獻血人員血液篩查中核酸檢測技術的應用

阿不都外力·阿巴拜克力，呂 萍

（新疆喀什地區中心血站檢驗科，新疆 喀什 844000）

獻血人員血液篩查中核酸檢測技術的應用

阿不都外力·阿巴拜克力，呂 萍

（新疆喀什地區中心血站檢驗科，新疆 喀什 844000）

目的 分析核酸檢測技術（NAT）應用于獻血人員血液篩查中的效果。方法 選取2014年12月～2016年11月本血站獻血者的血液標本1000例作為研究對象，利用酶聯免疫吸附法對全部研究對象實施相關檢測，分析檢測結果。結果 全部標本HBV/HCV/HIV-1聯檢初篩陽性標本有52份，NAT陽性且ELISA檢驗陰性有11份。鑒別檢驗聯檢初篩陽性標本HBV-DNA陽性2例，HIV-1RNA陽性1例，HCV-DNA陽性0例。結論 核酸檢測技術能夠有效減少獻血者感染窗口期和隱匿感染獻血導致的疾病傳播，提高輸血安全性。

獻血人員；血液篩查；核酸檢測技術

對獻血人員進行血液篩查，主要為了保證血制品安全、確保血液安全。檢測常用的方法是酶聯免疫吸附法（ELISA），其檢測得到的結果為抗原抗體，不過因為感染有較長的窗口期、病毒會發生變異，可能存在隱匿性感染，所以臨床輸血的安全仍無法足夠保證[1-2]。本研究主要分析核酸檢測技術應用于獻血人員血液篩查中的效果。

1 材料與方法

1.1 標本

選取2014年12月～2016年11月本血站獻血者的血液標本1000例作為研究對象。

1.2 試劑、儀器

Procleix TIGRIS System檢測系統（蓋立復醫藥咨詢公司）；Ultrio HIV-1/HCV/HBV檢測試劑及其配套的鑒別試劑。

1.3 方法

選取每名獻血者5 mL靜脈血放置在分離膠抗凝試管中，6小時內進行15分鐘離心處理，速度為3000 r/min，選取上清液放在2～8℃冰箱中保存，2天之內放到實驗室進行抽提、擴增以及檢測。測試步驟共分3個，第一，經特異性目標捕獲法從標本中將病毒核酸完成分離；第二，經TMA法擴增目標核酸片斷；第三，通過雜家保護法對擴增產物實施檢測。陽性標本經Procleix TIGRIS System檢測系統聯檢試劑檢測出來后，經乙型肝炎病毒（HBV）、丙型肝炎病毒（HCV）、人類免疫缺陷病毒1型（HIV-1）鑒別試劑開展鑒別，對導致反應的病毒進行分辨。鑒別試驗步驟等同于聯檢，聯檢陽性標本置入零下20℃的冰箱中保存，間隔一個星期開展一次鑒別試驗。

2 結 果

2.1 檢驗結果

全部標本HBV/HCV/HIV-1聯檢初篩結果為陽性的標本共有52份，NAT陽性且ELISA檢驗陰性的共有11份標本。鑒別檢驗聯檢初篩陽性標本，結果發現HBV-DNA陽性患者有2例（0.2%），HIV-1RNA陽性患者有1例（0.1），HCVDNA陽性患者有0例。11份為NAT陽性且ELISA陰性標本，諾華鑒別試劑鑒別率為55%左右，所以僅有6份標本具備鑒別結果。

2.2 HIV-1RNA陽性患者檢測情況

1份HIV-1RNA陽性標本的對應獻血者記錄顯示獻了400 mL全血，獻血后第二天利用ELISA方法檢測這一標本HIV抗體/抗原＋抗體都顯示陰性，核酸檢測HIV-1RNA結果都顯示陽性。一周后對該獻血者的全血標本進行再一次抽取，進行核算檢查結果仍然是陽性，ELISA檢驗顯示弱陽性。后該血液標本經免疫印跡法（WB）確診為疑似HIV-1陽性，最后經市疾控中心利用WB法確診為HIV-1陽性。

3 討 論

在血液檢驗中采取酶聯免疫吸附法法進行能夠對血液中的抗體以及抗原進行檢測，不過如果獻血者存在隱匿性感染或者在處于感染窗口期這一階段獻血，受血者在接受輸血后可能會出現肝炎病毒以及HIV感染[3]。國外有研究顯示，美國超過90%的由于輸血導致HBV以及HIV傳播感染的都是因為接受了窗口期患者血液。我國肝炎的發病率較高，HBsAg攜帶率較9%更高，HBV流行率超過60%。當前我國對獻血者進行篩查，了解其有沒有HBV感染，判定檢測結果依據的指標仍然是HBsAg，所以無法將隱匿性感染導致的漏檢或者HBV感染窗口期導致的漏檢完全消除[4]。

本組全部患者中檢出NAT陽性且ELISA 檢驗陰性的共有11份標本，另外有1例為ELISA檢測陰性且HIV-1RNA實際為陽性的獻血者，通過對該例獻血者進行隨訪，結果發現其為HIV感染窗口期典型患者。HIV酶免檢測試劑是第三和第四代的組合物，第四代試劑其窗口期雖然較第三代有了大約1個星期的縮短，不過依舊較NAT窗口期更大[5]。假設僅僅選擇ELISA法進行檢測，出現漏檢的可能性將會很大。該典型HIV感染窗口期患者獻血量為400 mL，依據常規情況，獻血將依據常規流程制備而成冷沉淀、血漿以及懸浮紅細胞血液制品共三類在應用給予應用，因此可能3名患者會受血，而這三名患者有可能在受血后出現HIV病毒感染。

NAT法檢驗血液的特異性以及敏感度高，能將感染窗口期最大程度縮短，因此能夠早期檢測感染，能夠有效降低輸血導致傳播疾病的可能。NAT血液檢測基本不會因為ELISA檢測制約因素而受到影響，所以結合ELISA、NAT兩種方法進行血液檢測互補性良好[6]。在對獻血者的血液進行篩查中選擇NAT技術，能夠保證滿意的篩查結果，使臨床用血安全得到有力保障。NAT檢測方法具體有多種，相較于其他集中，TMA檢測方法的優勢具體包括：（1）能夠在一支試管中對多個病毒進行同時檢測，并且檢測開始前不需要實施混養，檢測過程得到了明顯的簡化。（2）能夠將血液篩查的步驟減少，處理時間縮短，不需要對陽性標本進行繼續的拆分，因此能夠更迅速獲得檢驗結果。

不過綜合考慮來看，NAT檢測法并不能將ELISA檢測方法進行完全的取代，一方面是因為NAT方法對血液進行篩查用到的試劑成本比較高，并且檢測時要求比較嚴格的環境以及基礎設備配備。另一方面NAT方法對血液進行篩查無法將輸血傳染疾病的可能性徹底杜絕，檢測的靈敏度以及檢測系統的有效運轉對檢測結果會起到決定性作用。有研究結果顯示，假設感染標本的病毒載量較低，在利用NAT方法實施篩查時候漏檢的可能性很大，所以要求NAT試劑必須具有足夠的靈敏度。同時NAT檢測方法在操作步驟上復雜性較高，相較于ELISA檢測方法NAT檢測方法在管理模式以及人員培訓上差異否比較明顯，對操作人員具有非常高的技能要求，必須做好嚴格的預防污染工作，這樣才能夠防止標本之間發生交叉感染，或者防止擴增產物出現感染，另外NAT檢測方法必須對檢測進行全面的質量控制。

綜上所述，NAT對于血液篩查的應用價值明顯，臨床可以配合ELISA檢測方法一起使用，以保證最優的檢測結果。

[1] 藍文莉,謝敬文.廣州番禺地區開展核酸血液篩查的應用情況[J].中國輸血雜志,2015,28(4):430-432.

[2] 李莉華,馬印圖.核酸檢測技術應用于血液篩查的檢測效能分析[J].第三軍醫大學學報,2015,37(16):1692-1694.

[3] 彭小華,李麗平,歐陽剛,等.核酸檢測技術在血液篩查中的應用研究[J].中國輸血雜志,2015,28(6):717-720.

[4] 孫 波,劉術臻,程 聰,等.臨床輸血中輸血感染控制技術的發展[J].臨床輸血與檢驗,2015,17(6):572-574.

[5] 莫錦政,謝敬文,馬偉文,等.核酸檢測技術在獻血者HBsAg篩查中的意義[J].實用中西醫結合臨床,2015,15(6):61-62.

[6] 馬偉文,謝敬文,藍文莉,等.獻血者開展核酸檢測技術篩查的意義[J].遼寧醫學雜志,2016,30(2):50-51.

本文編輯：王雨辰

R446.6

B

ISSN.2095-8242.2017.15.2851.02