流式細胞術篩查血小板抗體方法的建立及應用

韓博文

（天津曠博協和生物技術有限公司，天津 300384）

流式細胞術篩查血小板抗體方法的建立及應用

韓博文

（天津曠博協和生物技術有限公司，天津 300384）

目的 建立一種用流式細胞術篩查血小板抗體的方法，并將其應用于臨床治療中。方法 將78例需進行血小板抗體檢測的患者進行AB兩組試驗，分別用常規處理法和流式細胞術來進行檢測，觀察兩組的檢測結果。結果 A組的檢出率為25.65%，而B組的檢出率為35.90%，相比而言，B組的檢出率明顯高于A組，而且檢測的時間也要短于A組，但是兩者的陽性率無明顯差異。經檢測，B組中還發現有10例含抗HLA抗體，有1例含抗HPA-5b抗體，有9例為自身抗體。結論 對于篩查血小板的抗體，流式細胞術的建立以及應用為臨床治療提供了很大的便利，該方法不僅檢測速度快，操作簡單，還實現了標準化，非常適用于臨床檢測。

流式細胞術；血小板抗體；方法建立；臨床應用

通過對常規處理法和流式細胞術的比較來具體探討流式細胞術在臨床檢測中的應用與效果，并作如下分析。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2016年本市醫院的共100例血小板患者的資料，對不同年齡，不同癥狀的患者進行檢查，針對血小板來進行針對性檢查?；颊呔鶡o其他相關疾病，并且滿足了患者檢測的相關標準，保證了醫院數據處理中的準確性。且并未注射激素或進行免疫性抑制等治療。將患者進行AB兩組不同的檢測試驗。

1.2 方法

所有患者均在本省同一家醫院內進行治療，A組采用常規處理法，即經典酶聯免疫吸附試驗（ELISA），B組采用流式細胞術（FCM）。

（1）制備樣本：采取的靜脈血應該在15毫升以上，然后放入抗凝試管中，防止血液凝固。15 ml血液中13 ml用于血小板自身抗體檢測試驗盒檢測，即ELISA，用離心法分離血小板，之后進行冷卻。剩余的2 ml用于流式細胞術（FCM）檢測。

（2）經典酶聯免疫吸附試驗（ELISA）技術檢測：按照使用說明書來進行檢測。

（3）流式細胞術（FCM）技術檢測：將2 ml周血600轉離心，得1 ml上清，加入1 ml多聚甲醛（2%）混勻，2000轉離心，棄上清，加入2 mlPBS洗滌，2000轉離心，棄上清，加入2 mlPBS重懸備用，取100 ul重懸液與20 ulCD41-PE（北京曠博生物技術股份有限公司）混勻，孵育20分鐘后上機檢測。

1.3 統計學方法

采用SPSS 20.0統計學軟件對數據進行分析，計數資料以百分數（%），例（n）表示，采用x2檢驗；計量資料以“±s”表示，采用t檢驗；以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

經統計，經典酶聯免疫吸附試驗（ELISA）檢測中，血小板抗體的檢出患者有20例，血小板自身抗體陽性為14例，陽性率為70%。其中，血小板表面自身抗體13例（66.70%），游離在血漿中的血小板自身抗體9例（47.60%）。在流式細胞術（FCM）法檢測中，血小板抗體的檢出患者有28例，檢出率為35.90%；血小板自身抗體陽性為24例，陽性率為85.70%。其中，血小板表面自身抗體22例（78.60%），游離在血漿中的血小板自身抗體16例（57.10%）。此外，流式細胞術（FCM）法檢測出有10例含抗HLA抗體，有1例含抗HPA-5b抗體，有9例為自身抗體。經分析，常規處理法，即經典酶聯免疫吸附試驗（ELISA）與流式細胞術（FCM）檢測血小板自身抗體陽性率差異并無統計意義（P=0.227＞0.05），流式細胞術（FCM）血小板表面自身抗體檢出率高于游離在血漿中的血小板自身抗體檢出率（P=0.039＜0.05）， 經典酶聯免疫吸附試驗（ELISA）血小板表面自身抗體檢出率高于游離在血漿中的血小板自身抗體檢出率（P=0.043＜0.05）。

3 討 論

血小板作為一種血液中常存在的一種物質，一旦數量發生了異常，就很容易引起其他種類疾病。例如，血小板自身抗體（PAIgG）在血小板膜上與其相應抗原結合后，會使血小板很容易就被單核吞噬細胞系統大量破壞，從而會減少血小板的壽命，使血小板的數量銳減，這樣會影響人類自身的免疫系統，使得自身免疫系統的免疫能力下降，體液免疫和細胞免疫功能下降，因此，對于常規檢測方式來說，耗血量比較大，增加患者負擔。相反，流式細胞術（FCM）作為一種克服了原本障礙的新型抗體檢測技術，在臨床上的使用逐漸增多。耗血量大大減少，對單個細胞也可以進行檢測，除此之外，檢測速度快，操作簡便，而且流式細胞術還可以將檢測方法標準化。

本文采用78例患者進行研究分析，將這78為患者分別進行免疫吸附試驗（ELISA）和流式細胞術（FCM）進行檢測，流式細胞術（FCM）的檢出率為35.90%，陽性率為85.70%。經典酶聯免疫吸附試驗（ELISA）的檢出率為25.65%，陽性率為71.40%。上述兩種方法的陽性率的差異沒有統計意義（P＞0.05）。但是兩者的耗時相差較大，流式細胞術（FCM）僅用一個多小時，而酶聯免疫吸附試驗（ELISA）卻耗時五小時。由此可見，流式細胞術檢測的速度非常快，而且結果也具有可靠性。

綜上，相較于經典酶聯免疫吸附試驗（ELISA）來說，流式細胞術（FCM）會更加便捷，同時在速度上可以有更大的進步，在樣本采取中，需要的血量很少。非常適用于臨床醫學中對于血小板抗體的檢測。

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ISSN.2095-6681.2017.29.106.01

李 豆