胃癌根治術后患者血循環腫瘤細胞的檢測及其意義

狄劍士，鄭桂麗，李夢巖，李鍇男，王寶成

胃癌根治術后患者血循環腫瘤細胞的檢測及其意義

狄劍士，鄭桂麗，李夢巖，李鍇男，王寶成

胃癌；循環腫瘤細胞；根治術后

胃癌目前仍是我國發病率和死亡率較高的惡性腫瘤之一，5年生存率僅為10%左右，其術后復發和轉移是死亡的主要原因［1］。 循環腫瘤細胞（circulating tumor cells，CTCs）是發生微轉移的必要步驟［2］，與腫瘤血液轉移有密切相關性，提示在常規的影像學診斷之前可能已有腫瘤微轉移灶的發生。2013年10月—2014年4月筆者利用免疫磁珠陰性富集法對60例胃癌患者術后外周血中的CTCs進行檢測，并討論CTCs與臨床分期的相關性。

1 資料與方法

1．1 一般資料60例胃癌首次根治術后未行化療患者。男37例，女23例；年齡36～83歲，中位年齡58歲。乳頭狀腺癌 14例，管狀腺癌 7例 ，黏液腺癌 4例，印戒細胞癌 6例 ，低分化腺癌17例，未分化癌12例。根據TNM分期分為Ⅰ期11例，Ⅱ期21例，Ⅲ期28例。

1．2 方法所有研究對象均采用真空采血管采集肘正中靜脈血3．2 ml（不含抗凝藥）于ACD抗凝管中。采用免疫磁珠富集技術分離CTCs，用熒光原位雜交和免疫熒光染色鑒別CTCs，在熒光顯微鏡下觀察并統計CTCs。判讀標準為DAPI+（單核），細胞核內FISH信號點＞2個，且無血源性白細胞表面抗原著色，即CD45-。外周血中CTCs計數＞2個／3．2ml定義為CTCs陽性。同時隨訪患者術后2年的病情變化。

1．3 統計學方法采用SPSS 17．0統計學軟件分析，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期各組間的CTCs陽性率、血液轉移比較，采用χ2分析，以P＜0．01為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 不同臨床分期胃癌患者術后CTCs檢測結果比較60例胃癌根治術患者外周血中CTCs陽性率為43．3%（26／60），分別為Ⅰ期9．1%（1／11），Ⅱ期為33．3．%（7／21），Ⅲ期為64．3．%（18／28），Ⅲ期陽性率與Ⅰ期、Ⅱ期相比較，差異具有統計學意義（P＜0．01）。見表1。

2.2 不同臨床分期胃癌患者術后2年復發轉移結果比較60例胃癌根治術外周血中CTCs陽性患者，Ⅰ期CTCs陽性患者2年內未轉移；Ⅱ期CTCs陽性患者6～12個月無轉移，12～24個月出現轉移4例，其中肝轉移2例，肝肺同時轉移1例，骨轉移1例；Ⅲ期CTCs陽性患者6～12個月內肝轉移1例，12～24個月出現轉移8例，其中肝臟轉移2例，肝、肺和骨同時轉移3例，骨轉移1例，肺和顱內轉移分別1例。轉移率Ⅲ期高于Ⅱ期和Ⅰ期，差異有統計學意義（P＜0．01）（表2）。

表 1 不同臨床分期胃癌患者術后CTCs檢測結果的比較

表 2 不同臨床分期胃癌患者術后2年復發轉移結果的比較

3 討論

澳大利亞的Ashworth于1869年首次提出循環腫瘤細胞的概念，循環腫瘤細胞（CTCs）是指惡性腫瘤從原發灶和或轉移灶脫落進入血液循環的腫瘤細胞。CTCs來源于實體瘤，通過基因轉錄、蛋白修飾和細胞表型的改變增強其侵襲力，再經過誘發新生血管生成或經周圍血管系統進入循環系統，上皮間質轉化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）在此環節中發揮重要的作用［3］。進入血液循環的腫瘤細胞大部分發生凋亡或被機體自身免疫系統吞噬及血液的剪切作用而死亡，也可被抗腫瘤治療清除，僅有少數的CTCs能成活下來，形成新的轉移灶。所以發現CTCs并不能證明一定有轉移灶形成，根據估計，僅有0．1%的CTCs會形成轉移灶［4］。由于CTCs的檢測技術沒有取得突破性進展，所以其檢測并未在腫瘤的防治中發揮應有的作用。隨著CTCs檢測技術的不斷成熟，美國FDA于2014年批準了 BioTNT公司的Cellsearch系統在轉移性結直腸癌、乳腺癌和前列腺癌中的應用。由于相當一部分腫瘤患者術前已經出現腫瘤微轉移灶，但常規傳統的影像學檢查無法發現，CTCs檢測有助于發現早期患者的微轉移灶，Sastre等［5］發現CTCs與直結腸癌的臨床分期相關，且能在早期的直結腸癌患者體內檢測到，提示檢測CTCs有助于早期發現腫瘤。由于CTCs在外周血中數量較少，所以從血液中分離富集CTCs是進行檢測的關鍵。目前用于CTCs的富集的方法主要有：梯度離心法、過濾法、免疫磁珠分選法。檢測方法主要有免疫細胞化學法、流式細胞檢測法、聚合酶鏈式反應核酸擴增法、光纖陣列掃描術、酶聯免疫斑點術、CTC芯片技術等。

該研究采用免疫磁珠陰性富集法進行富集，通過去除血漿，裂解紅細胞，利用表面包被磁珠的抗白細胞共同抗原的抗體去除白細胞，從而富集得到稀有細胞，最后進行免疫熒光染色在熒光顯微鏡下進行鑒定判讀。CTCs檢測有助于TNM分期［6］，但也有學者認為與TNM分期無關，而與胃癌淋巴結轉移、遠處轉移和復發密切相關［7］。本組60例應用上述方法檢測胃癌根治術患者外周血中CTCs陽性率為43．3%，Ⅲ期患者陽性率高于Ⅰ期、Ⅱ期 （P＜0．01），提示與腫瘤TNM分期密切相關。CTCs陽性患者出現遠處轉移機率明顯增加，CTCs陽性患者轉移率Ⅲ期高于Ⅱ期和Ⅰ期，差異有統計學意義（P＜0．01），分期越晚，CTCs陽性患者遠處轉移的風險更高，說明CTCs檢出與胃癌的預后密切相關。因此對于原發性胃癌CTCs檢測對于早期預測轉移，TNM分期及預后評價具有重要意義。檢測CTCs可早于常規影像學檢查評估腫瘤復發風險，判斷患者預后，指導術后輔助化療和腫瘤的個體化治療。這對于降低術后腫瘤復發及轉移率，提高生存率具有重要的意義。

［1］Zhang ZY，Ge HY．Micrometastasis in gastic cancer［J］．Cancer Lett，2013，336（1）：34-45．

［2］Maestro LM，Sastre J，Rafael SB，et al．Circulating tumor cells insolid tumor in metastatic and localized stages［J］．Anticancer Res，2009，29（11）：4839-4843．

［3］Kalluri R，Weinberg RA．The basics of epithelial-mesenchymal transition［J］．J Clin Invest，2009，119（6）：1420-1428．

［4］Liotta LA，Stetler-Stevenson WG．Tumor invasion and metastasis：an imbalance of positive and negative regulation［J］．Cancer Res，1991，51（18S）：5054-5059．

［5］Sastre J，Maestro ML，Puente J，et al．Circulating tumor cells in colorectal cancer：correlation with clinical and pathological variables［J］．Ann Oncol，2008，19（5）：935-938．

［6］黃選章，王振寧．循環腫瘤細胞對胃癌臨床病理特點和預后意義的Meta分析［C］．第9屆全國胃癌學術會議暨第二屆陽光長城腫瘤學術會議論文集，2014：6．

［7］李 熳，張志廣，劉 霞，等．胃癌患者循環腫瘤細胞的檢測及臨床意義［J］．中國腫瘤臨床，2014，41（22）：1142-1145．

［2015-09-14收稿，2015-10-12修回］ ［本文編輯：吳 蓉］

R735．2

B

10．14172/j．issn1671-4008．2016．03．022

250031山東濟南，濟南軍區總醫院腫瘤科（狄劍士，鄭桂麗，李鍇男，王寶成）；264000山東煙臺，解放軍71146部隊煙臺第一干休所衛生所（李夢巖）