老年原發(fā)性血小板增多癥患者Jak2基因v617f點(diǎn)突變檢測(cè)的臨床意義

謝曉玲

(惠州市中心人民醫(yī)院血液科，廣東 惠州 516001)

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老年原發(fā)性血小板增多癥患者Jak2基因v617f點(diǎn)突變檢測(cè)的臨床意義

謝曉玲

(惠州市中心人民醫(yī)院血液科，廣東 惠州 516001)

目的探討老年原發(fā)性血小板增多癥(ET)患者Jak2基因v617f點(diǎn)突變檢測(cè)的臨床意義。方法老年ET患者100例，檢測(cè)Jak2基因v617f點(diǎn)突變，根據(jù)檢測(cè)結(jié)果分為陰性組(n=54)與陽(yáng)性組(n=46)，比較兩組年齡、性別、脾腫大、骨髓巨核細(xì)胞數(shù)、實(shí)驗(yàn)室檢查指標(biāo)及血栓發(fā)生率、出血率。結(jié)果兩組年齡、性別、脾腫大及骨髓巨核細(xì)胞數(shù)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)。陽(yáng)性組白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC)水平顯著高于陰性組(P<0.05)，兩組血紅蛋白(HGB)、血小板計(jì)數(shù)(PLT)水平比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。陽(yáng)性組血栓發(fā)生率顯著高于陰性組(P<0.05)，兩組出血率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論Jak2基因v617f點(diǎn)突變檢測(cè)有利于輔助臨床診斷老年ET，有效評(píng)估患者疾病狀態(tài)，并為臨床治療和預(yù)防血栓的發(fā)生提供參考依據(jù)。

原發(fā)性血小板增多癥；Jak2；基因突變；v617f

原發(fā)性血小板增多癥(ET)是發(fā)病率較高的一類骨髓增殖性疾病，亦是一種多能干細(xì)胞慢性克隆增生性疾病〔1〕。主要臨床表現(xiàn)為外周血血小板計(jì)數(shù)的持續(xù)性升高〔2〕。有研究報(bào)道〔3〕，ET患者普遍存在Jak2基因12號(hào)外顯子第1849位核苷酸G-T突變，這也導(dǎo)致了負(fù)調(diào)控功能區(qū)Jak2蛋白的617位結(jié)氨酸錯(cuò)譯編碼為苯丙氨酸。本文擬研究老年ET患者Jak2基因v617f點(diǎn)突變檢測(cè)的臨床意義。

1 資料與方法

1.1臨床資料 回顧性分析2012年3月至2016年3月于惠州市中心人民醫(yī)院接受治療的老年ET患者100例，納入標(biāo)準(zhǔn)：①患者均符合世界衛(wèi)生組織(WHO)制定的ET診斷標(biāo)準(zhǔn)〔4〕，且均為ET；②年齡≥60歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他周圍血管病、冠心病、惡性腫瘤及遺傳性易栓癥等患者；②伴有高血壓、糖尿病或高脂血癥者。患者男60例，女40例，年齡60～81〔平均(37.2±8.3)〕歲；病程1～8年，平均(3.46±1.33)年。患者均知情同意。根據(jù)檢測(cè)結(jié)果分為陽(yáng)性組46例，陰性組54例。陽(yáng)性組男28例，女18例；年齡(68.2±3.6)歲；脾腫大25例；骨髓巨核細(xì)胞數(shù)>36個(gè)39例；≤36個(gè)7例。陰性組男32例，女22例；年齡(67.9±3.7)歲；脾腫大20例；骨髓巨核細(xì)胞數(shù)>36個(gè)41例，≤36個(gè)13例。兩組年齡、性別、脾腫大及骨髓巨核細(xì)胞數(shù)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)。

1.2方法 檢測(cè)所有患者Jak2基因v617f點(diǎn)突變情況，Jak2引物序列：上游引物一：5′-AGCATTTGGTTTTAAATTATGGAGTATATT-3′,上游引物二：5′-ATCTATAGTCATGCTGAAAGTAGGAGAAAG-3′，下游引物：5′-CTGAATAGTCCTACAGTGTTTTCA-GTTTCA-3′。PCR反應(yīng)體系為25 μl，包括150 ng的DNA以及10 pmd/μl兩種。擴(kuò)增條件：94℃預(yù)變性240 s，變性45 s，56℃退火30 s，72℃延伸60 s，完成35個(gè)循環(huán)后繼續(xù)72℃延伸600 s。擴(kuò)增完成后取Jak2擴(kuò)增產(chǎn)物8 μl，在2.0%瓊脂糖凝膠下進(jìn)行電泳，使用紫外燈檢查結(jié)果。判定標(biāo)準(zhǔn)：①突變陽(yáng)性：同時(shí)存在364 bp與203 bp兩條條帶；②突變陰性：只存在364 bp一條條帶。

1.3觀察指標(biāo) 比較兩組年齡、性別、脾腫大、骨髓巨核細(xì)胞數(shù)、實(shí)驗(yàn)室檢查指標(biāo)以及血栓發(fā)生率、出血率，其中實(shí)驗(yàn)室檢查指標(biāo)主要包括外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC)、血紅蛋白(HGB)、血小板(PLT)。所有患者入院后均采集指尖血3 ml，3 000 r/min離心15 min后分離血清，并立即送檢，采用JHF7-3000型血常規(guī)檢測(cè)儀(西化儀科技有限公司生產(chǎn))進(jìn)行檢測(cè)，由電腦報(bào)告結(jié)果。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS21.0軟件進(jìn)行χ2、t檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1兩組實(shí)驗(yàn)室檢查指標(biāo)比較 陽(yáng)性組WBC水平顯著高于陰性組(P<0.05)，兩組HGB、PLT水平比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

2.2兩組血栓發(fā)生率、出血率比較 陽(yáng)性組血栓發(fā)生率〔45.65%(21/46)〕顯著高于陰性組〔20.37%(11/54)，P<0.05〕，兩組出血率〔6.52%(3/46)、5.56%(3/54)〕差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=7.296、0.041，P>0.05)。

表1 兩組實(shí)驗(yàn)室檢查指標(biāo)比較

3 討 論

ET屬于骨髓增殖性腫瘤之一，該病主要是一種存在不同血液學(xué)特征的綜合征，且可相互轉(zhuǎn)化〔5〕。血栓形成及出血是臨床ET患者發(fā)生率最高的并發(fā)癥，嚴(yán)重時(shí)甚至?xí)苯訉?dǎo)致患者的死亡〔6〕。有研究報(bào)道，Jak2基因v617f點(diǎn)突變屬于動(dòng)脈血栓的高危因素〔7〕。有研究報(bào)道〔8〕，Jak2基因v617f點(diǎn)突變可能是通過(guò)增強(qiáng)酪氨酸蛋白激酶/信號(hào)傳導(dǎo)子和轉(zhuǎn)錄活化子(JAK-STAT)信號(hào)傳導(dǎo)通路，從而使得紅系祖細(xì)胞的細(xì)胞生存蛋白BCL-X過(guò)度表達(dá)，同時(shí)通過(guò)MAPK與PI13K信號(hào)傳導(dǎo)通路降低紅系祖細(xì)胞中死亡受體所誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，刺激造血細(xì)胞系的G1/S期轉(zhuǎn)化，進(jìn)一步促進(jìn)了造血細(xì)胞的增殖，有利于細(xì)胞增生以及分化。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)Jak2基因v617f點(diǎn)突變陽(yáng)性率結(jié)果與劉金梅等〔9〕結(jié)果存在一定差異。可能與兩組研究所選取的患者年齡不同有關(guān)。本研究結(jié)果提示Jak2基因v617f點(diǎn)突變與患者的年齡、性別、脾腫大及骨髓巨核細(xì)胞數(shù)情況無(wú)相關(guān)性。但另有研究報(bào)道顯示年齡不同的ET患者Jak2基因v617f點(diǎn)突變陽(yáng)性率存在顯著差異〔10〕。其中導(dǎo)致結(jié)果出現(xiàn)誤差的原因可能與不同研究中的樣本量存在差異，且本研究只選取了年齡≥60歲老年患者有關(guān)。另外本研究提示Jak2基因v617f點(diǎn)突變與ET患者的血液學(xué)特征存在一定相關(guān)性，可能成為臨床上診斷ET的指標(biāo)之一。本文結(jié)果還與鄒煦等〔11〕研究相一致，說(shuō)明Jak2基因v617f點(diǎn)突變可能參與了ET患者血栓形成過(guò)程，并發(fā)揮一定作用。

1Rashid M,Ahmed RZ,Ahmed S,etal.Coexisting JAK2V617F and CALR Exon 9 mutation in essential thrombocythemia〔J〕.Indian J Hematol Blood Transfus,2016;32(Suppl 1):112-6.

2Sokolova MA,Turkina AG,Melikyan AL,etal.Efficiency of interferon therapy in patients with essential thrombocythemia or polycythemia vera〔J〕.Ter Arkh,2016;88(12):69-77.

3成志勇,付建珠,徐 倩,等.PTEN、VEGF、COX-2與JAK2 V617F突變陽(yáng)性骨髓增殖性腫瘤血管新生〔J〕.中國(guó)病理生理雜志,2016;32(5):938-42.

4Gisslinger H,Jeryczynski G,Gisslinger B,etal.Clinical impact of bone marrow morphology for the diagnosis of essential thrombocythemia:comparison between the BCSH and the WHO criteria〔J〕.Leukemia,2017;31(3):774-5.

5Smith BB,Nuttall GA,Pruthi RK,etal.A novel approach to essential thrombocythemia and cardiac surgery〔J〕.Ann Thorac Surg,2017;103(3):e249-50.

6李小妮.151例低危原發(fā)性血小板增多癥患者的臨床特點(diǎn)和血栓危險(xiǎn)因素相關(guān)分析〔J〕.內(nèi)科急危重癥雜志,2016;22(5):379-80.

7許 笑,張群峰,張心菊,等.采用微陣列數(shù)字PCR檢測(cè)JAK2基因V617F突變〔J〕.中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2016;39(3):176-80.

8Gadomska G,Stankowska K,Boinska J,etal.Activation of the tissue factor-dependent extrinsic pathway and its relation to JAK2 V617F mutation status in patients with essential thrombocythemia〔J〕.Blood Coagul Fibrinolysis,2016;27(7):817-21.

9劉金梅,高 坤,張文珍,等.原發(fā)性血小板增多癥患者Jak2-v617f突變與急性冠脈綜合征的相關(guān)性〔J〕.中外醫(yī)學(xué)研究,2016;14(12):149-50.

10吳明正,周澤平,文 靜,等.原發(fā)性血小板增多癥的危險(xiǎn)分層與治療進(jìn)展〔J〕.實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志,2015;31(17):2920-1.

11鄒 煦,常炳慶,杜文津,等.原發(fā)性血小板增多癥患者血栓發(fā)生與JAK2V617F基因相關(guān)性的薈萃分析〔J〕.癌癥進(jìn)展,2014;12(2):172-8.

〔2017-03-19修回〕

(編輯 袁左鳴/滕欣航)

R558

A

1005-9202(2017)18-4614-02；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2017.18.087

惠州市科技計(jì)劃項(xiàng)目(No.20160801)

謝曉玲(1978-)，女，副主任醫(yī)師，主要從事血液病研究。