重復使用的比色杯對TSGF測定的影響研究

雷 鵬

山丹縣人民醫院檢驗科 甘肅省山丹縣 734100

重復使用的比色杯對TSGF測定的影響研究

雷 鵬

山丹縣人民醫院檢驗科 甘肅省山丹縣 734100

大量生物學研究證明，細胞惡變時通常出現一些特征變化，如a-酸性糖蛋白和芳香族氨基酸在血清中的含量高于正常，腫瘤浸潤或轉移可引起羥脯氨酸代謝紊亂，導致其在血清中含 量升高。癌變早期，雖然任何一種腫瘤標志物的變化都比較微小，不易被早期檢測。但TSGF（苯丙氨酸、酪氨酸、羥脯氨酸、a-酸性糖蛋白聯合試劑盒）不是針對某個單一腫瘤標志物，而是聯合檢測苯丙氨酸、酪氨酸、羥脯氨酸和a-酸性糖蛋白，使其共同顯色，提高了檢測的靈敏度和特異性。但是在實際工作中，部分醫院重復使用比色杯，在檢驗過程中對檢驗結果否影響，為了證實在檢驗過程中的影響，現特對本院20份標本進行TSGF測試，以檢測和評估重復使用的比色杯對TSGF測定的影響。

重復使用的比色杯；TSGF測定；腫瘤特異生長因子(TSGF)

1 材料

1.1 試劑

TSGF試劑盒（福建新大陸生物技術有限公司提供）。

1.2 檢測對象

本院20位住院患者，其中所用樣本血清全部為正常標準血清（排除溶血，脂血標本）。

1.3 儀器與試劑

722S分光光度計(上海精密科學儀器有限公司提供)，TSGF試劑盒（苯丙氨酸、酪氨酸、羥脯氨酸、a-酸性糖蛋白聯合試劑盒）；未開包裝比色杯；重復使用的比色杯。

2 方法

2.1 蒸餾水調節

分光光度計波長至470nm。

2.2 分離血清

每份血清分離兩份，一份用重復使用過的比色杯測定，另一份用新的比色杯測定。

3 過程

3.1 加樣

準確吸取40ul待測血清及40ul六個濃度的標準品，分別加入盛有1ml試劑的反應管中，蓋緊蓋子，充分混勻；

3.2 顯色

將反應管插入反應架中，置于100℃水浴鍋中加熱15分鐘，迅速取出并置于冷水中冷卻5分鐘以終止反應；

3.3 比色

將反應液倒入0.5cm光程比色杯中，在470nm波長處，測定各管樣本的吸光度值；

3.4 計算

TSGF標準品共有六個濃度，分別為0U/ml、20 U/ml、40 U/ml、60 U/ml、80 U/ml、100 U/ml。用標準濃度作橫坐標，所對應的吸光度值為縱坐標作標準曲線，在標準曲線上查得血清標本吸光度值所對應的濃度單位。上清以分光光度法(λ=470nm，光徑0.5cm,空比色杯調零)測定A，經標準曲線 計算TSGF含量(μ/ ml)。

4 根據以上結論對以下檢測對象進行檢測分析

①癌癥40例。其中肺癌18例，消化系統癌6例，惡性淋巴瘤8例，白血病(A LL)5例，前列腺癌3例。②非癌疾病30例。其中急性炎5例，慢性炎5例，結核病6例，非炎癥 14例。兩組患者血清按雙盲法檢驗。

5 TSGF測定

取血清40μl與反應管中試劑混勻，沸水浴內反應15min，自來水冷卻后30 00rpm離心。上清以分光光度法(λ=470nm，光徑0.5cm,空比色杯調零)測定A，經標準曲線 計算TSGF含量(μ/ml)。以TSGF>64u/ml為該項檢測陽性。

6 癌癥組

40例中TSGF含量71.7±15.7μ/ml；陽性31例(77.4%)。以肝癌、肺癌 、惡性淋巴瘤等陽性率高。

7 非癌組

30例TSGF含量59.1±12.2μ/ml，顯著低于癌癥組；陽性率25.0%(9/36 )亦顯著低于癌癥組(P<0.001)；陽性者主要來自急性炎癥、結核病及慢性炎癥。

7.1 對照

如表1所示。

表1：癌癥組與非癌組血清TSGF含量（U/ml）和陽性率（%）

8 討論

在酸性環境中，標本中的TSGF與試劑中顯色劑反應，形成470nm處有一特征吸收峰的黃褐色物質。從檢驗結果可看出，癌癥組絕大部分病人TSGF水平≥64U/ ml，結果表明腫瘤TSGF陽性率顯著高于非癌組。廠家試劑盒推薦正常人TSGF濃度范圍為（47±17）U/ml；<64 U/ml為陰性；可疑陽性為64～70 U/ml；陽性標準為≥71 U/ml。我們以TSGF>64u/ml為該項檢測陽性。在測定中所得結果做以比較，重復使用過的比色杯所得結果80%處于可疑陽性區間，而使用新的比色杯所得結果則在批間（VC%）≤80%之內。 綜上所述，血清TSGF是一種新的、敏感性和特異性較高的廣譜腫瘤標志物，檢測方法簡便快捷，結果穩定。對惡性腫瘤的初篩、早期輔助診斷、療效評價和預示腫瘤復發具有重要臨床意義和應用價值。在檢測過程中一定要謹慎處理，拿取比色杯時，只能用手指接觸兩側的毛玻璃，避免接觸光學面。同時注意輕拿輕放，防止外力對比色杯的影響，產生應力后破損。 不能將比色杯放在火焰或電爐上進行加熱或干燥箱內烘烤。當發現比色杯里面被污染后，應用乙醚和無水乙醇的混合液（各50%）清洗，及時擦拭干凈。不得將比色杯的透光面與硬物或臟物接觸。盛裝溶液時，高度為比色杯的2/3處即可，光學面如有殘液可先用濾紙輕輕吸附，然后再用鏡頭紙或絲綢拭。若太臟可用洗液清洗，但時間要短（幾秒鐘)，再用清水清洗干凈，切忌不能用洗潔精之類的清潔劑，以免影響測量。建議檢測時使用新開包裝比色杯。

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