FOXQ1和CyclinD1在胃癌中的表達及其臨床意義

陳麗麗 曹學全 盧洪勝 楊朝暉 范廣民 章輝 顧華敏

FOXQ1和CyclinD1在胃癌中的表達及其臨床意義

陳麗麗 曹學全 盧洪勝 楊朝暉 范廣民 章輝 顧華敏

目的 研究叉頭框蛋白Q 1（FOXQ1）和細胞周期蛋白D1（CyclinD1）在胃癌中的表達及其臨床意義。方法 應用免疫組化EnVision法檢測80例胃癌組織和25例癌旁組織中FOXQ1和CyclinD1的表達情況，分析其與胃癌臨床病理特征的關系。結果 胃癌組織中FOXQ1和CyclinD1陽性表達率均高于癌旁組織（均P＜0.05）；在不同腫瘤浸潤深度、有無淋巴結轉移及不同臨床分期者之間的差異均有統計學意義（均P＜0.05），而在不同年齡、性別、腫瘤大小及分化程度者之間的差異均無統計學意義（均P＞0.05）。胃癌組織中FOXQ1陽性表達率與CyclinD1陽性表達率呈正相關（P＜0.05）。結論 FOXQ1和CyclinD1高表達在胃癌的發生、發展中起作用，聯合檢測FOXQ1和CyclinD1可用于判斷胃癌的浸潤、轉移潛能及患者的預后。

胃癌 FOXQ1 CyclinD1 免疫組織化學

胃癌是我國最常見的惡性腫瘤之一，其發生、發展與多基因突變及多類型傳導途徑異常有關。叉頭框蛋白Q1（forkhead box Q1，FOXQ1）是一個具有高度保守的叉頭框（FOX）結構的轉錄因子，在腫瘤的侵襲和遠處轉移過程中起重要作用[1]。細胞周期蛋白D1（CyclinD1）是腫瘤細胞增殖周期G1/S期限制點的調控因子，與腫瘤發生、發展有關[2]。本研究采用免疫組化EnVision法檢測FOXQ1和CyclinD1在胃癌和胃癌旁組織中的表達情況，結合隨訪資料，分析其與臨床病理因素的關系及兩者表達的相關性，進一步探討它們在胃癌發生、發展過程中的可能作用機制。

1 對象和方法

1.1 對象 收集臺州市中心醫院2010年11月至2014年11月行根治手術的80例胃癌患者的切除標本。患者男43例，女37例，年齡35～85歲，中位年齡65歲；患者術前均未接受化療和放療，術后均經病理檢查確診。檢測所取腫瘤組織均為腫瘤中心非壞死部分，同時取25例距離腫瘤組織邊緣＞5cm癌旁組織作為對照。所有組織標本取出后均迅速用10%的中性甲醛溶液固定，常規脫水、二甲苯透明、浸蠟、石蠟包埋保存。參照2010年WHO組織學標準分級分為高分化（管狀腺癌Ⅰ級）11例，中分化（管狀腺癌Ⅱ級）40例，低分化(管狀腺癌Ⅲ級) 29例。參照2010年UICC修訂的TNM分期標準判定為Ⅰ期14例，Ⅱ期19例，Ⅲ期22例，Ⅳ期25例。

1.2 實驗試劑 鼠抗人單克隆FOXQ1抗體購自Abcan公司，兔抗人單克隆CyclinD1抗體購自上海基因科技有限公司，En VisionTM試劑盒和DAB顯色試劑盒購自福州邁新生物技術有限公司。

1.3 免疫組化檢測 采用En Vision二步法檢測FOXQ1和CyclinD1的表達。石蠟切片，常規脫蠟至水，切片浸于3%H2O2溶液中3min，檸檬酸高壓抗原修復10min，一抗4℃孵育過夜，通用型二抗-HRP聚合物，37℃孵育30min，滴加DAB顯示，顯微鏡下觀察顯色情況，蘇木素復染，0.1%鹽酸乙醇分化，PBS沖洗返藍，乙醇脫水、透明、中性樹膠封固。用已知陽性切片作為陽性對照，以PBS代替一抗作為陰性對照。

1.4 結果評定 免疫組化陽性信號為淺黃色至棕黃色顆粒。根據染色細胞百分率和染色程度對免疫組化檢測結果進行評定和分析：每例觀察5個以上高倍視野（× 400），計數不少于1 000個細胞中的陽性細胞數，計算陽性細胞率，FOXQ1和CyclinD1表達陽性標準參考Liang等[3]的判定標準：陽性細胞率≤10%為0分，11%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，＞75%為4分；染色強度淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。將陽性細胞率得分和染色強度得分相乘即為最后得分，0～3分定義為陰性，4～12分定義為陽性。

1.5 統計學處理 采用SPSS17.0統計軟件，計數資料比較采用χ2檢驗，FOXQ1和CyclinD1表達的相關性分析采用Spearman相關。

2 結果

2.1 FOXQ1與CyclinD1在胃癌和癌旁組織中的表達 FOXQ1的陽性表達主要在細胞質，部分細胞核亦有表達（圖1）；CyclinD1的陽性表達在細胞核（圖2）。兩者在胃癌組織中的陽性表達率均明顯高于癌旁組織（均P＜0.05），見表1。

圖1 胃癌組織中FOXQ1的陽性表達（En Vision二步法，× 400）

圖2 胃癌組織中CyclinD1的陽性表達（En Vision二步法，× 400）

表1 FOXQ1與CyclinD1在胃癌和癌旁組織中的表達

2.2 FOXQ1、CyclinD1表達與胃癌臨床病理特征的關系 胃癌組織中FOXQ1與CyclinD1陽性表達率在不同TNM分期、浸潤深度及是否有淋巴結轉移者之間，差異均有統計學意義（均P＜0.05），而在不同年齡、性別、腫瘤大小及分化程度者之間的差異均無統計學意義（均P＞0.05），詳見表2。

表2 FOXQ1﹑CyclinD1表達與胃癌臨床病理特征的關系[例（%）]

2.3 胃癌組織中 FOXQ1與 CyclinD1表達的相關性 80例胃癌組織中FOXQ1與CyclinD1表達均陽性者41例，均陰性者26例，胃癌組織中FOXQ1與CyclinD1表達呈正相關，詳見表3。

表3 FOXQ1與CyclinD1在胃癌組織中表達的相關性（例）

3 討論

Fox家族是一類龐大而功能廣泛的轉錄因子，參與胚胎發育、細胞周期調控、糖類和脂類代謝、生物衰老、免疫調節等多種生物學過程，其突變和表達異常與發育畸形、代謝性疾病有關。FOXQ1基因屬于FOX家族成員之一，在胃癌、乳腺癌、大腸癌、肺癌等腫瘤的發生、發展中的作用國內外均有研究。Lin等[5]報道，在胃黏膜相關淋巴組織（MALT）淋巴瘤中高表達Shigekawa等[6]研究發現，FOXQ1與乳腺癌的進展密切相關。國內學者研究顯示FOXQ1在大腸癌組織中表達水平較高，尤其是高惡性程度的和晚期大腸癌，而在伴有淋巴結轉移的或遠處轉移的晚期大腸癌組織中表達水平也明顯增高[7]。本研究結果顯示，FOXQ1在胃癌組織中的陽性表達率明顯高于癌旁組織，差異有統計學意義（P＜0.05），提示FOXQ1高表達在胃癌的發生過程中起了作用。在不同TNM分期、浸潤深度及是否有淋巴結轉移者之間，胃癌組織中FOXQ1陽性表達率的差異均有統計學意義（均P＜0.05）。表明FOXQ1表達與胃癌的浸潤深度、是否有淋巴結轉移和TNM分期密切相關。這一結果與Liang等[3]對胃癌的研究結果一致。

CyclinD1作為細胞周期調控中一種較為重要的因子在細胞增殖調節中起了重要作用。它定位于染色體11q13上，含295個氨基酸，在細胞周期關鍵限速點轉換期中，通過對相應轉換分子進行激活轉換，促使細胞DNA合成，從而發揮出加速細胞增殖的正性調節作用，是細胞增殖G1/S期的重要控件。Lan等[8]研究表明CyclinD1在胃癌組織中的陽性表達率遠遠高于癌旁組織，與胃癌的發生、發展有關。林孟波等[9]也報道CyclinD1在胃癌組織的陽性表達率明顯高于癌旁正常組織，在TNM分期為晚期和淋巴結轉移的胃癌中的表達率明顯高于TNM分期為中早期和淋巴結未轉移者。本研究結果顯示，CyclinD1在胃癌組織中的陽性表達率明顯高于胃癌旁組織，差異有統計學意義；在不同TNM分期、浸潤深度及是否有淋巴結轉移者之間CyclinD1陽性表達率的差異均有統計學意義（均P＜0.05）。提示CyclinD1高表達與胃癌的發生、發展和預后密切相關，與上述研究結果相一致。

本研究進一步發現，胃癌組織中FOXQ1表達與CyclinD1表達呈正相關，其表達水平與胃癌的浸潤、轉移及臨床分期密切相關。表明FOXQ1可能通過調控CyclinD1，參與細胞周期調節，促進腫瘤細胞增殖，在胃癌的發生、發展中起作用。FOXQ1與CyclinD1表達的聯合檢測可以應用于臨床判斷胃癌的轉移潛能及患者的預后。

[1]Zhang H,Meng F,Liu G,et al.Forkhead transcription factor foxq1 promotes epithelial-mesenshymal transition and breast cancer metastais[J].Cancer Res,2011,71(4):1292-1301.

[2]Musgrove E A,Caldon C E,Barraclough J,et al.CyclinD as a therapeutic target in cancer[J].Nat Rev Cancer,2011,11(8):558-572.

[3]Liang S,Yan X,Wang B,et al.Increased expression of FOXQ 1 is aprognostic marker for patients with gastric cancer[J].Tumor Biol, 2013,34(5):2605-2609.

[4]徐園,姚海波,金益,等.JMJD2C和HIF-1α在胃癌組織中的表達及其臨床意義[J].中華醫學雜志,2013,93(42):3375-3378.

[5]Lin L,Min M,Bi C F,et al.Primary gastrointestinal diffuse large Bcell lymphoma:an immunohistochemical and prognostic study of 90 cases[J].Chin J Pathol,2011,40(4):220-226.

[6]Shigekawa T,Ijichi N,Ikeda K,et al.FOXP1,an estrogen-inducible transcription factor,modulates cell proliferation in breast cancer cells and 5-year recurrence-free survival of patients with tamoxifen-treated breastcancer[J].Horm Cancer,2011,2(5):286-297.

[7]駱贊,魏正強,向相,等.Foxq1與E-cadheri蛋白在大腸癌中的表達及其臨床意義[J].中國老年學雜志,2014,4(34):2076-2078.

[8]Lan B,Xu D P,Lin YK.Expression of cyclinD1 and P53 in gastric earcinoma[J].pract J Cancer,2002,17(1):26-28.

[9]林孟波,王金泗,薛芳沁,等.Analectic-3和CyclinD1在胃癌中表達與預后分析[J].現代診斷與治療,2013,24(16):3602-3603.

Expression of FOXQ1 and CyclinD1 in gastric carcinoma and its clinical significance

CHEN Lili,CAO Xuequan,LU Hongsheng,etal.Department of Pathology,Taizhou Central Hospital,Taizhou 318000, China

【 Abstract】 Objective To investigate the expression and clinical significance of FOXQ1 and CyclinD1 in gastric carcinoma. Methods The expression of FOXQ1 and CyclinD1 in 80 samples of gastric carcinoma and 25 samples of pericancerous tissue was detected by immunohitochemical EnVision method，and its relationship with clinical pathological features was analyzed. Results The positive expression rates of FOXQ1 and CyclinD1 in gastric carcinoma tissues were significantly higher than those in corresponding percicancerous gastric mucosa(both P＜0.05).The positive expression rates of FOXQ1 and CyclinD1 were correlated with the depth of tumor invasion,lymph node metastasis and clinical stage(both P＜0.05), but not correlated with age,sex,tumor size or degree of differentiation(P＞0.05).The expression of FOXQ1 in gastric carcinoma was positively correlated with the expression of CyclinD1(P＜0.05). Conclusion The high expression of FOXQ1 and CyclinD1 may be involved in the occurrence and development of gastric cancer,the combined detection of FOXQ1 and CyclinD1 can be used to determine the invasive and metastatic potential of gastric carcinoma and the prognosis of the patients.

Gastric carcinoma FOXQ1 CyclinD1 Immunohistochemistry

2016-01-19）

（本文編輯：沈叔洪）

318000 臺州市中心醫院病理科