動物實驗了解梗阻性黃疸不同時期肝臟氧化應激指標并抗氧化免疫營養治療梗阻性黃疸患者療效觀察

劉飛 楊大剛△ 孫誠誼 王惠群 劉影 李福堂 梁一

(1.貴陽醫學院附屬醫院肝膽外科；2.貴陽醫學院營養與食品衛生教研室；3.貴陽醫學院附屬醫院臨床營養科，貴州 貴陽 550004)

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·實驗研究·

動物實驗了解梗阻性黃疸不同時期肝臟氧化應激指標并抗氧化免疫營養治療梗阻性黃疸患者療效觀察

劉飛1楊大剛1△孫誠誼1王惠群2劉影3李福堂1梁一3

(1.貴陽醫學院附屬醫院肝膽外科；2.貴陽醫學院營養與食品衛生教研室；
3.貴陽醫學院附屬醫院臨床營養科，貴州 貴陽 550004)

目的 建立梗阻性大鼠模型，了解梗阻性黃疸不同時期肝臟氧化應激指標的變化。研究抗氧化免疫營養治療對有營養風險的梗阻性黃疸病人其肝功能及營養狀態的影響，為臨床抗氧化免疫營養治療提供理論依據。方法 (1)選取健康大鼠54只隨機分為正常組、假手術組與膽總管結扎組，建立梗阻性黃疸大鼠模型。于術后5、12、19 d 三個時相點檢測SOD、MDA在大鼠肝臟組織中的含量。(2)選取30例有營養風險(NRS2002評分>3分)的中重度梗阻性黃疸病人，隨機分對照組和干預組。對照組給予規范的腸外與腸內營養支持，干預組在規范營養支持的基礎上添加抗氧化劑(維生素C)及免疫營養素(谷氨酰胺)，于入院第7天檢測生化指標，比較兩組各指標的差異。結果 膽總管結扎組術后各時相點的SOD含量均低于正常組及假手術組，差異有統計學意義(P<0.05)，MDA含量均高于正常組及假手木組，差異有統計學意義(P<0.05)。治療7 d后，干預組病人的ALT、AST與JBIL，恢復優于對照組，差異有統計學意義(P<0.05); PA水平高于對照組差異有統計學意義(P<0.05)，ALB水平高于對照組，但差異無統計學意義(P>0.05)。結論 梗阻性黃疸病人處于氧化應激狀態，抗氧化免疫營養治療有利于肝功能和營養狀態的恢復。

梗阻性黃疸； 抗氧化； 免疫營養； 氧化應激

梗阻性黃疸病人多數都伴有明顯的肝臟功能及結構的損傷。有學者[1]認為自由基及其引起的氧化應激貫穿各種肝臟病變的始終，是引起肝臟病變的主要機制之一。VC、VE和谷胱甘肽等是研究較多的抗氧化劑，而在傳統營養基礎上添加免疫營養素谷氨酰胺可促進病人肝功能的恢復，改善其營養狀態[2]。因此，我們對大鼠進行梗阻性黃疸造模,研究其是否存在氧化應激，同時研究抗氧化劑和免疫營養素對有營養風險的梗阻性黃疸病人的肝功能及營養狀態的影響，為這部分病人使用抗氧化劑提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 基礎研究部分 (1)實驗動物分組：實驗動物采用SD大鼠(由貴陽醫學院動物中心提供)。適應性喂養1周后，選擇體質量為250～300 g的大鼠54只。隨機分為正常組、假手術組和膽總管結扎組，建立梗阻性黃疸大鼠模型，其中每組各分為結扎術后5、12、19 d三個時相點，每個時相點6只動物。(2)實驗方法：正常組不作任何操作。假手術組分離膽總管但不結扎。膽總管結扎組膽總管雙重結扎，完成梗阻性黃疸造模。使用ELISA法檢測在不同時相點肝臟組織中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)和丙二醛(malndialdehyde，MDA)的含量。

1.2 臨床研究部分 (1)一般資料：選取2013年1月至2014年3月于貴陽醫學院附屬醫院就診的30例膽紅素> 17 lumol/L且NRS2002評分>3分的梗阻性黃疸病人，隨機分為對照組(18例)和干預組(12例)。每位病人均經臨床明確診斷，有明確的病因、病史、癥狀、體征及相關影像資料及實驗室指標。兩組病人年齡、性別、所患良惡性疾病、治療各生化指標均差異無統計學意義(P>0.05)。(2)治療措施：兩組病人均在入院后2～3 d解除膽道梗阻。對照組每日予以規范的腸外+腸內營養支持。干預組在規范營養支持的基礎上每日添加丙氨酰一谷氨酰胺1.5～2.0 mL/kg，維生素C 200 mg。兩組患者治療期間均予以常規護肝治療。

1.3 指標檢測 于入院第7天空腹抽取外周靜脈血，檢測谷丙轉氨酶( alanine aminotransferase ,ALT)、谷草轉氨酶(aspartate aminotransferase，AST)、總膽紅素(totai bilirubin，TBIL)、血清白蛋白(serum albumin，ALB)及前白蛋白(prealbumin，PA)的含量。

2 結 果

2.1 各組大鼠3個時相點氧化應激指標的變化 總膽管結扎組大鼠術后5、12、19 d肝臟組織中SOD的含量均低于正常組及假手術組差異有統計學意義(P<0.05)，MDA的含量均高于正常組及假手術組差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

組別時相點SOD/(IU/L)MDA/(nmol/L)5 12.95±1.01 3.37±0.23正常組12 13.37±1.18 3.29±1.0319 12.47±1.57 3.37±0.225 13.11±0.72 3.35±0.32假手術組12 13.00±0.45 3.48±0.1419 12.51±1.25 3.39±0.185 11.74±0.76*△ 3.72±0.25*△膽總管結扎組12 11.34±0.62*△ 4.02±0.19*△19 10.00±1.34*△ 3.73±0.19*△

注：與正常組比較，*P<0.05;與假手術組比較，△P<0.05。

2.2 兩組病人生化指標的比較 入選病人治療前各生化指標無差異，但在治療7 d后，干預組病人的ALT、AST與IBfL恢復優于對照組差異有統計學意義(P<0.05); PA水平高于對照組差異有統計學意義(P<0.05)，ALB水平高于對照組，但差異無統計學意義(P>0.05)。

組別ALT/(U/L)AST/(U/L)TBIL/(μmol/L)ALB/(g/L)PA/(mg/L) 對照組89.2±52.658.9±30.6287.5±88.6735.1±3.8101.5±43.2 干預組59.3±48.4*40.1±31.8*226.1±88.78*36.6±4.2144.9±47.6*

注：與對照組比較，*P<0.05。

3 討 論

肝細胞線粒體含量豐富，極易產生大量的氧自由基，而過量的氧自由基容易導致氧化應激。研究[l-3]表明氧自由基引起的氧化應激是肝臟病變的基礎并貫穿各種肝臟病變的始終，是引起肝臟病變的主要機制之一。本研究顯示：膽總管結扎組大鼠與正常組和假手術組相比，肝臟組織中MDA水平明顯升高但SOD水平明顯降低，表明此時梗阻性黃疸大鼠體內自由基生成與清除的動態平衡被打破，處于氧化應激狀態。而這種失衡狀態在體內持續越久組織細胞抗氧化防御保護功能越弱，肝損傷程度越重[4]。

谷氨酰胺在人體正常生理代謝與疾病的氧化應激中發揮的作用也越來越受到關注[5]。Abiles等[6]的研究證明了補充谷氨酰胺可以提高處于疾病氧化應激狀況下患者的抗氧化能力，減少多余自由基造成的氧化損傷。韓剛等[7]的研究證明了谷氨酰胺能夠改善梗阻性黃疸患者的免疫狀態。本研究結果顯示：給予梗阻性黃疸患者Vc和谷氨酰胺治療后，肝功能指標ALT、AST、IBIL較對照組恢復地更快，營養指標PA亦升高，說明抗氧化免疫營養治療對患者營養狀態和肝功能恢復有一定的作用。但營養指標ALB雖然升高，但和對照組相比差異無統計學意義，考慮為ALB半衰期較長，本研究觀測時間為7 d，導致未能準確觀察其變化，有待更深入的研究。

本研究證實了梗阻性黃疸患者明確存在著氧化應激，初步證明給予患者抗氧化免疫營養治療后，他們的營養狀態和肝功能有一定的恢復，但還需擴大樣本量進行更深入的研究。

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[3] Muriel P.Role of free radicals in Iiver diseases[J].Hepat010gy,2009,3(4):526-536.

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[5] 曹婧然，謝穎，李輝,等，谷氨酰胺在氧化應激疾病中的作用及其機制的研究[J]．臨床誤診誤治，2013，26(9):102-104.

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[7] 韓剛，宮路路，韓喜春.谷氨酰胺對老年惡性梗阻性黃疸患者可溶性白細胞介素D受體的影響[J]．中國老年學雜志，2015，25(11):349-1350．

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2016-09-23)

△通信作者，E-mail:ydg435888@126.com