金銀花中黃酮類化合物的提取分離純化研究進(jìn)展

摘要：金銀花是常用中藥材，黃酮類化合物是金銀花中重要的活性物質(zhì)之一。通過查閱國內(nèi)相關(guān)文獻(xiàn)，分析、歸納、總結(jié)近年來金銀花中黃酮類化合物的提取分離純化方面的研究進(jìn)展，以期為金銀花的進(jìn)一步開發(fā)利用提供理論和技術(shù)參考。

關(guān)鍵詞：金銀花；黃酮類化合物；提取分離純化；研究進(jìn)展

中圖分類號：R932 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1674-1161（2016）08-0066-03

金銀花（Flos Lonicerae）為忍冬科植物忍冬的干燥花蕾或初開的花，具有清熱解毒、涼散風(fēng)熱、保肝利膽等功效，是我國傳統(tǒng)的藥食同源植物。近年來，隨著對金銀花研究的深入，人們發(fā)現(xiàn)金銀花中的黃酮類化合物具有較高的生物活性，如抗菌、抗病毒、增強(qiáng)機(jī)體免疫力、抗氧化及抗自由基、抗癌防癌和抑制脂肪酶等，并且無毒無害 。國內(nèi)對金銀花中黃酮類化合物的提取分離純化進(jìn)行了大量的研究。本課題在查閱收集大量文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上，綜述近幾年來金銀花中黃酮類化合物的提取分離純化等研究進(jìn)展，以期為未來的研究提供參考。

1 提取方法

1.1 溶劑提取法

溶劑提取金銀花中黃酮類化合物是較為傳統(tǒng)的提取工藝，按提取介質(zhì)分為水提法和醇提法，按提取的方式分為煎煮法和回流法。其中水提法成本低、操作簡單，但由于提取物中蛋白質(zhì)、多糖、鞣質(zhì)等雜質(zhì)比較多和提取液易發(fā)霉等原因，該法不常采用。目前較為常用的是醇提回流法，與水提法相比，該法提取時(shí)要耗用大量乙醇，加大生產(chǎn)成本，但是提取物中水溶性的雜質(zhì)少，且提取液不易發(fā)霉變質(zhì)，后期處理較方便[1]。

賈霖等人[2]通過單因素試驗(yàn)研究了乙醇體積分?jǐn)?shù)、浸提溫度、浸提時(shí)間和料液比對黃酮浸提量的影響。在此基礎(chǔ)上，選擇乙醇體積分?jǐn)?shù)、浸提溫度和料液比進(jìn)行正交試驗(yàn)，得到金銀花中黃酮類化合物的最佳提取工藝，即采用體積分?jǐn)?shù)為60%的乙醇，按照料液比1∶15（g/mL）在60 ℃下浸提4 h，最大提取率達(dá)到10.49%。沈玲玲等人[3]采用L9（34）正交試驗(yàn)，考察浸提劑濃度、料液比、浸提時(shí)間和操作溫度等因素對金銀花總黃酮提取效果的影響，結(jié)果表明，金銀花中總黃酮的最佳提取工藝為：40%乙醇為提取劑，采用料液比1∶20（g/mL）在80 ℃下提取3 h，得到金銀花葉中總黃酮單位浸出量為111.03 mg/g。韓娟等人[4]采用乙醇回流提取法，選擇乙醇的濃度、提取液加入量、提取時(shí)間、提取次數(shù)因素進(jìn)行優(yōu)化，以最終提取黃酮的質(zhì)量為參考指標(biāo)，經(jīng)優(yōu)化篩選確定：使用15倍量的50%濃度乙醇，提取2次，每次提取90 min為最佳工藝提取方案，10 g金銀花所得黃酮質(zhì)量為0.584 6 g。

1.2 超聲波輔助提取

超聲波輔助提取是在水浸提的同時(shí)加超聲波輔助，此法不僅可以縮短提取時(shí)間，提高提取率，同時(shí)可以避免高溫對有效成分的影響[5]。

羅磊等人[6]在乙醇體積分?jǐn)?shù)、提取溫度、液料比和超聲功率4個(gè)單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，通過二次通用旋轉(zhuǎn)組合設(shè)計(jì)試驗(yàn)優(yōu)化金銀花葉黃酮的超聲輔助提取工藝條件，結(jié)果表明，在乙醇體積分?jǐn)?shù)60%、液料比65∶1（mL/g）、提取溫度46 ℃、超聲功率250 W的條件下金銀花葉黃酮提取率最高，可達(dá)15.67%，與模型預(yù)測值相符。吳昊[7]研究了超聲—微波協(xié)同萃取金銀花黃酮與綠原酸的最佳工藝條件，在單因素的基礎(chǔ)上通過正交試驗(yàn)對其提取工藝條件進(jìn)行了優(yōu)化，結(jié)果表明：最優(yōu)提取工藝條件為料液比1∶20（W/V）、微波功率300 W、乙醇濃度60%、提取時(shí)間5 min，此時(shí)金銀花黃酮的得率為13.93%，綠原酸的得率為7.02%。李帥等人[8]以金銀花為原料，以總黃酮得率為指標(biāo)，在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上分析了超聲時(shí)間、超聲功率、乙醇濃度、液料比4個(gè)因素對總黃酮得率影響，結(jié)果表明，最佳提取條件為超聲功率900 W、提取時(shí)間40 min、料液比1∶40、乙醇體積分?jǐn)?shù)80%，在此條件下金銀花中黃酮得率為6.26%。

1.3 微波輔助提取

微波輔助提取是在水浸提的同時(shí)加入微波，與傳統(tǒng)的水浸提法相比，微波輔助提取具有選擇性高、操作時(shí)間短、溶劑消耗小、有效成分收率高的特點(diǎn)。

李菁等人[9]以總黃酮含量為考察指標(biāo)，在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上，采用L9（34）正交試驗(yàn)法，對料液比、微波功率、提取溫度、提取時(shí)間等條件進(jìn)行優(yōu)化，篩選出微波輔助提取的最佳工藝條件為：料液比1∶10、微波功率500 W、提取溫度50 ℃、提取時(shí)間20 min。高岐[10]利用微波快速提取金銀花中黃酮類化合物，采用正交試驗(yàn)優(yōu)化試驗(yàn)條件，考察微波提取時(shí)間、微波功率和料液比3個(gè)因素對金銀花中黃酮類化合物提取的影響，確定了微波法提取金銀花中黃酮類化合物最佳的工藝條件。與傳統(tǒng)的回流法進(jìn)行比較，該法具有提取效率高、時(shí)間短、操作方便及便于推廣普及等優(yōu)點(diǎn)，亦可借鑒于其他樣品的提取分析。

1.4 酶輔助提取

謝威等人[11]采用單因素試驗(yàn)考察了酶種類和加入量、攪拌速度、提取溫度、金銀花葉粉末粒度、提取時(shí)間等因素對黃酮提取率的影響，采用正交試驗(yàn)獲得在復(fù)合酶存在下提取金銀花葉中黃酮的最佳試驗(yàn)條件，并用常規(guī)動(dòng)力學(xué)模型進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果表明，復(fù)合酶的加入有利于金銀花葉中黃酮的提取，其最佳條件為80 ℃、纖維素酶和果膠酶各0.06 g、攪拌速度800

r/min、提取時(shí)間40 min。當(dāng)提取溫度低于353 K，常規(guī)提取受動(dòng)力學(xué)控制；若提取溫度高于353 K，則過程將不再受動(dòng)力學(xué)控制。

1.5 其他提取方法

除了以上常用的提取方法外，也有很多研究采用了其他提取技術(shù)，如超臨界二氧化碳提取、β-環(huán)糊精輔助提取、雙水相體系協(xié)同超聲提取、超高壓法提取等[12-15]，均取得了較好的提取效果。

2 純化方法

目前，關(guān)于金銀花中黃酮類化合物分離純化的研究較少，在已有研究中，大都采用大孔樹脂柱色譜進(jìn)行分離純化。

2.1 大孔樹脂柱色譜法

徐清萍等人[16]考察了XAD-16，AB-8，D101，HP-20，NKA-9，HZ841和聚酰胺7種樹脂對金銀花黃酮的動(dòng)、靜態(tài)吸附解吸情況，結(jié)果表明，采用NKA-9分離后金銀花總黃酮的含量最高，達(dá)到70.05 g/100 mg；其次為HZ841，分離后黃酮含量達(dá)到58.35 g/100 mg。從吸附量和解吸率考慮，XAD-16具有較好的效果，靜態(tài)飽和吸附量為31.16 mg/g樹脂，解吸率87.78%；動(dòng)態(tài)飽和吸附量為20.71 mg/g樹脂，解吸率100.00%。經(jīng)XAD-16分離后的黃酮含量達(dá)到57.34 g/100 mg。陳莉華等人[17]從金銀花葉莖藤中提取總黃酮，并用D-101大孔吸附樹脂進(jìn)行純化，結(jié)果表明，D-101樹脂對金銀花葉莖藤總黃酮分離純化的最佳工藝參數(shù)為：上樣液黃酮濃度0.538 mg/mL，靜置吸附時(shí)間80 min，料液比1∶5（g/mL），pH值2，流速2 mL/min，以60 mL 75%的乙醇溶液洗脫，黃酮解吸率為94.50%，純化后黃酮純度為84.5%，是粗提液黃酮含量（16.8%）的5倍。王麗婷等人[18]以產(chǎn)品得率、黃酮得率和黃酮含量為指標(biāo)考察最佳工藝條件，結(jié)果表明，黃酮粗品拌料與大孔樹脂質(zhì)量比為1∶6，裝入柱徑與柱長比為1∶6的層析柱中，用2倍柱體積的蒸餾水沖洗，再用70%乙醇以最大流速洗脫，收集2～8倍柱體積的洗脫液，濃縮后得到黃酮產(chǎn)品，得率為4.40%，含量可達(dá)91.7%。

2.2 聚酰胺柱色譜法

郝鳳霞等人[19]采用乙醇超聲波法提取、聚酰胺柱層析法分離的方法對金銀花中的綠原酸和黃酮進(jìn)行提取分離，結(jié)果表明，聚酰胺柱層析法分離、梯度洗脫得到綠原酸、水溶性黃酮和脂溶性黃酮3種不同產(chǎn)品A，B，C，其中，產(chǎn)品B總黃酮含量為95.0%，得率為1.12%；槲皮素和木犀草素存在于產(chǎn)品C中，含量分別為7.5%和16.9%，可進(jìn)行二次柱色譜，逐步提高木犀草素含量。

3 結(jié)語

金銀花是一類傳統(tǒng)的中藥材，具有較高的藥用價(jià)值和保健價(jià)值，而黃酮類化合物又是金銀花中的有效成分，所以開展黃酮類化合物的提取、分離純化等方面的研究，對于金銀花資源的進(jìn)一步開發(fā)利用具有重要的意義。

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（上接第67頁）

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Abstract： Flos Lonicerae is a common Chinese medicinal material， and flavonoids compounds is considered as one of the important active ingredient in Flos Lonicerae. By referring to concerning documentations in China we analyzed， concluded and summarized the research progress on extraction separation and purification of flavonoids compounds in Flos Lonicerae in recent years， so as to provide theoretical and technical reference for the further research on Flos Lonicerae.

Key words： Flos Lonicerae； flavonoids compounds； extraction separation and purification； research progress