Axl及其配體Gas6在宮頸鱗癌中的表達與意義

程甜甜，楊賢子，駱志國

(湖北省十堰市太和醫院·湖北醫藥學院附屬醫院腫瘤科,湖北 十堰 442000)

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Axl及其配體Gas6在宮頸鱗癌中的表達與意義

程甜甜，楊賢子，駱志國

(湖北省十堰市太和醫院·湖北醫藥學院附屬醫院腫瘤科,湖北 十堰 442000)

目的：探討Axl及其配體Gas6 蛋白在宮頸鱗癌組織中的表達情況及其與臨床特征的關系。方法：收集87 例經手術切除的宮頸鱗癌組織、42例宮頸上皮內瘤變(cervical intraepithelial neoplasia，CIN)組織和28例正常宮頸組織。采用免疫組化SP法分別檢測Axl及其配體Gas6 蛋白的表達情況，并分析其表達在良惡性組織之間和不同臨床病理狀態下的差異。結果：Axl及Gas6 蛋白在宮頸鱗癌組織中的陽性表達率較高，而在CIN組及正常宮頸組織中較低，差異有統計學意義(P<0.05) 。Axl及Gas6 蛋白的表達在不同宮頸鱗癌組織分化程度和盆腔淋巴結轉移之間差異有統計學意義(P<0.05) 。而在年齡、臨床分期和腫瘤大小之間無統計學意義，P值均>0.05。經Spearman等級相關分析發現宮頸鱗癌組織中Axl和Gas6蛋白表達存在正相關(rs=0.74，P=0.03) 。結論：Axl及其配體Gas6蛋白的表達水平與宮頸鱗癌發生、增殖、侵襲及盆腔淋巴結轉移關系密切。深入機制的研究可能使Axl蛋白成為宮頸鱗癌靶向治療一個新的潛在的分子靶點。

子宮頸癌；Axl；Gas6；免疫組織化學

Axl 是構成TAM受體酪氨酸激酶的蛋白分子之一，該酶還包括Tyro 3、Mer兩個蛋白分子。Axl蛋白擁有兩個配體：生長停滯特異性蛋白6(growth arrest-specific protein 6, Gas6)和人血漿抗凝蛋白 S(Protein S)[1]。研究證明Axl/Gas6信號通路異常活化可導致下游信號傳導失控而引起多種腫瘤(如乳腺癌、肺腺癌、前列腺癌等)的發生、發展，與腫瘤的增殖、侵襲、轉移、腫瘤休眠、腫瘤細胞耐藥等密切相關[2-3]。但國內有關Axl及其體Gas6蛋白在宮頸鱗癌組織中的表達情況研究鮮有報道，本文對此進行了初步的探討和研究。

1 材料與方法

1.1 一般資料

收集2009年3月1日至2011年4月1日湖北省十堰市太和醫院婦科經手術切除的 210 例宮頸組織標本，去除臨床資料不齊全的，共選取病理科存檔的石蠟標本 157 例。年齡24 ～ 65 歲，平均年齡(38.73±6.53)歲，中位年齡39歲。全組病例均經病理確診，其中宮頸鱗癌87 例，宮頸上皮內瘤變(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)組織 42 例(本研究中列為CIN組)，因子宮肌瘤行子宮全切術的正常宮頸組織28 例(本研究中列為對照組)。根據國際婦產科聯盟(FIGO)2009年修訂的分期標準，宮頸癌患者中I期60例，IIA期27例；其中24例有盆腔淋巴結轉移；高分化37例，中低分化50例。CIN Ⅰ 17例，CIN Ⅱ～Ⅲ 25例。所有患者術前均未接受過放療、化療、激素和中草藥物等治療。

1.2 主要的試劑和抗體

本研究中兔抗人Axl 及 Gas6多克隆抗體均購自 Santa Cruz公司，DAB 顯色試劑和二步法(SP法)抗兔/鼠通用型免疫組化檢測試劑盒購自北京中杉生物技術公司。

1.3 免疫組織化學染色法

所有的手術標本送至本院病理科進行石蠟包埋，進行厚度為4 μm連續切片。按免疫組化SP法的實驗步驟嚴格操作。免疫組化陽性結果的判斷標準：Axl 和Gas6蛋白陽性表達均為細胞漿內出現黃色或棕黃色顆粒，而胞核和間質不著色。染色強度評分標準：0分為無染色；1分為淡黃色染色；3分為深黃色或棕黃色染色；2分為介于1分和3分之間的染色強度。在×400倍的正置顯微鏡視野下隨機選擇5個陽性染色區域(含至少100個細胞)，計算出陽性細胞百分比的平均值，并規定：≤10%為0分，11%～ 25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分。將上述兩項評分結果相乘，并規定：0分為陰性(-)；1～3分為弱陽性(+) ；4～8分為陽性(++)；9～12分為強陽性(+++)。將強陽性(+++)和陽性(++)的定義為陽性表達，并計算出相應的陽性表達率。具體見文獻[2]。

1.4 統計學分析

采用SPSS 17.0軟件進行數據處理，數據以表示；兩組定性資料組間和四格表資料比較均用χ2檢驗；相關性分析采用Spearman相關分析。以P<0.05判定差異有統計學意義。

2 結果

2.1 Axl和Gas6蛋白在宮頸鱗癌、宮頸上皮內瘤變及正常宮頸組織中的表達

Axl及Gas6蛋白在宮頸鱗癌組織中的陽性表達率均明顯高于宮頸上皮內瘤變及正常宮頸組織，差異有統計學意義(P<0.05)。然而，宮頸上皮內瘤變與正常宮頸組織之間表達的差異無統計學意義(P>0.05)，見表1和圖1。

表1 Axl 和Gas6 在不同宮頸組織中的表達情況(%)

*P<0.05，與癌組織比較。

2.2 Axl和Gas6蛋白在不同臨床病理參數的宮頸鱗癌組織中的表達情況

Axl 及Gas6 蛋白的表達在不同年齡、臨床分期和腫瘤大小之間無統計學意義，P值均>0.05；而在不同組織分化程度和盆腔淋巴結轉移中差異有統計學意義(P<0.05)。隨分化程度的降低和盆腔淋巴結轉移的增多呈逐漸增加趨勢(P<0.05)。見表2。

2.3 在宮頸鱗癌組織中Axl 和Gas6 蛋白之間的相關性分析

經Spearman等級相關分析，Axl 與Gas6 的rs值為0.74，Axl 和Gas6在宮頸鱗癌中的表達呈正相關(P=0.03)。

表2 Axl和Gas6蛋白在不同臨床病理參數的宮頸鱗癌組織中的表達情況(%)

臨床病理參數nAxl的陽性表達率Gas6的陽性表達率P值年齡 ≤50歲2948．3(14/29)34．5(10/29)0．176 >50歲5851．7(30/58)37．9(22/58)TNM分期 I期6041．7(25/60)35．0(21/60)0．084 IIA期2748．1(13/27)44．4(12/27)腫瘤大小 <4cm6646．9(31/66)39．4(26/66)0．069 ≥4cm2157．1(12/21)47．6(10/21)組織分化程度 高分化3732．4(12/37)29．3(11/37)0．021 中低分化5054．0(27/50)48．0(24/50)盆腔淋巴結轉移 有2454．1(13/24)45．8(11/24)0．033 無6338．1(24/63)34．9(22/63)

3 討論

2012年中國腫瘤登記中心發布最新數據指出隨著我國經濟水平的提高和生活方式的開放，宮頸癌的發病率逐年增高，其發病率為12.96/10萬，已超過了2014年美國ACS cancer statistics的結果(宮頸癌發病率為12.36/10萬)，且我國的宮頸癌還存在著年輕化的趨勢[4-5]。雖然我國宮頸癌的治愈率和5年生存率隨著醫療技術的進步而有所提高，且依靠定期檢測高危型人乳頭瘤病毒感染或CIN的患者可以減少宮頸癌的發病率，但宮頸癌的早期診斷和臨床預后仍不理想，究其原因還是用于早期診斷和判斷臨床預后的腫瘤標志物或指標過少。

Axl基因最早是從人慢性髓細胞白血病中分離出來的原癌基因。該基因編碼的蛋白結構上與神經細胞黏附分子十分相似。胞質區為酪氨酸激酶樣區，具有激酶活性。大量的研究發現：Axl與其配體Gas6蛋白結合后會發生胞內區酪氨酸殘基的磷酸化，從而通過激活多個信號傳導通路來調節細胞的生物學活性變化，包括細胞的增殖、凋亡、黏附和轉移、炎癥反應等[6-9]。

近年來，關于Axl與腫瘤的相關性研究已成為了熱點。研究發現Axl在腫瘤細胞中的高表達與細胞的惡性表型、腫瘤分化差、預后不良等密切相關[10]。國內的黃鋼等[11]研究發現：在前列腺癌組織中Axl及其配體Gas6蛋白的陽性表達率高于良性前列腺增生組織，且兩者表達與腫瘤的性質關系密切。張明帥等[12]通過Western blotting技術和免疫組化技術發現在乳腺癌組織中Axl和Gas6蛋白的表達顯著高于良性對照組織及癌旁組織。這也證實了Axl和Gas6蛋白在有腋窩淋巴結轉移乳腺癌的陽性表達率高于無淋巴結轉移的患者(80% vs.48%)。Sun等[13]發現與正常的子宮內膜組織相比，Axl及Gas6蛋白在人類子宮內膜癌組織中表達顯著升高，而癌組織中凋亡細胞的百分比下降。因此，我們猜測Axl及其配體Gas6蛋白的異常表達可能與癌細胞增殖、凋亡、細胞粘附與轉移等生物功能的變化密切相關。

本研究通過免疫組化技術分別檢測Axl及Gas6蛋白在不同宮頸組織中的表達水平。在宮頸鱗癌組織中Axl及Gas6蛋白的陽性表達率顯著增高，與CIN及正常宮頸組織相比，差異均有統計學意義(P< 0.05)。隨后，進一步分析在不同臨床病理特征下的上述兩種蛋白表達情況，發現中低分化的宮頸鱗癌患者Axl及Gas6 蛋白的陽性表達率分別為54.0%和48.0%，顯著高于高分化組的32.4%和29.3%，差異有統計學意義(P<0.05)。同時也發現在盆腔淋巴結轉移組中Axl及Gas6蛋白的陽性表達率分別為54.1%和45.8%，高于無淋巴結轉移組的38.1%和34.9%，差異有統計學意義(P<0.05) 。但我們并沒有發現Axl及Gas6蛋白的表達與宮頸鱗癌的年齡、臨床分期和腫瘤大小存在相關性，P值均>0.05。經Spearman等級相關分析發現宮頸鱗癌組織中Axl和Gas6蛋白表達存在正相關(r=0.742，P=0.026) 。因此，本研究表明Axl、Gas6蛋白的表達水平與宮頸鱗癌發生、增殖、侵襲及盆腔淋巴結轉移關系密切。

綜上所述，Axl及其配體Gas6蛋白的異常表達在多種惡性腫瘤的發生、黏附和轉移、抑制凋亡等方面發揮重要的作用，可以將其作為診斷腫瘤的潛在標志物。進一步深入研究Axl及其配體Gas6蛋白在宮頸鱗癌發生、發展中的分子機制，并針對其激活的下游信號傳導通路設計出特異性抑制劑，很可能找到預防和治療宮頸鱗癌的方法和藥物。Axl可能成為宮頸癌靶向治療一個新的潛在分子靶點。

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(學術編輯：譚榜憲)

The expression and significance of Axl and its ligand Gas6 in tissue of cervical squamous cell carcinoma

CHENG Tian-tian,YANG Xian-zi,LUO Zhi-guo

(DepartmentofMedicalOncology,TaiheHospitalAffiliatedtoHubeiUniversityofMedicine,Shiyan442000,Hubei,China)

Objective：This study aimed to detect the expression of Axl and its ligand Gas6 in tissue of cervical squamous cell carcinoma (CSCC) and analyze the correlation between Axl and Gas6 expression and clinicopathological features.Methods：The expression of Axl and its ligand Gas6 proteins in 87 cases of CSCC and 42 cases of cervical intraepithelial neoplasia (CIN) and 28 cases of normal cervical epithelium were examined by the standard streptavidin-biotin-peroxidase (SP) complex method. Then the expressive levels of Axl and Gas6 proteins between the benign and malignant tissues, and different clinicopathological features were analyzed.Results：The expression of Axl and Gas6 proteins in CSCC were significantly higher than that in CIN and normal cervical epithelium groups (P< 0.05). Axl and Gas6 high expression was negatively correlated with the degree of CSCC histological differentiation, and positively correlated with pelvic lymph node metastasis (P<0.05), but no with age,clinical stage and tumor size (P>0.05).The expression of Axl was positively correlated to Gas6 using spearman rank correlation method (rs=0.74，P=0.03).Conclusion：Axl and Gas6 proteins play an important role in the occurrence and development of carcinoma of uterine cervix,and may be closely associated with the degree of CSCC histological differentiation and pelvic lymph node metastasis.Our study suggested that Axl and Gas6 proteins may serve as potential biomarkers in molecular-targeted therapy of cervical cancer.

Carcinoma of uterine cervix;Axl;Gas6;Immunohistochemistry

10.3969/j.issn.1005-3697.2016.02.23

2015-07-08

程甜甜(1981-)，女，碩士研究生。E-mail: 59929508@qq.com

時間：2016-4-25 11∶31

http://www.cnki.net/kcms/detail/51.1254.R.20160425.1131.046.html

1005-3697(2016)02-0228-04

R735.33

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