CPNE3蛋白在肺腺癌組織中的表達及其臨床意義

程光嘉 劉順林 王金志

CPNE3蛋白在肺腺癌組織中的表達及其臨床意義

程光嘉 劉順林 王金志

目的 探討CPNE3蛋白在肺腺癌組織中的表達及其臨床意義。方法 收集肺腺癌組織標本82例（肺腺癌組）、癌旁肺組織標本20例（對照組），采用免疫組化SP法檢測CPNE3蛋白的表達情況，并分析CPNE3蛋白在不同性別、年齡、腫瘤分化程度、大小、分期及淋巴結轉移患者中的表達差異。結果 肺腺癌組CPNE3蛋白高表達53例（64.6%）、低表達29例（35.4%），對照組高表達0例（0%）、低表達20例（100%），肺腺癌組CPNE3蛋白高表達率明顯大于對照組（χ2=12.67，P＜0.01）。CPNE3蛋白的表達在不同TNM分期、是否淋巴結轉移患者及不同組織標本中的差異均有統計學意義（P＜0.05或0.01）；在不同性別、年齡、分化程度及腫瘤大小患者中的差異均無統計學意義（均P＞0.05）。結論 CPNE3蛋白在肺腺癌組織中表達增高，并與肺癌的分期、淋巴結轉移相關；CPNE3蛋白可作為評估肺癌患者病變范圍和預后的標志物。

CPNE3蛋白 肺腺癌 臨床

肺癌是全球因腫瘤死亡的主要原因之一，嚴重威脅人類健康。而非小細胞肺癌在所有類型肺癌中占80%左右，其中腺癌占40%左右。檢測肺腺癌組織中CPNE3蛋白的表達，有助于研究CPNE3蛋白在肺癌發病機制中的作用。本研究采用免疫組化SP法檢測肺腺癌組織、癌旁組織中CPNE3蛋白的表達情況，旨在探討CPNE3蛋白檢測在肺腺癌組織中的臨床意義。

1 資料和方法

1.1 一般資料 選取2010年1月至2015年6月手術切除并經病理確診、未經其他治療的肺腺癌組織標本82例（肺腺癌組），其中蘇州大學附屬第一醫院50例，奉化市人民醫院32例。患者男41例，女41例，年齡44～76（61.25±5.56）歲；均行胸部CT、腹部B超、骨掃描及頭顱CT或MRI等檢查；TNM臨床分期：Ⅰ～Ⅲa期67例，Ⅲb～Ⅳ期15例；術前淋巴結穿刺細胞學和（或）手術切除淋巴結病理證實有淋巴結轉移42例，無淋巴結轉移40例。同時取癌旁組織標本20例（離病變組織2cm以上，均經病理證實為正常肺組織）作為對照。

1.2 方法 每個蠟塊取4μm厚連續切片作免疫組化染色，兔抗人CPNE3單克隆抗體購自北京博奧森生物技術有限公司，免疫組化SP試劑盒購自北京中山金橋生物有限公司。采用免疫組化SP法檢測肺癌組織中CPNE3的表達。先將切片置于二甲苯中脫蠟，10min/次，共2次，乙醇梯度水化處理，3%H2O2消除內源性過氧化物酶，EDTA修復液常規修復：微波爐中高火5min、解凍2min、中低火20min加熱以充分暴露抗原位點，待其自然冷卻后，加A液室溫封閉15min，兔抗人CPNE3 4℃孵育過夜15min，1×PBST漂洗3次，5min/次；然后加B液室溫孵育15min，1×PBST漂洗3次，5min/次；再加C液室溫孵育15min，1×PBST漂洗3次，5min/次，DAB顯色10min，終止顯色，蘇木精復染，鹽酸乙醇固定，封片，觀察。采用抗體稀釋液代替一抗作陰性對照。

1.3 結果判斷 光鏡顯微鏡下觀察組織標本的著色程度。CPNE3蛋白陽性表達主要表現為細胞核內呈現棕黃色或棕褐色顆粒，也有少量為胞質內呈現棕黃色。高倍鏡下隨機取4個不同視野，計數細胞總數及核陽性細胞數，按陽性細胞數所占的百分比計分：陽性細胞率≤10%為1分、＞10%且≤50%為2分、＞50%且≤75%為3分、＞75%為4分；同時，根據染色的強弱程度計分：陰性1分，弱染色2分，中等染色3分，強染色4分。通過兩者的乘積來判斷結果：≤6分為低表達，＞6分為高表達。

1.4 統計學處理 應用SPSS22.0統計軟件，計數資料以百分率表示，組間比較采用χ2檢驗。

2 結果

2.1 CPNE3在兩組標本中的表達情況 肺腺癌組CPNE3高表達53例（64.6%），低表達29例（35.4%）；對照組高表達0例（0%），低表達20例（100%）。肺腺癌組CPNE3高表達率高于對照組（χ2=12.67，P＜0.01）。免疫組化染色見圖1。

圖1 CPNE3在肺腺癌組織及癌旁組織中的表達（a：CPNE3在肺腺癌細胞核中呈高表達；b：CPNE3在肺腺癌細胞核中呈低表達；c：CPNE3在癌旁組織中呈低表達；SP法，×400）

2.2 肺腺癌組CPNE3的表達與臨床病理特征的關系 見表1。

由表1可見，CPNE3的表達在不同TNM分期、是否淋巴結轉移及不同組織標本比較差異均有統計學意義（P＜0.05或0.01）；在不同性別、年齡、分化程度及腫瘤大小方面比較差異均無統計學意義（均P＞0.05）。

3 討論

CPNE3是Copines基因家族成員之一，是一類分布廣泛、進化保守的Ca2+依賴性磷脂結合蛋白，其結構特征是在N端有2個C2結構域，是Ca2+和磷脂分子的結合位點，與突觸結合蛋白和蛋白激酶C的C2結構域同源；在C端有1個血管性血友病因子（vWF）A結構域，與整聯蛋白A結構域部分同源[1]，在擬南芥中，vWF的同源結構vWA的功能是結合并募集靶標蛋白在C2結構域的輔助作用下實現準確的靶標蛋白的膜定位[2]。

CPNE3可能具有激酶活性，用CPNE3抗體與K562和Daudi的細胞提取液免疫共沉淀得到具有激酶活性的復合物，體外實驗也證實CPNE3能磷酸化磷脂堿性蛋白和H1組蛋白[3]。最新研究發現在非小細胞肺癌中CPNE3以一種新的腫瘤轉移促進因子的角色出現[4]，在乳腺癌中CPNE3和ErbB2（又名CD340）相互作用促進腫瘤細胞遷移。原位組織芯片分析發現，CPNE3在乳腺癌、前列腺癌和卵巢癌中有不同程度的表達，表明CPNE3在這些腫瘤中可能發揮一定的作用[5]。

惡性腫瘤的侵襲和轉移是相當復雜的臨床病理問題，相關機制目前尚未完全明了。越來越多的分子標志物如癌胚抗原（CEA）、鱗狀細胞癌相關抗原（SCC）、神經元特異烯醇化酯（NSE）等用于肺癌的臨床診斷，但這些標志物在預測腫瘤的早期診斷及轉移上缺乏特異性及敏感性。為了研究CPNE3與肺腺癌的臨床病理關系，本研究通過免疫組化方法檢測82例肺腺癌與20例癌旁組織中CPNE3蛋白表達情況并結合相關臨床病理資料進行分析。研究發現，CPNE3在肺腺癌組織中的表達較癌旁組織明顯增高，而且其表達情況在不同TNM分期、是否淋巴結轉移及不同標本來源比較差異均有統計學意義，在不同性別、年齡、分化程度及腫瘤大小方面比較差異均無統計學意義。CPNE3可能在肺腺癌的發生、發展等機制上起重要作用，在肺腺癌發生浸潤轉移的晚期起著重要作用，其有可能成為預測肺腺癌高度轉移的新的標志物。

表1 肺腺癌組CPNE3的表達與臨床病理特征的關系[例（%）]

[1]Ghislat G,Knecht E.New Ca(2+)-dependent regulators of autophagosome maturation[J].Commun Integr Biol,2012,5(4): 308-311.

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Expression of CPNE3 protein in lung adenocarcinoma and its clinical significance

CHENG Guangjia，LIU Shunlin,WANG Jinzhi. Department of Respiratory Medicine,Fenghua People's Hospital,Fenghua 315500,China

Objective To investigate the expression of CPNE3 protein in lung adenocarcinoma and its clinical significance. Methods The expression of CPNE3 protein was detected by immunohistochemical SP method in 82 specimens of lung adenocarcinoma and 20 specimens of adjacent normal lung tissue.The relationship of CPNE3 expression with sex,age, tumor size,degree of differentiation,staging and lymph nodes metastasis was analyzed. Results The expression of CPNE3 protein in lung adenocarcinoma was significantly higher than that in adjacent normal lung tissue(P＜0.01).The expression levels of CPNE3 in stageⅢb and IV lung adenocarcinoma were significantly higher than those in stage I,ⅡandⅢa(P＜0.05).The CPNE3 expression levels of were higher in lung adenocarcinoma with lymph node metastasis than those without lymph node metastasis(P＜0.05). Conclusion The increased expression of CPNE3 in lung adenocarcinoma is correlated with TNM staging and lymph node metastasis,indicating that CPNE3 may serve as a new marker for evaluation of the severity and prognosis of lung cancer.

CPNE3 protein Lung adenocarcinoma Clinical

2016-04-09）

（本文編輯：馬雯娜）

315500 奉化市人民醫院呼吸科（程光嘉）；蘇州大學附屬第一醫院呼吸科（劉順林）；蘇州大學基礎醫學與生命科學學院（王金志）

劉順林，E-mail：liusl.123@163.com