲片有限責任公司，四川 成都 611730

含苦杏仁苷中藥材及其飲片二氧化硫超標問題研究

孟杰，王禮均，朱文俊，黃國杰，陳英，寧鶴

四川省中藥飲片有限責任公司，四川 成都 611730

目的 探索按“蒸餾-碘量法”執行二氧化硫檢測時含苦杏仁苷的一類中藥材及其飲片即使未經硫熏也普遍存在二氧化硫超標的原因。方法 采用頂空氣相色譜-火焰光度法對比“蒸餾-碘量法”測定苦杏仁中二氧化硫含量，進一步將苦杏仁苷對照品與苦杏仁粉末利用常規二氧化硫測定裝置進行硝酸銀滴定與碘滴定相結合試驗。結果 含苦杏仁苷的中藥材及其飲片在日常二氧化硫殘留量測定過程中，有部分碘液的消耗來自苦杏仁苷的分解。結論 不能繼續沿用常規碘量法或氫氧化鈉滴定法對含苦杏仁苷的一類中藥材進行二氧化硫殘留量檢測。

苦杏仁苷；二氧化硫；殘留量超標

在傳統中藥材生產過程中，企業為使中藥材及其飲片外觀色澤好看，同時防霉變、蟲蛀，多對中藥采用硫磺熏蒸的處理辦法[1]。中藥二氧化硫殘留量超標會對人體產生危害，鑒于此，國家藥典委員會在2010年版《中華人民共和國藥典》（以下簡稱《中國藥典》）第二增補本制訂了二氧化硫限量標準，規定除山藥等10種傳統使用硫磺熏蒸的中藥材外，其余中藥材及其飲片的二氧化硫殘留量不得超過150 mg/kg[2]。而在日常中藥材質量檢測過程中，按照2010年版《中國藥典》附錄Ⅸ U二氧化硫殘留量檢測法項下方法測定并計算中藥材及其飲片的二氧化硫殘留量[3]，筆者發現市售未經硫熏藥材苦杏仁、郁李仁、桃仁、蕤仁，以及現取于新鮮桃核中的桃仁均存在二氧化硫嚴重超標的現象。

苦杏仁苷（amygdalin）廣泛存在于以上幾種傳統中藥中，其含量為苦杏仁、郁李仁、桃仁的質量評價指標。2010年版《中國藥典》（一部）規定，苦杏仁、郁李仁、桃仁中苦杏仁苷的含量分別不得少于3.0%、2.0%、2.0%。目前，苦杏仁苷已成為常用的祛痰止咳劑、輔助性抗癌藥物[4-5]。苦杏仁苷分子式為C20H27NO11，屬于糖苷類化合物，結構式為：

苦杏仁苷易水解，在酸性條件下或苦杏仁酶的作用下分解成葡萄糖及具有特殊香味的苯甲醛和劇毒物質氫氰酸，上述過程在室溫下，甚至沒有酸或苦杏仁酶的存在也能迅速發生[6-7]。

氫氰酸含量測定常用硝酸銀滴定法，其原理在于以氰苷形式存在于植物體內的氰化物水解后并進行水蒸氣蒸餾，蒸出的氰化氫可被水液吸收，在堿性條件下，以碘化鉀為指示劑，用硝酸銀標準溶液滴定可測定氰化物的含量[8]。其化學反應如下。

本研究先采用頂空氣相色譜-火焰光度法對比“蒸餾-碘量法”測定苦杏仁中二氧化硫含量，進一步利用苦杏仁粉末與苦杏仁苷對照品按照2010年版《中國藥典》附錄Ⅸ U二氧化硫殘留量檢測法進行碘滴定液消耗量測定，另按硝酸銀滴定法測定苦杏仁粉末與苦杏仁苷對照品水解后的氫氰酸含量，探索實際檢測過程中含苦杏仁苷中藥材及其飲片的二氧化硫超標原因，以期正確指導含苦杏仁苷的中藥材及其飲片的日常質量檢測，以保障醫療行業相關品種的正常供給。

1 儀器與試藥

天美GC7900氣相色譜儀，火焰光度檢測器（FPD），Agilent 7694E頂空進樣器，SPB-3空氣發生器，Waters 2695高效液相色譜儀，Waters 2996二極管陣列檢測器，SHIMADZU AUW220D萬分之一電子天平，旋轉蒸發儀，循環水式多用真空泵，調溫電熱套，恒溫磁力攪拌器，兩頸燒瓶，樣品粉碎機，移液槍。

苦杏仁苷標準品（中國食品藥品檢定研究院，批號110820-201004），市售苦杏仁苷對照品（純度＞90%），碘滴定液（成都市食品藥品檢測中心，濃度0.010 036 mol/L），硝酸銀滴定液（成都市食品藥品檢測中心，濃度0.103 4 mol/L），二氧化硫標準溶液（北京萬佳首化生物科技有限公司，濃度1000 μg/mL），0.1 g/L甲醛吸收液，鹽酸，氫氧化鈉，無水亞硫酸鈉；同批次已知未經硫熏的苦杏仁，一份采用硫熏進行處理，另一份不作處理。

2 方法

2.1 頂空氣相色譜-火焰光度法測定二氧化硫含量

2.1.1 儀器條件 色譜柱：Agilent HP-PLOT/Q毛細管色譜柱（柱長30 m，內徑0.32 mm，涂布厚度20 μm）。氣相色譜（GC）參數：程序升溫（初始溫度50 ℃，保持1 min，以10 ℃/min升至150 ℃，保持5 min），載氣為氮氣，載氣流量2 mL/min，分流進樣（1∶1），進樣口溫度230 ℃，檢測器溫度300 ℃，氫氣流量50 mL/min，輔助氣（氮氣）流量40 mL/min，采用硫化物測定濾光片。頂空進樣器參數：進樣環容積3 mL，頂空瓶溫度95 ℃，進樣環溫度100 ℃，傳輸管溫度120 ℃，平衡時間30 min，高速震蕩，GC循環時間40 min，加壓時間30 s，放空時間15 s。進樣時間30 s。理論板數按二氧化硫峰計算不低于50 000[7]。

2.1.2 溶液制備與測定 精密吸取二氧化硫標準溶液，加水制成每1 mL含5、10、20、40、60、80、100 μg的溶液，搖勻，作為對照品溶液。精密吸取與供試品中二氧化硫殘留量接近的對照品溶液1 mL，置20 mL頂空瓶中，迅速準確加入0.5 mol/L氫氧化鈉溶液5 mL，密封，放入頂空進樣器，頂空進樣。分別取硫熏與未經硫熏的苦杏仁細粉2.0 g，精密稱定，置20 mL頂空瓶中，迅速準確加入0.2 mol/L鹽酸溶液6 mL，密封，沸水浴中加熱30 min，放入頂空進樣器，頂空進樣。

2.2 蒸餾-碘量法測定二氧化硫含量

分別取硫熏與未硫熏的苦杏仁粉末，按2010年版《中國藥典》附錄Ⅸ U二氧化硫殘留量檢測法項下方法，即“蒸餾-碘量法”操作，計算二氧化硫殘留量。

2.3 高效液相色譜結合硝酸銀滴定、碘滴定法測定2.3.1 苦杏仁苷含量測定 按2010年版《中國藥典》（一部）“苦杏仁”項下含量測定方法，采用高效液相色譜法（HPLC）測定苦杏仁樣品及苦杏仁苷對照品中苦杏仁苷的含量。

2.3.2 碘滴定液消耗量測定 取苦杏仁粉末（過二號篩）10.0 g，重復3次，精密稱定。另取苦杏仁苷對照品，每份中苦杏仁苷含量相當于10.0 g苦杏仁粉末，重復3次，按2010年版《中國藥典》（一部）附錄Ⅸ U二氧化硫殘留量測定法測定各樣品的碘滴定液消耗量。

2.3.3 硝酸銀滴定法測定氫氰酸含量 取苦杏仁粉末（過二號篩）10.0 g，重復3次，精密稱定。另取苦杏仁苷對照品，每份中苦杏仁苷含量相當于10.0 g苦杏仁粉末，重復3次，按2010年版《中國藥典》（一部）附錄Ⅸ U二氧化硫殘留量測定法連接各儀器部件并測定，將指示劑淀粉換為10%碘化鉀溶液2 mL并向錐形瓶中加入6 mol/L氨水8 mL，滴定液換為0.103 4 mol/L AgNO3，加熱樣品并開始滴定，至錐形瓶中出現渾濁且不能散去為終點，記錄硝酸銀標準液消耗體積，并做試劑空白試驗。

3 結果與分析

3.1 頂空氣相色譜-火焰光度法與“蒸餾-碘量法”測定結果

按“2.1”“2.2”項下方法測定二氧化硫含量，所得GC圖見圖1，測定結果見表1。

圖1 苦杏仁中二氧化硫GC圖

表1 硫熏與未硫熏苦杏仁樣品不同檢測方法二氧化硫含量測定結果（mg/kg）

根據表1可知，采用頂空氣相色譜-火焰光度法測定未硫熏苦杏仁結果未檢測到二氧化硫的存在，而采用“蒸餾-碘量法”測定結果平均含有370 mg/kg二氧化硫，該結果大大超出了2010年版《中國藥典》對二氧化硫的限量，表明單純“蒸餾-碘量法”不適用于該類藥材的二氧化硫檢測。結合以上2種方法對硫熏苦杏仁二氧化硫殘留量的測定結果：95 mg/kg（硫熏，氣相法）＋370 mg/kg（未硫熏，碘量法）＝465≈468 mg/kg（硫熏，碘量法）。表明采用“蒸餾-碘量法”對苦杏仁進行二氧化硫殘留量測定時，只要扣除苦杏仁自身成分對碘液的消耗量，結果仍然準確。

3.2 苦杏仁苷含量測定結果

按“2.3.1”項下方法測定，苦杏仁苷HPLC圖見圖2。

以峰面積計算供試品與苦杏仁苷對照品中苦杏仁苷含量，結果見表2。本試驗所使用的苦杏仁苷對照品純度為91.71%，苦杏仁粉末中苦杏仁苷含量為5.17%。

圖2 苦杏仁中苦杏仁苷HPLC圖

表2 供試品與純品苦杏仁苷含量測定結果（%）

3.3 碘滴定液消耗量測定結果

按“2.3.2”項下方法測定并計算碘滴定液消耗量，結果見表3。方差分析顯示，在本試驗條件下，苦杏仁苷總量相同的苦杏仁粉末和苦杏仁苷對照品對碘滴定液的消耗量無明顯差異，說明苦杏仁粉末在二氧化硫測定過程中對碘滴定液的消耗作用來自其所含的苦杏仁苷。

表3 碘滴定液消耗量

3.4 硝酸銀滴定液消耗量測定結果

按“2.3.3”項下方法測定并計算硝酸銀滴定液消耗量，結果見表4。方差分析顯示，在本試驗條件下，與苦杏仁苷總量相同的苦杏仁粉末和苦杏仁苷對照品對硝酸銀滴定液的消耗量無明顯差異，說明二者所含苦杏仁苷水解后產生的氰化氫量相同。結合上項進一步說明，未硫熏苦杏仁粉末在二氧化硫測定過程中對碘滴定液的消耗作用全部來自其所含的苦杏仁苷水解產生的氰化氫。

表4 硝酸銀滴定液消耗量

4 討論

本試驗結果表明，含苦杏仁苷未經硫熏的中藥材及其飲片在按2010年版《中國藥典》（一部）附錄Ⅸ U二氧化硫殘留量檢測法檢測其二氧化硫含量時，苦杏仁苷在酸性條件下水解產生氰化氫并被氮氣鼓入收集瓶，溶于水后產生的氫氰酸最終導致碘滴定液的消耗，而長期以來采用被消耗的碘滴定液體積計算此類中藥材及其飲片的二氧化硫含量被證明是不合理的。同理，若采用2015年版《中國藥典》（四部）二氧化硫殘留量測定方法第一法“酸堿滴定法”測定含苦杏仁苷的中藥材二氧化硫殘留量，理論上同樣會因水解后產生的氰化氫被吸收，最終導致氫氧化鈉滴定液消耗而使結果不準確。

由于苦杏仁苷水解產生的氫氰酸可以采用硝酸銀滴定法準確定量，且形成的AgCN非常穩定，但考慮到該滴定結束時產生的渾濁狀態會影響“碘-淀粉”溶液是否變藍的判斷，所以對含苦杏仁苷的中藥材及其飲片二氧化硫實際測定工作，可以通過在同等條件下先采用硝酸銀標準液進行滴定從而定量1份樣品中的氰根離子，并通過計算得出氰根離子對碘或氫氧化鈉滴定液的理論消耗值，再二次利用碘量法或酸堿滴定法測定第2份樣品，通過碘滴定液或氫氧化鈉滴定液消耗量扣除氰根離子的計算消耗量，以計算二氧化硫含量。

此外，可采用頂空氣相色譜-火焰光度法，通過測定氣相中二氧化硫含量，間接測定樣品中的二氧化硫含量，該方法具有操作簡便、快速、準確、靈敏度高等優點，同樣適用于各種中藥材及其飲片中二氧化硫殘留量檢測[9]。還可采用離子色譜法，將中藥材以水蒸氣蒸餾法進行處理，樣品中的亞硫酸鹽系列物質加酸處理后轉化為二氧化硫，隨水蒸氣蒸餾，并被雙氧水吸收、氧化為硫酸根離子，采用離子色譜儀檢測，最后得出二氧化硫計算結果[10]。

對于含有苦杏仁苷的中藥材及其飲片，本研究表明已不能繼續沿用常規碘量法或氫氧化鈉滴定法對其進行二氧化硫殘留量檢測，望有關標準制定部門引起足夠重視并及時加強研究，在新定標準中對相關品種的二氧化硫檢測方法進行特別規定，以期正確指導含苦杏仁苷的中藥材及其飲片的日常質量檢測，保障醫療行業相關品種的正常供給。

[1] 王兆基,關錫耀,汪潔,等.中藥材中二氧化硫的含量測定[J].中草藥, 2000,31(2)：97-99.

[2] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：第二增補本[M].北京：中國醫藥科技出版社,2010：附錄.

[3] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部[M].北京：中國醫藥科技出版社,2010：附錄61.

[4] 邢國秀,李楠,楊美燕,等.天然苦杏仁苷的研究進展[J].中成藥,2003, 25(12)：1007-1009.

[5] 常軍,肖依文,吳文婷,等.苦杏仁苷抗腫瘤機理研究進展[J].藥物生物技術,2014,21(6)：597-599.

[6] 李強,徐小琴,李艷,等.酸法水解苦杏仁苷的研究[J].中國現代中藥, 2009,11(1)：23-25.

[7] 蔣治國,何飛燕,李興芳.飼料中氫氰酸含量測定方法的研究[J].飼料工業,2005,26(22)：41-42.

[8] 李濤,林芳,徐長根,等.頂空氣相色譜法檢測中藥飲片中的二氧化硫[J].中國藥業,2010,19(24)：32-33.

[9] 王曉云,龔漢卿,王明林.頂空氣相色譜法測定膨化大棗中的亞硫酸鹽含量[J].山東化工,2007,36(1)：36-38.

[10] 楊一超,許春斌.離子色譜法測定食品中總二氧化硫含量[J].中國衛生檢驗雜志,2004,14(4)：463-464.

Research on Sulfur Dioxide Exceeding Standard in Chinese Herbal Medicine and Decoction Pieces Containing Amygdalin

MENG Jie, WANG Li-jun, ZHU Wen-jun, HUANG Guo-jie, CHEN Ying,

NING He (Sichuan Traditional Chinese Medicine Decoction Pieces Co., LTD., Chengdu 611730, China)

Objective To explore the causes of some Chinese herbal medicine and decoction pieces containing amygdalin existing the problem of excessive sulfur dioxide even without sulfur smoked through “distill-iodometry”. Methods Headspace gas chromatography-flame photometric method was compared with distill-iodometry method to detect the content of sulfur dioxide in Semen Armeniacae Amarae, and silver nitrate titration and iodometric titration were used to determine the pure amygdalin and sample through conventional sulfur dioxide determination device. Results In the process of determination of sulfur dioxide residues in Chinese herbal medicine and decoction pieces containing amygdalin, some iodine consumption was caused by amygdalin decomposing. Conclusion Conventional iodometric method and sodium hydroxide titration method can no longer be used for detection of sulfur dioxide residue amount of Chinese herbal medicine and decoction pieces containing amygdalin.

amygdalin; sulfur dioxide; residue amount exceeding standard

10.3969/j.issn.1005-5304.2016.01.019

R284.1

A

1005-5304(2016)01-0082-04

2015-07-03）

（

2015-07-25；編輯：陳靜）

王禮均，E-mail：13060049032@163.com