山海螺的化學(xué)成分初步研究

馬秉智 ，王景雁 ，，赫 軍 ，李 棟 ，蘭 頤 ，張迅杰 ，邱 玥 ，陸 進(jìn) ?，吳 清

（1.中日友好醫(yī)院 藥學(xué)部，北京 100029；2.北京中醫(yī)藥大學(xué) 中藥學(xué)院，北京 100102；3.山東達(dá)因海洋生物制藥股份有限公司，威海 264300）

技術(shù)與方法

山海螺的化學(xué)成分初步研究

馬秉智1，王景雁1，2，赫 軍1，李 棟1，蘭 頤3，張迅杰2，邱 玥2，陸 進(jìn)1?，吳 清2

（1.中日友好醫(yī)院 藥學(xué)部，北京 100029；2.北京中醫(yī)藥大學(xué) 中藥學(xué)院，北京 100102；3.山東達(dá)因海洋生物制藥股份有限公司，威海 264300）

山海螺為桔梗科植物羊乳的根，原植物為Condonopsis lanceolata （Sieb.et Zucc.）Tratv.[Campanumoea lanceolata Sieb.et Zucc.]，味甘、辛，性平，歸脾、肺經(jīng)，具有益氣養(yǎng)陰、解毒消腫、排膿、通乳之功效。主治神疲乏力、頭暈頭痛、肺癰、乳癰、腸癰、瘡癤腫毒、喉蛾、瘰疬、產(chǎn)后乳少、白帶，毒蛇咬傷[1]。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，山海螺具有抗氧化、改善記憶；鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、抗驚厥作用；保肝、醒酒作用；抗炎，降低血脂、膽固醇，抗癌、抗突變；抗血小板凝集、抗血栓；降低血糖、調(diào)節(jié)免疫等藥理作用[2]。研究發(fā)現(xiàn)，山海螺50%乙醇大孔樹脂洗脫部位含有大量烯炔類化合物，又以黨參炔苷含量最高。另外，烯炔類化合物具有抗癌、抗氧化等作用[3]。通過進(jìn)行系統(tǒng)的分離純化，共得到：（1）5-羥甲基-2-呋喃甲醛、（2）codonopilodiynoside A、（3）lobetyol、（4）（+）-isolariciresinol、（5）黨參炔苷。其中化合物2～5為烯炔類化合物，1～4為我們首次從該植物中分得，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 儀器與材料

1.1 儀器

INOVA-500MHz型核磁共振儀（Varian公司，美國(guó)），溶劑峰為內(nèi)標(biāo)；Agilent1260 series型高效液相色譜儀（Agilent公司，美國(guó)）；Aglient Eclipse plus C18 色譜柱（4.6mm×100mm，3.5μm）（Agilent公司，美國(guó)）；LC-6AD 型高效液相制備色譜儀（島津公司，日本），YMC-Pack ODS-A色譜柱（20mm×250mm，10μm）（YMC 公司，美國(guó)）。

1.2 材料

山海螺供試品由中日友好醫(yī)院中藥庫(kù)提供（購(gòu)自北京市鶴延齡藥業(yè)發(fā)展有限公司，產(chǎn)地：河北，批號(hào)：140941），經(jīng)我院藥學(xué)部中藥庫(kù)唐永和藥師鑒定為桔梗科黨參屬植物羊乳的根；Sephadex LH-20（GE Healthcare Bio-Sciences AB公司，瑞典）；HP-20型大孔吸附樹脂（三菱株式會(huì)社，日本）；甲醇、乙腈為色譜純（美國(guó)Fisher公司），其他化學(xué)試劑均為分析純，水為高純水。

2 提取與分離

干燥山海螺25kg，用水煎煮3次，加水量分別為15、12、12 倍量，提取時(shí)間分別為 2h、1h、1h，提取液濃縮至約30kg后，加95%乙醇至含醇量為60%，放置過夜，分離上清液，減壓濃縮至約3kg，再采用HP-20大孔樹脂柱對(duì)濃縮液進(jìn)行分離純化。上樣后分別用2倍柱體積水、10%乙醇、30%乙醇、50%乙醇、95%乙醇進(jìn)行洗脫，得到50%乙醇部位180g。將此部分反復(fù)用Sephadex LH-20柱色譜和制備高效液相色譜儀進(jìn)行分離純化，得到化合物1（10mg）、2（8mg）、3（10mg）、4（20mg）、5（100mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物 1：淺黃色油狀物，1H-NMR （DMSO-d6，400 MHz）、13C-NMR （DMSO-d6，100MHz）數(shù)據(jù)（由于是已知化合物，故略）與文獻(xiàn)[4]報(bào)道的5-羥甲基-2-呋喃甲醛數(shù)據(jù)基本一致。

化合物 2：白色粉末，1H-NMR （DMSO-d6，400MHz）、13C-NMR（DMSO-d6，100MHz）數(shù)據(jù)（由于是已知化合物，故略）與文獻(xiàn)[6]報(bào)道的codonopilodiynoside A數(shù)據(jù)基本一致。

化合物 3：淺黃色油狀物，1H-NMR （DMSO-d6，500 MHz）、13C-NMR （DMSO-d6，125MHz）數(shù)據(jù)（由于是已知化合物，故略）與文獻(xiàn)[7]報(bào)道的lobetyol數(shù)據(jù)基本一致。

化合物 4：淡紅色粉末，ESI-MS（m/z）、1H-NMR（DMSO-d6，400MHz）、13C-NMR（DMSO-d6，100MHz）數(shù)據(jù)（由于是已知化合物，故略）與文獻(xiàn)[5]報(bào)道的（+）-isolariciresinol數(shù)據(jù)基本一致。

化合物 5：淺黃色油狀物，1H-NMR （DMSO-d6，500 MHz）、13C-NMR （DMSO-d6，125MHz）數(shù)據(jù)（由于是已知化合物，故略）與文獻(xiàn)[8]報(bào)道的黨參炔苷數(shù)據(jù)基本一致。

4 討論

從前期對(duì)山海螺的化學(xué)成分和藥理作用研究進(jìn)展概述[2]可知，山海螺主要含有三萜皂苷類、生物堿類、苯丙醇苷類等化學(xué)成分，在這幾類化學(xué)成分中，烯炔類化合物紫外光譜特征性最強(qiáng)，呈鋸齒狀，而且在50%乙醇洗脫部位數(shù)量最多，其次是30%乙醇洗脫部位，再加上文獻(xiàn)[3]報(bào)道過天然炔類化合物具有抗癌、抗炎、抗氧化等生物活性，故筆者課題組先對(duì)山海螺50%乙醇洗脫部位進(jìn)行了分離純化，由于這些烯炔類化合物結(jié)構(gòu)相似、含量極低（黨參炔苷除外），這給分離帶來了很大的難度，因此，這部分僅得到了5個(gè)化合物。

目前，山海螺的化學(xué)成分和藥效物質(zhì)基礎(chǔ)還在不斷地探索和研究中，而且這也是值得深入探索的方向，因此，筆者課題組后續(xù)將對(duì)山海螺30%乙醇、10%乙醇及水洗脫部位進(jìn)行分離純化，以期在化學(xué)成分研究方面取得新的進(jìn)展，從而為闡明其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)打下一定的基礎(chǔ)。

（致謝：中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院藥物研究所植化室張培成教授、楊椏楠副教授、分析師王映紅副教授協(xié)助完成NMR測(cè)定）。

[1]國(guó)家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會(huì).中華本草第7冊(cè)20卷[M].上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，1999.601-602.

[2]張淑君，李明，王震寰，等.輪葉黨參的化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展概述[J].中國(guó)藥師，2016，19（2）：347-350.

[3]趙秀梅，胡人杰.天然炔類化合物的研究現(xiàn)況[J].天津藥學(xué)，2007，19（1）：60-63.

[4]艾鳳偉，張嵩，李艷鳳，等.白附子的化學(xué)成分研究[J].中草藥，2010，41（2）：201-203.

[5]曹煦，李創(chuàng)軍，楊敬芝，等.雷公藤葉化學(xué)成分研究[J].中國(guó)中藥雜志，2011，36（8）：1028-1031.

[6]Jiang YP，Liu YF，Guo QL，et al.C14-Polyacetylene glucosides from codonopsis pilosula[J].Journal of Asian Natural Products Rsearch，2015，17（6）：601-614.

[7]Yang S，Shen T，Zhao LJ，et al.Chemical constituents of lobelia chinensis[J].Fitoterapia，2014，93：168-174.

[8]賀慶，朱恩圓，王崢濤，等.黨參化學(xué)成分的研究[J].中國(guó)藥學(xué)雜志，2006，41（1）：10-12.

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（81473365）；北京中醫(yī)藥大學(xué)自主選題項(xiàng)目（2016-JXS-SX095）。

1* 本文通訊作者。

2017-04-21

2017-06-22