PLCE1和RFT2表達與食管鱗狀細胞癌的相關性及對預后的影響

胡艷玲, 劉璐芬, 鄒 花

(湖北省京山縣人民醫院 病理科, 湖北 京山, 431899)

PLCE1和RFT2表達與食管鱗狀細胞癌的相關性及對預后的影響

胡艷玲, 劉璐芬, 鄒 花

(湖北省京山縣人民醫院 病理科, 湖北 京山, 431899)

目的 分析PLCE1和RFT2表達與食管鱗狀細胞癌的相關性及對預后的影響。 方法 選取90例食管癌患者，采用免疫組化SP法檢測食管鱗狀細胞癌組織中和癌旁正常食管組織中PLCE1和RFT2的表達，分析PLCE1和RFT2在食管鱗狀細胞組織及正常食管組織中的表達、PLCE1和RFT2的表達與臨床病理特征的關系以及PLCE1和RFT2的表達相關性。結果 PLCE1和RFT2在食管鱗狀細胞組織及正常食管組織中的陽性率分別為86.67%、16.00%及80.00%、18.00%, 差異有統計學意義(P<0.05); PLCE1和RFT2表達與食管癌臨床T分期、淋巴結轉移及腫瘤最長徑相關(P<0.05); 食管癌組織中的PLCE1與RFT2表達呈明顯正相關(rs=6.544 8,P<0.05)。結論 PLCE1和RFT2在食管鱗狀細胞癌中呈高表達，且與腫瘤最長徑、淋巴結轉移及臨床分期關系密切。

PLCE1; RFT2; 食管腫瘤; 鱗狀細胞癌

磷脂酶Cε1(PLCE1)為磷脂酶C家族中的一員，其具有較為復雜的分子結構和功能，其激活后可對細胞分化、生長、繁殖起調節作用，同時對細胞骨架的變化、細胞的凋亡以及腫瘤的生長發展等生物學行為產生影響[1]。核黃素轉運蛋白2(RFT2)是核黃素轉運蛋白家族中的重要一員，其作用主要是進行核黃素轉運轉。核黃素參與了生物發生氧化的過程中氫的傳遞，其主要功能是促進碳水化合物、脂肪、核酸以及蛋白質的代謝，且有研究[2]證明核黃素的缺失與腫瘤的發生以及發展具有密切的關聯。食道癌早期癥狀不顯著，就診時多為腫瘤中晚期，預后效果不佳，致死率較高[3-4]。本研究探討PLCE1和RFT2表達與食管鱗狀細胞癌的相關性及對預后的影響，現將結果報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2013年1月—2016年4月在本院接受手術治療的90例食管癌患者。入選標準[5]: 所有患者在手術前都沒有接受過放療和化療等抗癌治療，患者病理和臨床資料完整。入選患者中男68例，女22例，年齡≤45歲的患者有9例，年齡>45歲的患者有81例，平均年齡為(60.09±7.83)歲; 所有患者依據WHO(1977年)食管腫瘤分類標準給予組織學分類，其中低分化17例，中分化58例，高分化15例; 患者浸潤深度分期T1～T233例，T3～T457例; 腫瘤最長徑<3 cm 29例，最長徑>3 cm 61例。淋巴結發生轉移的患者有59例，未發生轉移的患者有31例。隨機選擇50例距離癌組織5 cm以上的正常食管黏膜組織進行對照，男39例，女11例，平均年齡為(58.72±8.46)歲。整個研究均已得到患者知情同意，并通過本院倫理委員會批準。

1.2 方法

采取免疫組化SP對所有食管鱗狀細胞癌患者的PLCE1和RFT2的表達進行檢測, PLCE1的工作液濃度是1∶100, RFT2的工作液的濃度是1∶200, PLCE1和RFT2表達檢測時，按試劑盒說明書進行操作。采用PBS代替I抗進行步驟陰性對照，并采用已確定的染色陽性切片進行陽性對照。主要試劑包括：羊抗人PLCE1多克隆，生產廠家為上海勁馬生物科技有限公司; 兔抗人RFT2多克隆抗體，該抗體的生產廠家是上海信裕生物科技有限公司; HRP標記的Ⅱ抗及DAB顯色試劑盒，由福州邁新生物技術開發有限公司生產。

1.3 觀察指標

觀察在食管鱗狀細胞癌組織中和癌旁的正常食管組織中PLCE1和RFT2的表達，分析PLCE1和RFT2的表達與年齡、性別、分化程度、T分期、淋巴結轉移、腫瘤最長徑等臨床病理特征的關系以及PLCE1和RFT2的表達的相關性。

1.4 結果判定

PLCE1的表達定位為細胞質, RFT2的表達定位為細胞膜或者細胞質，二者均為棕黃色，呈顆粒狀分布; 通過雙盲法獨立閱片，隨機在無邊緣效應和無組織折疊的典型部位選擇10個高倍視野, 1個視野計數細胞100個：陽性細胞超過75%則記為4分，陽性細胞在51～75%則記為3分，陽性細胞在26～50%則記為2分，陽性細胞在0～25%則記為1分，沒有陽性細胞為則記為0分; 根據多數陽性細胞的染色來進行著色強度計分：棕褐色則記為3分，棕黃色則記為2分，淡黃色則記為1分，無著色則記為0分。兩項得分相乘<3時，判斷為陰性; 兩項得分相乘≥3時，判斷為陽性; 采用Spearman相關性分析檢測PLCE1和RFT2的相關性[6-7]。

1.5 統計學分析

采用SPSS 17.0來統計分析，數據用均數±標準差表示，使用χ2檢驗和t檢驗來比較計數資料和計量資料,P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 比較PLCE1與RFT2在食管鱗狀細胞癌組織和癌旁的正常食管組織中的表達

結果顯示, PLCE1在食管鱗狀細胞癌組織的陽性率為86.67%(78/90), 在癌旁的正常食管組織中的陽性率分別為16.00%(8/50); RFT2在食管鱗狀細胞癌組織中的陽性率為80.00%(72/90), 在癌旁的正常食管組織中的陽性率為18.00(9/50); PLCE1和RFT2在食管鱗狀細胞癌組織中的陽性率均高于癌旁正常食管組織，差異有統計學意義(P<0.05)。

2.2 PLCE1表達和食管鱗狀細胞癌的臨床特征之間的關系

PLCE1的表達與腫瘤最長徑、食管癌臨床T分期以及淋巴結轉移相關(P<0.05), 與腫瘤分化的程度、患者年齡及性別無相關性(P>0.05), 見表1。

2.3 RFT2表達與食管鱗狀細胞癌臨床病例特征的關系

RFT2的表達與臨床特征中的腫瘤最長徑、食管癌臨床T分期以及淋巴結轉移相關(P<0.05), 與腫瘤分化的程度、患者年齡及性別無相關性(P>0.05), 見表2。

表1 PLCE1表達與食管鱗狀細胞癌臨床病理特征的關系

表2 RFT2表達與食管鱗狀細胞癌臨床病理特征的關系

2.4 PLCE1和RFT2表達在食管鱗狀細胞癌中的相關性

PLCE1和RFT2在食管鱗狀細胞癌組織中的表達為正相關(rs=6.544 8,P<0.05), 見表3。

表3 PLCE1和RFT2在食管鱗狀細胞癌中的相關性

3 討 論

食管癌分為兩種病理類型，一種是食管鱗狀細胞癌，一種是食管腺癌。據調查[8]顯示，在中國的食管癌患者中，大約90%的患者為食管鱗狀細胞癌。目前，手術治療是最主要的治療手段，化療及放療是常用的輔助治療方法，但常規化療或放療治療具有療效不佳，預后效果較差，且副作用大等缺點，經治療后的食管癌患者5年生存率只有20%左右[9]。食管癌從發生到發展，再到浸潤和轉移與多種因素相關。隨著分子靶向治療的效果開始在食管癌治療中的顯現，尋找有效的分子靶標成為了研究食管癌治療的熱點[10]。

PLCE1和RFT2在中國食管鱗狀細胞癌為易感基因已經得到研究證實[11]。PLCE1是屬于磷脂酶C家族，具有較為復雜的分子結構，包括特殊結構域和保守結構域。其中G蛋白能夠激活PLCE1的保守結構的磷脂酶活性，催化水解多磷酸肌醇，從而產生出二脂酰甘油、三磷酸肌醇[12]。而二脂酰甘油可致使蛋白激酶C的過度表達，導致靶蛋白的蘇氨酸殘基磷以及絲氨酸等發生酸化，調節機體代謝，三磷酸肌醇可以促進細胞質鈣離子的釋放，進一步結合蛋白激酶C, 調節立早基因表達及細胞增殖與分化，且PLCE1的特有結構域還可作為Ras家族的效應分子，參與到細胞、分化、繁殖，并參與到腫瘤的形成過程中[13]。RFT2是調節控制核黃素吸收和轉運的關鍵基因，其產物是核黃素轉運蛋白，具有將細胞外的核黃素轉運到細胞內的功能。核黃素是機體新陳代謝和生命活動不可缺少的存在。核黃素的缺失與食管癌具有密切的聯系，有動物實驗[14]表明，核黃素缺失可引起食管鱗狀上皮細胞受損，其結果與人類食管癌前病變類似。且有研究[15-18]證實，食管鱗狀細胞癌高發區的核黃素缺失較為明顯，補充核黃素能夠有效的減少食管鱗狀細胞癌的發生。

本研究通過研究PLCE1和RFT2表達與食管鱗狀細胞癌的相關性及對預后的影響，從而為食管癌分子靶向治療以及預后判斷提供生物學的依據。研究結果顯示, PLCE1和RFT2在食管鱗狀細胞癌中的表達均高于正常食管組織，由此提示食管鱗狀細胞與PLCE1與RFT2的表達有關，其過度表達可能導致食管鱗狀細胞癌的發病風險增大[19-20]。通過對PLCE1和RFT2表達與食管鱗狀細胞癌的臨床病例特征關系的分析可知, PLCE1和RFT2的表達與臨床病理特征中的腫瘤最長徑、食管鱗狀細胞癌的臨床T分期以及淋巴結轉移有關系，而與患者食管鱗狀細胞癌的分化程度、患者年齡以及性別沒有關聯，由此提示PLCE1和RFT2可作為食管鱗狀細胞癌的早期診斷指標和判斷預后指標[21-22]。且經過對PLCE1和RFT2二者表達的相關性分析，結果顯示二者呈現正相關的關系，但二者在食管鱗狀細胞癌中的具體作用機制還有待進一步研究。

綜上所述，本研究證實PLCE1和RFT2在食管鱗狀細胞癌中呈現出高表達，二者之間呈正相關，且PLCE1和RFT2表達與腫瘤最長徑、淋巴結轉移及臨床分期關系密切，由此可推測, PLCE1和RFT2的表達與食管鱗狀細胞癌的發生、發展具有較為密切的關聯，提示PLCE1和RFT2可作為食管鱗狀細胞癌早期診斷以及預后判斷的有效輔助指標，在腫瘤侵襲性的預測以及評估腫瘤的轉移可能性方面具有一定的參考價值。

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Correlation between PLCE1, RFT2 expressions and esophageal squamous cell carcinoma and their effects on prognosis

HU Yanling, LIU Lufen, ZOU Hua

(DepartmentofPathology,ThePeople′sHospitalofJingshanCounty,Jingshan,Hubei, 431899)

Objective To analyze the correlation between PLCE1, RFT2 expressions and esophageal squamous cell carcinoma and their effects on prognosis. Methods Ninety esophageal cancer patients were selected. Immunohistochemical SP method was used to detect PLCE1 and RFT2 expressions in esophageal squamous cell carcinoma and adjacent normal esophageal tissues, and correlation between PLCE1, RFT2 expressions and clinicopathological features as well as relationship between PLCE1 and RFT2 were analyzed. Results Positive rates of PLCE1 and RFT2 in esophageal squamous cell tissue and normal esophageal tissues were 86.67%, 16.00% and 80.00%, 18.00% respectively, and there were significant differences (P<0.05). PLCE1 and RFT2 expressions were correlated with esophageal clinical T stage, lymph node metastasis and the longest diameter (P<0.05). PLCE1 expression was positively correlated with RFT2 expression in esophageal cancer tissue (rs=6.544 8,P<0.05). Conclusion PLCE1 and RFT2 are highly expressed in esophageal squamous cell carcinoma, and are closely correlated with tumor maximum diameter, lymph node metastasis and clinical stages.

PLCE1; RFT2; esophageal cancer; squamous cell carcinoma

2016-11-09

湖北省衛生廳科研課題(1304568)

R 735.1

A

1672-2353(2017)01-037-04

10.7619/jcmp.201701011