長(zhǎng)春瑞濱在輸液性靜脈炎小鼠模型建立中的作用及干預(yù)措施

申建賓 于子瑞 李勇紅 曹 梅 崔應(yīng)麟

(河南中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院(河南省中醫(yī)院)，河南 鄭州 450002)

1 河南省胸科醫(yī)院

長(zhǎng)春瑞濱在輸液性靜脈炎小鼠模型建立中的作用及干預(yù)措施

申建賓 于子瑞 李勇紅1曹 梅 崔應(yīng)麟

(河南中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院(河南省中醫(yī)院)，河南 鄭州 450002)

目的探討長(zhǎng)春瑞濱在輸液性靜脈炎小鼠模型建立中的作用及干預(yù)措施。方法選取健康成年小鼠，分別應(yīng)用不同給藥劑量、給藥濃度以及給藥速度，觀察靜脈炎發(fā)生情況，并應(yīng)用西咪替丁等不同的H2受體阻斷劑進(jìn)行干預(yù)。結(jié)果長(zhǎng)春瑞濱(VIN)給藥濃度以及注射速度不變的情況下，注射劑量越多，小鼠靜脈炎的發(fā)生率更高并且更加嚴(yán)重(P<0.05)；給藥濃度下降后增加了注射難度并提高了小鼠死亡率(P<0.05)；給藥速度越快，小鼠靜脈炎發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)越高(P<0.05)；預(yù)先應(yīng)用西咪替丁可以顯著降低小鼠靜脈炎的發(fā)生率(P<0.05)。結(jié)論制備動(dòng)物模型能夠?yàn)楦倪M(jìn)VIN用藥方法提供重要參考，并進(jìn)一步探索干預(yù)輸液性靜脈炎的藥物治療措施。

長(zhǎng)春瑞濱；輸液性靜脈炎；西咪替丁

輸液性靜脈炎指的是靜脈當(dāng)中使用刺激性強(qiáng)以及濃度較高的藥物，或者長(zhǎng)期使用刺激性強(qiáng)的導(dǎo)管導(dǎo)致靜脈出現(xiàn)炎性反應(yīng)。目前臨床上通常使用兔耳緣以及小鼠尾進(jìn)行靜脈用藥造?！?〕。但是這類模型的靜脈損傷容易受不同劑量、容量以及速度的影響而出現(xiàn)不同的局部反應(yīng)，手工控制無(wú)法有效確保參數(shù)穩(wěn)定。同時(shí)，延長(zhǎng)給藥時(shí)間會(huì)引發(fā)疼痛，這種感覺(jué)會(huì)讓動(dòng)物掙扎，他們動(dòng)作幅度會(huì)增大，所以不方便對(duì)他們進(jìn)行注射。如果工作人員注射得過(guò)快，會(huì)使小鼠發(fā)生猝死，進(jìn)而影響造模有效率〔2〕。本研究通過(guò)分析小鼠尾靜脈應(yīng)用化療藥物的容量、劑量以及速度等因素靜脈炎發(fā)生之間的關(guān)系，進(jìn)而成立一個(gè)輸液性靜脈炎的模型，研究輸液性靜脈炎的病因和治療辦法。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取實(shí)驗(yàn)用健康成年C57小鼠，5～8周齡，體重20～30 g，雌性。美國(guó)BAS公司MDI001進(jìn)泵，MDI002支架，MDI020控制器，一次性注射器(1 ml，上海雙鶴公司)，一次性靜脈輸液針(0.5 mm，山東威高公司)。長(zhǎng)春瑞濱注射液(VIN，江蘇豪森制藥公司，10 mg/ml)。

1.2方法

1.2.1建模 應(yīng)用美國(guó)BAS公司推進(jìn)泵，根據(jù)血管的直徑選擇針頭，鑒于針頭越細(xì)誘發(fā)的血管損傷越小，本研究選用7號(hào)頭皮針，VIN的用藥時(shí)間10 min〔3〕。自行設(shè)計(jì)給藥裝置并建立模型，隨機(jī)將48只小鼠平均分成6組，包括空白組，VIN1組(18.8 mg/kg)，VIN2組(28.1 mg/kg)，VIN3組(37.5 mg/kg)，VIN4組(56.3 mg/kg)，VIN5組(75 mg/kg)。濃度設(shè)定10 mg/ml，速度為0.75 μl/s。注射之前要讓小鼠沒(méi)有其他的疾病和身上沒(méi)有傷口。在正式實(shí)驗(yàn)之前要對(duì)小鼠注射地西泮和氯胺酮麻醉小鼠，使用酒精擦拭尾部之后注射VIN。盡量一次穿刺成功，保證靜脈當(dāng)中無(wú)藥物滲漏之后，維持位置不變，根據(jù)各組的要求推注給藥。注射結(jié)束后拔出針頭，使用棉球壓迫穿刺維持從而避免藥液外滲〔4〕。

1.2.2給藥濃度 根據(jù)隨機(jī)法將24只小鼠平分成三組，濃度1為10 mg/ml，濃度2為5 mg/ml，濃度3為2.5 mg/ml。劑量37.5 mg/kg，速度0.75 μl/s。

1.2.3給藥速度 根據(jù)隨機(jī)法將24只小鼠平分成三組，速度1為0.75 μl/s，速度2為0.3 μl/s，速度3為0.15 μl/s。

1.2.4干預(yù)措施 設(shè)定給藥濃度10 mg/ml，劑量37.5 mg/kg。西咪替丁(CIM)總體積250 μl，速度0.3 μl/s。把50只健康小鼠隨機(jī)分為空白組、模型組、CIM組、法莫替丁組以及雷尼替丁組，空白組使用生理鹽水(NS)75 μl+NS 250 μl；模型組使用VIN 75 μl以及NS 250 μl；CIM組使用VIN 75 μl以及CIM 250 μl；法莫替丁組使用VIN 75 μl以及F 250 μl；雷尼替丁組使用VIN 75 μl以及R 250 μl。

1.3觀察指標(biāo) 測(cè)量各組給藥之后靜脈炎的發(fā)生狀況，記錄整體狀況同時(shí)觀測(cè)腫脹以及消退狀況，固定位置使用卡尺測(cè)量鼠尾的直徑〔5〕。注藥7 d后使用頸椎脫臼法將小鼠處死。然后醫(yī)生讀片，用切片鏡觀察細(xì)胞的情況判斷輸液性靜脈炎的病理改變〔6〕。

用37.5 mg/kg的VIN，以0.3 μl/s的速度進(jìn)行注射。在第7天提取處死小鼠的病理組織，并在提取后染色，最后用顯微鏡觀察。用NS處理的細(xì)胞較穩(wěn)定，沒(méi)有雜亂的現(xiàn)象：用VIN處理的小鼠細(xì)胞不穩(wěn)定，排列不整齊，周圍有炎癥出現(xiàn)，為建模成功。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS18.0軟件行χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1不同劑量VIN對(duì)于輸液性靜脈炎發(fā)展發(fā)展的影響 VIN1組以及VIN2組小鼠出現(xiàn)靜脈炎，但癥狀輕，靜脈炎發(fā)生率分別為12.5%、37.5%；VIN3組、VIN4以及VIN5組的靜脈炎發(fā)生率均為100%。VIN給藥濃度以及注射速度不變的情況下，注射劑量越大，小鼠靜脈炎的發(fā)生率更高并且更加嚴(yán)重(P=0.006)。VIN1組、VIN2組、VIN3組均無(wú)死亡，VIN4組、VIN5組死亡率分別為25.0%、50.0%。

2.2不同藥物濃度對(duì)小鼠靜脈炎的影響 濃度1、2、3組靜脈炎發(fā)生率均為100%，濃度1組無(wú)死亡，濃度2、3組死亡率分別為50.0%、62.5%。

2.3不同的注射藥物速度對(duì)小鼠靜脈炎的影響 速度1、2、3組靜脈炎發(fā)生率分別為33.3%、75.0%、25.0%；速度1組死亡5例，其余2組無(wú)死亡。說(shuō)明注射藥物較快的時(shí)候，小鼠死的多。

2.4三種H2受體阻斷劑對(duì)靜脈炎干預(yù)的效果 空白組未發(fā)生靜脈炎，模型組100%發(fā)生靜脈炎，CIM、法莫替丁、雷尼替丁組靜脈炎發(fā)生率分別為10.0%、90.0%、100.0%；各組均無(wú)死亡。預(yù)先應(yīng)用CIM可以顯著降低小鼠靜脈炎的發(fā)生率，同模型組比較存在明顯差異(P=0.006)，法莫替丁以及雷尼替丁干預(yù)之后與模型組無(wú)明顯區(qū)別(P=0.03)。

3 討 論

藥物輸液性的靜脈炎是臨床上比較常見(jiàn)的一種藥源性疾病，發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)比較高，危害也比較嚴(yán)重，往往給患者帶來(lái)非必要的心理痛苦、生理痛苦。醫(yī)生在診治這種疾病的時(shí)候要制定合理的方法，確定好標(biāo)準(zhǔn)。過(guò)去認(rèn)為，血栓性的動(dòng)物模型不能直接看出通過(guò)靜脈注射藥物對(duì)這些實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的影響和對(duì)靜脈炎的影響；在對(duì)小鼠進(jìn)行注射的時(shí)候，小鼠患的可能性特別低，不能用特別典型的藥物體現(xiàn)其他藥物的特點(diǎn)〔7〕；如果在診治疾病的時(shí)候出現(xiàn)了靜脈炎，通常都會(huì)有很多原因，例如藥物的類型、注射藥物的速度等，都會(huì)對(duì)靜脈炎產(chǎn)生影響。所以沒(méi)有辦法利用特別典型的模型進(jìn)行探究〔8〕。還有最重要的一點(diǎn)就是，在治療疾病的過(guò)程中不是只使用一種類型的藥物，通常都使用很多種：例如糖皮質(zhì)激素、血管擴(kuò)張劑、抗凝藥、局部麻醉藥、溶栓藥、非甾體抗炎藥以及血管擴(kuò)張劑等，少數(shù)情況下甚至還使用化瘀活血中藥預(yù)防使用藥物誘發(fā)的靜脈炎〔9〕。

和過(guò)去已經(jīng)有過(guò)的手工操作的靜脈炎造模方法比較，本方法更加科學(xué)地體現(xiàn)出治療疾病的具體過(guò)程，從而清楚地看出其中的不安全性，可以幫助解決其中存在的不足?？梢愿鶕?jù)不同的病情采取不同的治療方法，進(jìn)而研究不同的給藥濃度、不同的給藥速度、不同的給藥時(shí)間等干預(yù)因素對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響〔10〕。不同的藥物會(huì)對(duì)動(dòng)物產(chǎn)生不同的反應(yīng)，濃度越高，化療藥物會(huì)在血管當(dāng)中滯留更長(zhǎng)的時(shí)間，靜脈炎發(fā)生發(fā)展的風(fēng)險(xiǎn)也就更高〔11〕；濃度太低則無(wú)法讓治療的效果更加明顯。如果注射藥物的速度過(guò)快也會(huì)對(duì)小鼠產(chǎn)生刺激，進(jìn)而引發(fā)各種不好的結(jié)果。所以要在一定的范圍內(nèi)，調(diào)制出最科學(xué)的用藥濃度，確保濃度有效的基礎(chǔ)上，最大限度降低注射藥物對(duì)靜脈產(chǎn)生的影響。如果在試驗(yàn)過(guò)程中采用VIN靜脈化療的方法，并且能夠在10 min內(nèi)完成用藥，一方面能夠降低一些有毒的藥品對(duì)靜脈產(chǎn)生的毒害作用；另一方面，可以減少各種原因?qū)е碌乃幬锢速M(fèi)，可以減少很多問(wèn)題的發(fā)生，從而最大限度降低靜脈炎發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)〔12〕。因?yàn)閷?shí)驗(yàn)動(dòng)物的體積太小，血液循環(huán)也較簡(jiǎn)單，如果一次注射太多的藥物容易死亡。所以，在進(jìn)行分析的時(shí)候，要考慮到注射不同的濃度要保持注射的總量，也要注意維持一定的梯度，不要使小鼠的死亡數(shù)量較多，在一定程度上影響到結(jié)果分析。進(jìn)行研究的時(shí)候，選擇大小適當(dāng)?shù)尼橆^，避免因?yàn)獒橆^的原因使靜脈炎發(fā)生的可能性增加或減少，影響實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性。經(jīng)過(guò)優(yōu)化之后的實(shí)驗(yàn)條件一方面有利于小鼠發(fā)生靜脈損傷，另一方面不會(huì)讓小鼠有不好的效果或者是猝死。在模型組進(jìn)行模擬化療靜脈炎的時(shí)候會(huì)出現(xiàn)許多的臨床表現(xiàn)，而且還有比較良好的重復(fù)性。另外，小鼠的靜脈位置相對(duì)較淺，會(huì)更加容易觀察分析靜脈炎癥狀況。CIM是H2受體阻滯劑的一種，作為抗?jié)儾∷幬镌谂R床應(yīng)用，幾十年的應(yīng)用過(guò)程當(dāng)中積累的經(jīng)驗(yàn)比較豐富。但是該藥物在臨床應(yīng)用環(huán)節(jié)，發(fā)現(xiàn)一些同其他的H2受體拮抗劑不同的作用，例如研究人員發(fā)現(xiàn)西咪替丁可以有效預(yù)防VIN誘發(fā)的輸液性靜脈炎〔13〕。CIM是H2受體拮抗劑，能夠控制H2受體的表達(dá)，競(jìng)爭(zhēng)性發(fā)揮拮抗組胺效果，有效阻斷VIN誘發(fā)的靜脈炎〔14〕。

綜上所述，制備動(dòng)物模型能夠?yàn)楦倪M(jìn)VIN用藥方法提供重要參考，從而探索干預(yù)輸液性靜脈炎的藥物治療措施。

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國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目資助(No.81573919)

崔應(yīng)麟(1963-)，男，碩士，教授，主任醫(yī)師，主要從事中醫(yī)教學(xué)、科研及臨床研究。

申建賓(1976-)，男，主管藥師，主要從事臨床藥學(xué)研究。

R91

A

1005-9202(2017)20-4980-02；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.20.011

〔2017-02-11修回〕

(編輯 袁左鳴)