宮頸癌中EGFR蛋白表達及其臨床病理意義

黃必飛 王超群 趙永明 孫鑫鑫 王倩 陳艷 吳愛姣 曾悅 吳丹丹 王艷

宮頸癌中EGFR蛋白表達及其臨床病理意義

黃必飛 王超群 趙永明 孫鑫鑫 王倩 陳艷 吳愛姣 曾悅 吳丹丹 王艷

目的 探討表皮生長因子受體1（EGFR）蛋白表達在宮頸癌發生、發展中的臨床病理意義。方法 采用免疫組化En Vision法檢測120例宮頸癌組織、49例高級別上皮內瘤變（CIN2～3）、40例低級別上皮內瘤變（CIN1）、37例正常宮頸組織中EGFR蛋白的表達，并進行比較分析。結果 （1）正常宮頸、CIN1、CIN2～3、宮頸癌組織中EGFR蛋白表達陽性率分別為10.8%（4/37）、12.5%（5/40）、42.9%（21/49）、89.2%（107/120）。宮頸癌組織中EGFR蛋白表達陽性率顯著高于CIN2～3、CIN1及正常宮頸組織（均P＜0.01）；EGFR蛋白在CIN2～3中表達顯著高于CIN1和正常宮頸組織（均P＜0.01）；CIN1和正常宮頸組織之間EGFR蛋白表達陽性率無統計學差異（P＞0.05）。（2）腫瘤浸潤深度更深的宮頸癌患者宮頸癌組織中EGFR蛋白表達陽性率高于浸潤深度較淺的患者（P＜0.01）。結論 EGFR在宮頸癌進展過程中起了重要作用，有望成為抗宮頸癌治療的一個潛在生物學標志。

EGFR 宮頸癌 免疫組化

宮頸癌是我國乃至全球女性最常見的惡性腫瘤之一，其發病人數和死亡人數均位于女性惡性腫瘤前列[1]。近年來，雖然抗宮頸癌綜合治療有了新進展，但其仍然是導致中老年女性死亡的重要原因之一。表皮生長因子受體1（EGFR）是促進腫瘤發生、發展的重要因子，在多種腫瘤侵襲和轉移過程中發揮了重要作用[2-3]。至今已有較多關于宮頸癌中EGFR蛋白表達的報道，但因評分標準和研究人群的差異，不同研究間EGFR蛋白表達陽性率存在較大差異[4-5]。本研究采用免疫組化En Vision法檢測正常宮頸、宮頸低級別上皮內瘤變（CIN1）、宮頸高級別上皮內瘤變（CIN2～3）及宮頸癌組織中EGFR蛋白的表達，以進一步探討其在宮頸癌發生和發展中的作用。

1 資料和方法

1.1 一般資料 收集2007年1月至2012年12月東陽市人民醫院病理科宮頸鱗狀細胞癌石蠟標本120例。患者年齡34～77歲，中位年齡55歲；浸潤深度：＞宮頸壁厚度1/2者75例，≤1/2者45例；淋巴結轉移陽性26例，淋巴結轉移陰性94例；組織學分化：高分化21例，中分化84例，低分化15例；臨床分期：Ⅰ期81例，Ⅱ～Ⅲ期39例。患者術前均未行任何抗腫瘤治療。同時收集2012年6至12月東陽市人民醫院病理科因子宮肌瘤切除的正常宮頸石蠟標本37例，患者年齡44～59歲，中位年齡50歲；宮頸上皮內瘤變（CIN）石蠟標本89例，患者年齡32～66歲，中位年齡52歲，其中CIN1標本40例、CIN2～3標本49例。所有患者分級和分期均按WHO（2003）標準進行。

1.2 免疫組化染色 所有組標本均以10%甲醛溶液固定，石蠟包埋，4μm連續切片。免疫組化染色采用En Vision二步法：檸檬酸鹽緩沖液高壓熱修復，0.3%H2O2室溫孵育10～15min，以1∶100稀釋比例滴加兔抗人EGFR多克隆抗體（美國Santa Cruz公司產品，克隆號：1005），室溫孵育1h，再使用En Vision二步法試劑盒（丹麥Dako公司產品）染色，室溫孵育40min，最后用DAB顯色劑（丹麥Dako公司產品）顯色5min，蘇木素復染、脫水、透明并封蠟。

1.3 免疫組化結果評價 EGFR蛋白陽性表達主要定位于細胞膜和（或）細胞質。本研究將≥10%宮頸正常上皮細胞或腫瘤細胞胞膜呈弱或強染色視為陽性。染色結果判讀由2位病理醫師獨立完成。

1.4 統計學處理 應用SPSS 19.0統計軟件。計數資料組間比較采用χ2檢驗。

2 結果

2.1 EGFR蛋白在宮頸組織中的表達及分布 EGFR蛋白主要定位于宮頸鱗狀上皮細胞或腫瘤細胞胞膜中（見圖1）。正常宮頸、CIN1、CIN2～3、宮頸癌組織中EGFR蛋白表達陽性率分別為10.8%（4/37）、12.5%（5/40）、42.9%（21/49）、89.2%（107/120）。EGFR蛋白表達陽性率從CIN1、CIN2～3到宮頸癌組織呈逐步增高趨勢（均P＜0.01）；而CIN1和正常宮頸組織之間EGFR蛋白表達陽性率無統計學差異（P＞0.05）。

圖1 EGFR蛋白在宮頸組織中的表達（A：正常宮頸組織中EGFR蛋白陰性表達，En Vi si on二步法染色，×200；B：CIN1組織中EGFR蛋白陰性表達，En Vi si on二步法染色，×400；C：CIN2~3組織中EGFR蛋白陽性表達，En Vi si on二步法染色，×400；D：宮頸癌組織中EGFR蛋白陽性表達，En Vi si on二步法染色，×200）

2.2 宮頸癌組織EGFR蛋白表達與患者臨床病理特征的關系 腫瘤浸潤深度＞宮頸壁厚度1/2的宮頸癌患者中EGFR蛋白表達陽性率較腫瘤浸潤深度≤1/2的患者高（P＜0.01）；淋巴結轉移陽性患者宮頸癌組織中EGFR蛋白表達均為陽性，表達陽性率高于淋巴結轉移陰性患者，提示EGFR蛋白表達可能與宮頸癌患者淋巴結轉移有關，但無統計學差異（P＞0.05）；在不同年齡、組織學分化、臨床分期的患者間比較，EGFR蛋白表達陽性率均無統計學差異（均P＞0.05），見表1。

表1 宮頸癌組織EGFR蛋白表達與患者臨床病理特征的關系[例（%）]

3 討論

EGFR是表皮生長因子受體家族（HER/erbB家族）的重要成員，是一種具有酪氨酸激酶活性的跨膜糖蛋白受體，它由胞外配基結合區、跨膜親脂片段和胞內酪氨酸激酶區3部分組成。當配體（如表皮生長因子）結合于胞外區后，EGFR形成二聚體，引起胞內區自身磷酸化并激活酪氨酸激酶，啟動一系列下游信號轉導通路，調節細胞各方面功能，包括細胞增殖、凋亡和分化[2]。研究表明，在多種腫瘤細胞中存在EGFR的高表達或異常活化，其通過激活下游磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶B（PI3K-AKT）和胞外信號調控激酶（MEK-ERK1/2）兩條主要的信號通路，在腫瘤細胞增殖、分化以及侵襲轉移過程中起了重要作用[2-3]。雖然目前有較多關于宮頸癌中EGFR蛋白表達的報道，但因評分標準和研究人群的差異，不同研究間EGFR蛋白表達陽性率存在較大差異[4-5]。因此，筆者選取宮頸上皮癌變過程中的一系列樣本，包括正常宮頸、CIN1、CIN2～3和宮頸癌組織，用免疫組化方法來進一步驗證EGFR的表達及其在宮頸癌發生、發展過程中所起的作用。

馮淑瑜等[6]研究顯示至正常宮頸上皮組、CIN組到宮頸癌組EGFR蛋白表達顯著增強，但該研究并沒有將CIN組細分為CIN1和CIN2～3來進一步觀察，而且各組別的例數偏少。本研究結果顯示從CIN1、CIN2～3到宮頸癌組織，EGFR蛋白表達陽性率呈逐步增強趨勢，而正常宮頸組織跟CIN1之間則無統計學差異，說明EGFR蛋白可能在病變進展為CIN2～3和宮頸癌的過程中發揮主要作用。結合EGFR蛋白表達陽性率在腫瘤浸潤深度較深的宮頸癌患者中較高，提示EGFR蛋白在宮頸癌進展過程中發揮了重要作用，特異性阻斷其表達或活化可能會成為抗宮頸病變進展的一個潛在手段，值得進一步研究。

目前研究發現，EGFR蛋白表達可能受到微小RNA的調控，其可能通過下游的絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號通路從而影響腫瘤發生和發展[7-8]。然而，關于EGFR影響宮頸癌進展的機制目前尚未見相關報道，筆者將進一步研究并試圖闡明其機制。

[1]JemalA,Bray F,Center M M,et al.Globalcancer statistics[J].CA Cancer J Clin,2011,61(2):69-90.

[2]Jorissen R N,Walker F,Pouliot N,et al.Epidermal growth factor receptor:mechanisms ofactivation and signalling[J].Exp CellRes, 2003,284(1):31-53.

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[5]李青,紀捷,吳王飛,等.宮頸鱗狀上皮病變中EGFR蛋白表達及基因擴增的臨床意義[J].診斷病理學雜志,2010,17(6):448-452.

[6]馮淑瑜,張彥娜,劉繼紅,等.宮頸癌和宮頸上皮內瘤變中表皮生長因子受體表達與人乳頭瘤病毒16和(或)18感染及其相互關系[J].中華腫瘤雜志,2007,29(10):759-763.

[7]Wang L,Yao J,ShiX,et al.MicroRNA-302b suppresses cellproliferation by targeting EGFR in human hepatocellular carcinoma SMMC-7721 cells[J].BMC Cancer,2013,13:448.

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Expression of EGFR in cervical cancer and its relation to clinicopathology

HUANG Bifei,WANG Chaoqun,ZHAO Yongming,et al. Department of Pathology,Dongyang People's Hospital,Dongyang 322100,China

Objective To investigate the expression ofepidermalgrowth factor receptor 1(EGFR)in cervical cancer and to evaluate its clinicopathological significance. Methods The immunohistochemical EnVision method was used to evaluate the expression of EGFR in 120 cases of cervical cancer,49 cases of high-grade intraepithelial neoplasia (CIN2～3),40 cases of low-grade intraepithelial neoplasia(CIN1)and 37 cases of normal cervical tissues. Results EGFR protein expression rates in normal cervical tissues,CIN1,CIN2～3and cervical cancer were 10.8%(4/37),12.5%(5/40),42.9%(21/49)and 89.2%(107/120), respectively.The EGFR positive rate in cervical cancer was significantly higher than those in CIN2～3,CIN1and normal cervical tissues(P＜0.01);and the positive rate in CIN2～3was significantly higher than those in CIN1and normalcervicaltissues(P＜0.01);but there was no significant difference between normal cervical tissue and CIN1(P＞0.05).EGFR protein positive rate was higher in patients with deeper invasion ofcervical carcinoma(P＜0.01). Conclusion Results indicates that EGFR may play an important role in the development ofcervicalcancer and it may become a potentialtarget for anti-cancer therapy.

EGFR CervicalcancerImmunohistochemistry

2015-04-17）

（本文編輯：胥昀）

浙江省金華市科技計劃重點項目（2012-3-021）；浙江省醫藥衛生科技計劃項目（2012KY B230）；浙江省金華市科技計劃項目（2013-3-097）

322100 東陽市人民醫院病理科（黃必飛、王超群、孫鑫鑫、王倩、陳艷、吳愛姣、曾悅、吳丹丹），腫瘤外科（趙永明），腫瘤內科（王艷）

黃必飛，E-m ai l：hbf x711023@163.com