血漿可溶性CD40/CD40L在ACS風(fēng)險(xiǎn)評估中的意義

唐春妍 袁武鋒 祁曉燕 王 帥

冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病（冠心病，CHD）在我國發(fā)病率較高，而急性冠狀動(dòng)脈綜合征（ACS）的發(fā)生對患者生命造成極大威脅。研究表明，炎癥在動(dòng)脈粥樣硬化及心腦血管疾病的發(fā)生、發(fā)展中具有重要的促進(jìn)作用［1］。血小板和白細(xì)胞參與的炎癥反應(yīng)在動(dòng)脈硬化性血栓形成性疾病的發(fā)生和發(fā)展中起重要作用［2］。CD40L為CD40配體，可來自于多種細(xì)胞，其與活化血小板等表達(dá)的CD40結(jié)合后形成的復(fù)合物為免疫及炎癥反應(yīng)中重要的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)，在CHD及ACS的發(fā)病機(jī)制中起著較為重要的作用［3］。然而作為炎癥標(biāo)志物，CD40L與CHD并發(fā)ACS的關(guān)系并不清楚。因此，本文旨在觀察和評估血清可溶性CD40和CD40L（sCD40，sCD40L）與冠心病患者發(fā)生ACS風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系。

1 臨床資料

1.1 一般資料 收集2016年1月至10月在浙江省人民醫(yī)院首次住院的CHD患者125例，其中男67例，女43例；年齡41～73歲，中位年齡54歲。穩(wěn)定型心絞痛（SAP）29例，不穩(wěn)定型心絞痛（UAP）38例、非ST段抬高性急性心肌梗死（NSTEAMI）32例、ST段抬高性急性心肌梗死（STEAMI）26例。合并糖尿病35例，高血壓42例，高血脂26例，合并＞2種疾病22例。冠心病的診斷參照國家衛(wèi)生計(jì)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《冠狀動(dòng)脈硬化性心臟病診斷標(biāo)準(zhǔn)》WS319-2010。排除標(biāo)準(zhǔn)：急慢性感染、炎癥、腦血管疾病、惡性腫瘤、肝腎疾病，1周內(nèi)接受任何藥物治療者。另選取同期64例初診符合上述排除標(biāo)準(zhǔn)的高血壓、高血糖和高血脂（三高）患者作為疾病對照組，其中男37例，女27例；年齡40～77歲，中位年齡55歲。包括糖尿病20例，高血壓23例，高血脂15例，合并＞2種疾病者6例。同時(shí)按性別、年齡相匹配選取同期50例體檢健康者作為正常對照組，其常規(guī)血液學(xué)、心電圖、X線以及B超等檢查未見明顯異常，1周內(nèi)未服用藥物。

1.2 方法 （1）樣本采集及處理：患者及體檢者于清晨空腹靜脈采血，采集枸櫞酸三鈉1：9抗凝血2.7ml，無抗凝血3ml，分別以1500g 離心5min分離血漿和血清，血漿置于-70℃冰箱保存，血清及時(shí)測定。（2）樣本測定：保存的血漿在臨用時(shí)從冰箱取出后于37℃水浴迅速復(fù)融，＜1h以上海太陽生物技術(shù)公司sCD40和sCD40L ELISA試劑盒和BIO-RAD800酶標(biāo)儀測定二者濃度；分離的血清＜2h以貝克曼庫爾特IMMAGE800型特定蛋白分析儀測定超敏C反應(yīng)蛋白（Hs-CRP）濃度，以雅培I-2000化學(xué)發(fā)光儀測定心肌肌鈣蛋白I（cTnI）濃度。操作嚴(yán)格按照儀器SOP和試劑盒說明書進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)軟件。正態(tài)資料以（s）表示，cTnI以中位數(shù)表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用SNK檢驗(yàn)，兩組間比較采用成組t檢驗(yàn)，cTnI采用秩和檢驗(yàn)。相關(guān)性采用Pearson線性相關(guān)性分析，風(fēng)險(xiǎn)評估采用Logistic單因素和多因素回歸分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 冠心病組與對照組各指標(biāo)水平比較 CHD組Hs-CRP濃度、血漿sCD40L和sCD40L濃度、cTnI濃度均顯著高于疾病對照組和正常對照組（P＜0.001），見表1。

表1 CHD患者與對照者Hs-CRP、sCD40、sCD40L和cTnI比較（

表1 CHD患者與對照者Hs-CRP、sCD40、sCD40L和cTnI比較（

注：與正常對照組和疾病對照組比較，*P＜0.001

?

2.2 各型冠心病組血漿sCD40L和sCD40L濃度比較 ACS組血漿sCD40L和sCD40L水平均顯著高于SAP組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）。ACS組中，UAP、NSTEMI、STEMI三組間血漿sCD40L和sCD40L水平差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表2。

表2 不同CHD組間sCD40表達(dá)和sCD40L水平比較（

表2 不同CHD組間sCD40表達(dá)和sCD40L水平比較（

注：與SAP組比較，*P＜0.001

?

2.3 CHD患者sCD40和sCD40L與Hs-CRP和cTnI的相關(guān)性 總CHD、SAP患者sCD40和sCD40L水平與Hs-CRP和cTnI 濃度均呈顯著正相關(guān)（P＜0.01），sCD40和sCD40L水平與cTnI濃度的相關(guān)性均高于與Hs-CRP濃度的相關(guān)性，而sCD40L水平與cTnI和Hs-CRP濃度的相關(guān)性均高于sCD40。ACS患者sCD40和sCD40L與cTnI和Hs-CRP濃度相關(guān)性極低（P＞0.05）。

2.4 sCD40和sCD40L對ACS風(fēng)險(xiǎn)評估的Logistic回歸分析 單因素回歸分析顯示，sCD40、sCD40L、Hs-CRP和cTnI均為ACS的危險(xiǎn)因素，多因素回歸分析顯示，調(diào)整Hs-CRP和cTnI的影響后，sCD40L為ACS的獨(dú)立危險(xiǎn)因素而sCD40非ACS獨(dú)立危險(xiǎn)因素。

3 討論

動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展與慢性炎癥關(guān)系密切［4］。CRP作為敏感的炎癥標(biāo)志物已得到公認(rèn)［5］。CD40主要表達(dá)于B淋巴細(xì)胞，其天然配體CD40L主要表達(dá)于T細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、平滑細(xì)胞、活化的血小板等。CD40-CD40L相互作用是白細(xì)胞、血小板等炎癥細(xì)胞之間傳遞炎癥和免疫信號的重要途徑，并可調(diào)節(jié)多種炎癥反應(yīng)。因此，CD40/CD40L也可作為炎癥反應(yīng)指標(biāo)。sCD40和sCD40L代表循環(huán)總體水平，與多種炎癥細(xì)胞表達(dá)和分泌的總CD40及CD40L有一致性，可間接反映CD40及CD40L總體表達(dá)數(shù)量。本資料結(jié)果顯示，CHD患者血清Hs-CRP濃度、血漿sCD40和sCD40L及cTnI水平均顯著高于單純高血壓、糖尿病和高血脂等三高人群，表明CHD患者可表現(xiàn)為CD40和CD40L高表達(dá)，并與炎癥反應(yīng)引起的CRP升高以及冠狀動(dòng)脈病變所致的心肌損傷引起的cTnI升高變化趨勢基本一致，提示測定可溶性CD40和CD40L在CHD診治中具有明顯應(yīng)用價(jià)值。

CRP是心血管疾病獨(dú)立的危險(xiǎn)因子，也是心血管事件的預(yù)測因子；CRP還是心血管疾病危險(xiǎn)分層指標(biāo)，并作為心血管疾病治療的靶點(diǎn)。作為啟動(dòng)和調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答的主要介質(zhì)CD40及其配體CD40L，可上調(diào)多種促炎介質(zhì)水平，從而在動(dòng)脈粥樣硬化形成中起重要作用。在本資料中，sCD40和sCD40L水平在SAP患者中顯著低于ACS患者，差異非常明顯，表明血漿sCD40和sCD40L水平升高可能預(yù)示CHD患者病情進(jìn)展，有發(fā)生心肌梗死的風(fēng)險(xiǎn)，而測定CHD患者血漿sCD40和sCD40L水平可能有助于及時(shí)預(yù)測ACS的發(fā)生。然而進(jìn)一步分層分析結(jié)果顯示，血漿sCD40和sCD40L水平在不同的ACS患者中并無顯著差異，表明心肌缺血程度與血漿sCD40和sCD40L水平并無明顯關(guān)系。因此，以上結(jié)果提示sCD40和sCD40L水平可能與CHD患者冠狀動(dòng)脈血管炎癥活動(dòng)及血栓形成有關(guān)，而與炎癥活動(dòng)和血栓所致的血管狹窄程度無明顯關(guān)系，在SAP患者中sCD40和sCD40L水平與CRP濃度與cTnI濃度呈顯著正相關(guān)，而在ACS患者中并無顯著相關(guān)性，表明CD40和CD40L水平升高與CHD患者病情進(jìn)展并發(fā)ACS有一定關(guān)系，可能有助于ACS預(yù)測的指標(biāo)，但與ACS嚴(yán)重程度關(guān)系不大。分析其原因可能在于二者水平升高是基于白細(xì)胞、血小板等各種炎癥細(xì)胞活化增加而分泌增加，同時(shí)可誘導(dǎo)已存在粥樣硬化的冠狀動(dòng)脈血管不同程度的炎癥反應(yīng)，從而導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化斑塊活動(dòng)加劇、血栓不同程度形成而引起CHD病情進(jìn)展，而其炎癥程度增加導(dǎo)致CRP升高，而血栓形成加劇引起心肌缺血增加導(dǎo)致cTnI水平升高。因此，以上結(jié)果提示，CHD患者血漿sCD40和sCD40L水平越高，其發(fā)生ACS的可能性越高，二者水平可作為CHD進(jìn)展的判斷指標(biāo)。

進(jìn)一步的風(fēng)險(xiǎn)評估分析顯示，盡管單因素回歸分析顯示，sCD40和sCD40L均為ACS發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)指標(biāo)，但是多因素回歸分析卻表明僅sCD40L為CHD患者發(fā)生ACS的獨(dú)立危險(xiǎn)因子，進(jìn)一步提示測定血漿sCD40L水平有助于評估和預(yù)測ACS發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)。前述表明sCD40L水平與CHD嚴(yán)重程度關(guān)系密切，提示CD40L表達(dá)可能在CD40-CD40L復(fù)合體調(diào)節(jié)炎癥中起著主導(dǎo)作用，從而誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)、調(diào)節(jié)并參與炎癥過程。因此，測定血漿可溶性CD40L水平有助于及時(shí)預(yù)測CHD患者發(fā)生ACS的可能。

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