復(fù)傷糖漿的薄層鑒別及烏頭堿限量的檢查方法研究

李 霞 鄧恢進 張先勝

（武漢市江夏區(qū)中醫(yī)醫(yī)院藥劑科，湖北 武漢 430200）

復(fù)傷糖漿的薄層鑒別及烏頭堿限量的檢查方法研究

李 霞 鄧恢進 張先勝

（武漢市江夏區(qū)中醫(yī)醫(yī)院藥劑科，湖北 武漢 430200）

目的 提高復(fù)傷糖漿質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，確保其安全、有效。方法 采用薄層色譜（TLC）法分別用不同提取溶劑制備供試液，并試驗幾種展開劑展開效果，對復(fù)傷糖漿中赤芍、延胡索、牡丹皮進行定性鑒別，對制川烏、制草烏的雙酯型生物堿（以烏頭堿計）進行限量檢查。結(jié)果 赤芍、延胡索、牡丹皮的供試品溶液色譜中，陰性對照品溶液都沒有被污染，對照溶液、各個樣品溶液在色譜相應(yīng)點上顯現(xiàn)出一樣的顏色斑點；制川烏、制草烏的樣品試驗的溶液色譜中，各對照樣品相比較，在相應(yīng)的溶液色譜中，無法顯示出斑點，或斑點非常小，明顯小于對照品的斑點。結(jié)論 該方法快速、簡便、針對性強、重復(fù)性好，可作為 控制復(fù)傷糖漿的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

復(fù)傷糖漿；薄層鑒別；烏頭堿限量

1 材 料

1.1 試驗材料：復(fù)傷糖漿（批號：141031、141211、141216，武漢市江夏區(qū)中醫(yī)醫(yī)院制劑室生產(chǎn)）；對照品（丹皮酚，批號：110708-200506；芍藥苷，批號：110736-200526；延胡索乙素，批號：110726-200409；烏頭堿，批號：110720-200410，本實驗所有對照品均購自中國藥品生物制品檢定所），赤芍藥材（購自安徽），處方所用藥材均符合2010年版《中國藥典（一部）》標(biāo)準(zhǔn)，所用試劑均為分析純[1-2]。

1.2 試驗儀器與試劑：光學(xué)電子分析天平（TG328B，湘儀天平儀器廠）；pHs-25型數(shù)顯酸度計（杭州奧立龍儀器有限公司）；恒溫水浴箱（北京市醫(yī)療設(shè)備廠）；電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海滬南科學(xué)儀器廠）；10 cm×10cm信宜P型單槽層析缸；薄層色譜所用硅膠G（10 cm ×10 cm，青島海洋化工廠分廠）；其他化學(xué)試劑均為分析純。

2 實驗方法與結(jié)果

2.1 赤芍的TLC鑒別：①取本品40 mL±1 mL （含赤芍藥材3 g± 0.08 g），置于分液漏斗中，加水40 mL，搖勻，加醋酸乙酯40 mL，蓋好，橫置輕輕滾動振搖提取，再正立靜置約10 min，水浴蒸干已萃取醋酸乙酯液，之后加入1 mL甲醇，溶解制作成實驗樣品溶液。②不含赤芍陰性對照樣品的制作：以復(fù)傷糖漿處方比例為基礎(chǔ)，以其制備工藝為準(zhǔn)，選取除赤芍的其他12種藥材，量取該對照樣品40 mL，同上法制備缺赤芍的陰性對照溶液。③另取赤芍藥材5 g，打成粗粉，加水100 mL煎煮約20 min濾過，取濾液40 mL，同供試品溶液制備法制備赤芍藥材供試溶液。④芍藥苷對照品溶液制作：稱取芍藥苷對照品1 mg（精密）+1 mL甲醇，溶解制成。⑤吸取上述①～④溶液各5 μL，采用照薄層色譜法試驗[2-3]，點于同一個硅膠G薄層板上，以40氯仿：5醋酸乙酯：10甲醇：0.2甲酸作為展開劑，展開大約8 cm，這后取出并晾干。以香草醛硫酸溶液（5%）作為噴灑劑進行噴灑，慢慢均勻加熱，一直到斑點清晰為止。通過視檢觀察結(jié)果。結(jié)果：陰性對照在相應(yīng)對照品色譜上沒有出現(xiàn)斑點，實驗試品和相應(yīng)對照品色譜的同一個位置上出現(xiàn)斑點，且斑點相同，均為藍紫色斑點。見圖1。

圖1 赤芍薄層色譜圖1.陰性對照；2～3.供試品；4.赤芍藥材；5.芍藥苷

圖2 延胡索薄層色譜圖1.陰性對照；2～3.供試品；4.延胡索乙素

圖3 牡丹皮薄層色譜圖1.陰性對照；2～3.乙醚提取的供試品；4.乙酸乙酯提取的供試品；5.丹皮酚

圖4 烏頭堿限量薄層色譜圖1～2.乙酸乙酯提取的供試品；3.乙醚提取的供試品；4.烏頭堿

2.2 延胡索的TLC鑒別：①取本品40 mL±1 mL （含延胡索藥材3 g ±0.08 g），加水40 mL稀釋，用氨試液調(diào)pH值9～10，置于分液漏斗中，加乙酸乙酯40 mL，蓋好，橫置輕輕滾動振搖提取，再正立靜置約10 min，萃取乙酸乙酯液，水浴蒸干，加甲醇1 mL溶解，作為供試品溶液。②按復(fù)傷糖漿處方比例及制備工藝取除延胡索外的其他12味藥材，制備缺延胡索的陰性對照樣品溶液，取樣品40 mL，根據(jù)上面的方法制作不含延胡索陰性對照溶液。③不含延胡索陰性對照溶液制作：稱取延胡索對照品1 mg（精密）+1 mL甲醇，溶解制成。⑤吸不含延胡索陰性對照溶液和實驗溶液各5 μL，采用照薄層色譜法試驗[2,4]，點于同一個硅膠G薄層板上，以6正己烷：4氯仿：1甲醇作為展開劑，展開大約8 cm，這后取出并晾干。以稀碘化鉍鉀試液作為噴灑劑進行噴灑，慢慢均勻加熱，一直到斑點清晰為止。通過視檢觀察結(jié)果。結(jié)果：陰性對照在相應(yīng)對照品色譜上沒有出現(xiàn)斑點，實驗試品和相應(yīng)對照品色譜的同一個位置上出現(xiàn)斑點，且斑點相同，均為橘黃色斑點。見圖2。

2.3 牡丹皮的TLC鑒別：①取本品50 mL±1 mL（含丹皮藥材1.5 g± 0.03 g），置于分液漏斗中，加水25 mL，搖勻，加乙醚30 mL，蓋好，橫置輕輕滾動振搖提取，再正立靜置約10 min，萃取乙醚液，揮干，然后加丙酮1 mL使溶解，作為供試品溶液。②按復(fù)傷糖漿處方比例及復(fù)傷糖漿制備工藝取除牡丹皮外的其他12味藥材，制備缺牡丹皮的陰性對照樣品，量取該對照樣品50 mL，同上法制備缺丹皮的陰性對照溶液。③精密稱取取丹皮酚對照品1 mg，加丙酮1 mL溶解，作為對照品溶液。④吸取丹皮酚對照品溶液和實驗溶各l0 μL，采用照薄層色譜法試驗[2,4]，點于同一個硅膠G薄層板上，以3環(huán)己烷：1乙酸乙酯作為展開劑，展開大約8 cm，這后取出并晾干。以三氯化鐵試液作為噴灑劑進行噴灑，慢慢均勻加熱，一直到斑點清晰為止。通過視檢觀察結(jié)果。結(jié)果：陰性對照在相應(yīng)對照品色譜上沒有出現(xiàn)斑點，實驗試品和相應(yīng)對照品色譜的同一個位置上出現(xiàn)斑點，且斑點相同，均為暗紫色斑點。見圖3。

2.4 烏頭堿限量：①取本品50 mL±1 mL（含制川烏、制草烏藥材共2 g±0.04 g），加氨試液調(diào)pH至9～10，同時再加乙酸乙酯輕搖提取3次，每一次15 mL，合并提取液并蒸干，最后加1 mL無水乙醇，溶解制作而成實驗溶液。②烏頭堿對照品1 mg+1 mL無水乙醇，溶解制作而成對照品。③吸取實驗溶液和烏頭堿對照品溶液各5 μL，采用照薄層色譜法試驗[2,4]，點于同一個硅膠G薄層板上，以9氯仿：2丙酮：1甲醇作為展開劑，展開大約8cm左右，這后取出并晾干。以稀碘化鉍鉀試液作為噴灑劑進行噴灑，慢慢均勻加熱，一直到斑點清晰為止。通過視檢觀察結(jié)果。結(jié)果：陰性對照在相應(yīng)對照品色譜上沒有出現(xiàn)斑點或斑點小于對照品的斑點。見圖4。

3 討 論

①由于復(fù)傷糖漿為液體制劑，供試品制備均采用溶劑直接提取。所取樣品的量參照藥典中該藥材的檢測量，并結(jié)合本試驗的實際，選擇斑點清晰，易于識別并且操作簡便、誤差較小的樣品量作為檢測量。烏頭堿限量檢查參照藥典制川烏、制草烏取樣量設(shè)定[2]。本制劑日服用量為45～90 mL，折算為烏頭堿最大量為0.9～1.8 mg，在最小中毒量以下。本文增加了兩味主藥延胡索、牡丹皮的薄層鑒定及烏頭堿限量檢查，規(guī)范了赤芍的薄層檢查方法，經(jīng)多次實驗，斑點清晰、圓整，重復(fù)性好。能很好的控制復(fù)傷糖漿的質(zhì)量。在延胡索的薄層鑒定及烏頭堿限量檢查中，先分別用的是氯仿和乙醚作提取溶劑，由于氯仿和乙醚為麻醉品毒性較大，屬公安部門管制品，所以改用乙酸乙酯用作提取溶劑，結(jié)果比用乙醚提取效果更好（圖4）。丹皮薄層鑒定也曾考慮用乙酸乙酯提取，由于采用乙酸乙酯提取相對乙醚提取的薄層色譜斑點顏色淡一些，清晰度不如乙醚提取好（圖3），故仍然采用乙醚作提取溶劑。②延胡索具有活血散瘀，行氣止痛的功效;主治跌打損傷及各種疼痛，丹皮、赤芍的功效都是清熱涼血，活血散瘀，均為該方中的主藥，所以首選它們作為檢驗標(biāo)準(zhǔn)。③烏頭堿限量先采用環(huán)己烷-乙酸乙酯-二乙胺（6∶4∶1）為展開劑，斑點不夠清晰，且二乙胺刺激性大，展開劑容易結(jié)晶，效果不穩(wěn)定，參考多種文獻并經(jīng)多次試驗后改用氯仿-丙酮-甲醇（9∶2∶1）效果非常理想。

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[2] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典:一部[S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010: 36-160.

[3] 武琳,楊光,黃菲.連翹敗毒丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中國中醫(yī)藥信息雜志,2014,21(5): 95-97.

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R282.710.3

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1671-8194（2016）35-0020-02