雞傳染性法氏囊病病毒檢測(cè)方法研究進(jìn)展

楊先富++廖飛++莫興虎++趙孝木

摘要：對(duì)雞傳染性法氏囊病病毒檢測(cè)方法研究進(jìn)展進(jìn)行了綜述。

關(guān)鍵詞：雞；傳染性法氏囊病病毒檢測(cè)方法；研究進(jìn)展

中圖分類號(hào)：S858.31 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B 文章編號(hào)：1007-273X（2016）09-0013-01

雞傳染性法氏囊病病毒（IBDV）屬于雙股雙節(jié)RNA病毒科雙股雙節(jié)RNA病毒屬，無囊膜，單層衣殼，二十面體對(duì)稱，直徑為55～60nm。IBDV分為2個(gè)血清型，血清I型對(duì)雞有致病性，而血清Ⅱ型無致病性。IBDV主要侵害雞的法氏囊等淋巴組織，破壞B淋巴細(xì)胞前體，使機(jī)體不能產(chǎn)生免疫球蛋白，引起嚴(yán)重的免疫抑制，使病雞對(duì)其他病毒、細(xì)菌及球蟲的易感性增高，因此了解并掌握本病毒的檢測(cè)方法在養(yǎng)雞業(yè)上有重要的意義。下面就近年來國內(nèi)外有關(guān)法氏囊病病毒檢測(cè)方法的研究進(jìn)展作一簡(jiǎn)要介紹。

1 病毒的分離與鑒定

傳統(tǒng)的方法是采取病雞的法氏囊或脾，研碎后加入滅菌的生理鹽水，制成1∶5～1∶10的混懸液，離心取上清液，青霉素、鏈霉素處理后，接種于法氏囊病陰性種雞或SPF群的9～11日齡雞胚的絨毛尿囊膜。雞胚常于3～5 d出現(xiàn)死亡，胚體充血、出血，肝有斑點(diǎn)狀壞死和出血斑。鑒定分離出來的IBDV可與陽性血清在雞胚或雞胚成纖維細(xì)胞培養(yǎng)中做中和試驗(yàn)，內(nèi)外一些學(xué)者直接用原代IBDV細(xì)胞培養(yǎng)方面開展很多工作。1994年陶素華等報(bào)道，在Vero細(xì)胞上，連續(xù)傳至第4代，接種后第5天出現(xiàn)明顯的致細(xì)胞病變作用，TCID50達(dá)10-9/mL以上。1995年日本學(xué)者kenji等篩選到禽淋巴肉瘤病雞的B淋巴細(xì)胞LSCC—BK3細(xì)胞株和與之配套的ELISA檢測(cè)方法，靈敏性比雞胚成纖維細(xì)胞（CEF）、雞胚腎細(xì)胞（CKC）和BGM一70細(xì)胞高，為大規(guī)模分離培養(yǎng)IBDV原代病毒找到了一種簡(jiǎn)便有效的細(xì)胞學(xué)方法。

2 抗原檢測(cè)

2.1 血清學(xué)方法

瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)（AGP）。1968年Wagner等首次運(yùn)用AGP試驗(yàn)檢測(cè)IBDV。此試驗(yàn)通常用病死雞的法氏囊或內(nèi)臟懸液，與IBDV標(biāo)準(zhǔn)陽性血清進(jìn)行AGP試驗(yàn)。Ajinkya等（1980）用IBDV標(biāo)準(zhǔn)陽性血清檢測(cè)IBD病雞的內(nèi)臟懸液，陽性率為100%。McNuhy等分離到野毒株與標(biāo)準(zhǔn)I型IBDV毒株都做AGP實(shí)驗(yàn)，結(jié)果兩者沉淀線形狀有差異，故提出用此法來鑒別病毒是否屬于變異毒株。趙云英等[1]也報(bào)道了，應(yīng)用血清學(xué)AGP試驗(yàn)結(jié)果可見明顯的白色沉淀線。甘輝群等[2]采用雞胚接種法從某發(fā)病雞群中分離出一株病毒，通過瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)等確定該病毒為傳染性法氏囊病病毒。

有學(xué)者在抗原的處理方面進(jìn)行了改進(jìn)，將3%PEG（聚乙二醇）加入到普遍AGP中制成改良的AGP，由于PEG具有濃縮、沉淀、純化病毒抗原的作用。因此能使病毒濃度大大提高，促進(jìn)抗原抗體復(fù)合物形成沉淀。試驗(yàn)證實(shí)了此法檢測(cè)IBDV的檢出率比常規(guī)AGP高出18.8%，同時(shí)在檢出的陽性病例中，用改良AGP比常規(guī)方法檢出IBDV抗原的滴度高出1～2個(gè)倍比滴度。AGP試驗(yàn)操作簡(jiǎn)單方便、無需昂貴的儀器，在臨床中應(yīng)用較多。但因敏感性較低，主要用于檢測(cè)血清中的抗體 在感染早期不能診斷出IBDV，與其他分子生物學(xué)方法相比有許多不足，應(yīng)用受到一定限制。

2.2 生物化學(xué)和分子生物學(xué)方法

聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）技術(shù)。PAGE技術(shù)是研究蛋白質(zhì)的一種重要方法，它主要是利用蛋白質(zhì)分子量的差異將不同的蛋白質(zhì)在電泳介質(zhì)中區(qū)分開，通過染色對(duì)目的蛋白作出鑒定。此法不僅可檢出病毒特異性蛋白，而且可以區(qū)分出毒株間的差異。國外眾多學(xué)者應(yīng)用本法對(duì)IBDV的特異性蛋白作了廣泛研究，利用PAGE技術(shù)可從IBDV中檢測(cè)到VP1～VP5五種主要蛋白，另外還可測(cè)出某些前體（即未加工成熟的）蛋白。其中VP1由病毒的小片段（B片段）基因組編碼，VP2～VP5均由病毒的大片段（A片段）基因組編碼。VP2和VP3是IBDV的主要結(jié)構(gòu)蛋白，分別占病毒蛋白總量的51%和40%，而VP1和VP4則分別只占3%和6%，VP5是新近發(fā)現(xiàn)的，其含量和功能目前還不清楚。

綜上所述，對(duì)IBDV診斷研究已取得了很多新的進(jìn)展，從目前來看，一些地方解決生產(chǎn)上的問題還是靠常規(guī)方法如病毒的雞胚分離、AGP檢測(cè)等。條件較好的地方采用了更加快速、靈敏的實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR技術(shù)進(jìn)行診斷，由于我國在IBDV方面已作了上述研究，具有了一定的研究基礎(chǔ)和經(jīng)驗(yàn)，因此我們認(rèn)為，我國在IBDV診斷技術(shù)研究方面將會(huì)取得更大進(jìn)展。

參考文獻(xiàn)：

[1] 趙云英，張燕欣，張文生，等. 一株雞傳染性法氏囊病病毒的分離鑒定[J]. 中國畜牧獸醫(yī)，2012，39（6）：207-211.

[2] 甘輝群，劉明生，管遠(yuǎn)紅. 一例雞傳染性法氏囊病病毒強(qiáng)毒株的分離與鑒定[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，40（1）：184-185.