亞麻籽油和橄欖油影響妊娠期糖尿病產婦和新生兒T細胞功能體外研究

(開封市婦幼保健院，河南 開封 475000)

妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus,GDM)是導致妊娠期高血壓的主要原因之一，主要是指妊娠期間發生或者首次發生的不同程度的葡萄糖不耐受，但不排除妊娠前存在糖代謝異常的可能[1]。妊娠期糖尿病與產后糖尿病發生率增高相關，且導致新生兒呼吸窘迫綜合癥和巨大胎兒等并發癥增加[2,3]。妊娠期糖尿病發病機理未闡明，脂肪酸代謝與妊娠期糖尿病或胰島素抵抗等相關研究是一大研究熱點[4,5]。游離脂肪酸是孕婦和新生兒重要的能量物質，其水平可能影響胰島分泌功能。本研究旨在通過檢測妊娠期糖尿病產婦和新生兒的T細胞功能，以及體外給予亞麻籽油和橄檻油處理，從營養學角度闡述亞麻籽油(Linseed oil)和橄欖油(olive oil)對于妊娠期糖尿病的產婦和新生兒的T細胞增殖以及IL-2和IL-4分泌水平，為臨床上妊娠期糖尿病飲食指導提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

抽取41例妊娠期糖尿病產婦和新生兒，以及40例正常產婦和新生兒的靜脈血各10 mL，肝素抗凝后加Hank’s液稀釋，用淋巴細胞分離液進行密度梯度離心，吸取上中層淋巴細胞層。待處理。

1.2 T細胞體外培養

T細胞采用Histopaque 1077(Sigma, Aldrich)試劑盒進行體外提取后用含有小牛血清的1640培養基進行體外培養48 h，培養條件37℃，5% CO2。刀豆蛋白A(Con A, Sigma)刺激T細胞增殖。亞麻籽油和橄欖油的終濃度是30μM。

1.3 MTT法

細胞以5000個/孔的密度種植于96孔板內，當細胞生長融合達70%時，給予細胞相應處置，細胞轉染48 h后給予相應藥物處理，若無需轉染直接用藥物處理24 h，然后進行檢測。為了避免藥物處理時間過長導致混雜因素過多，藥物處理時間不超過24 h。藥物處理時間達到預定時，每孔加入10μL MTT，在37℃孵育4 h，終止培養。棄掉孔內液體，避光條件下加入200 μL二甲基亞砜，放置搖床晃動10 min使結晶物充分溶解。用酶標儀于490 nm波長處測定各孔的吸光度值，并記錄結果。

1.4 ELISA法

T細胞體外培養48 h后，收集細胞上清液，1 500 rpm離心10 min，按照ELISA試劑盒(R&D System, Oxford, UK)進行操作分別檢測IL-2和IL-4。

1.5 統計學方法

2 結果

2.1 基本特征

妊娠期糖尿病產婦和正常產婦的基本特征，年齡、母體孕前BMI、妊娠周數、5 min評分、新生兒出生性別、母體孕期甘油三酯、母體孕期膽固醇兩組差異無統計學意義(P>0.05)。新生兒出生體重在妊娠期糖尿病組高于正常組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 正常和妊娠糖尿病的產婦生產情況及血脂狀態

注：1)與正常組比較，P<0.05

2.2 妊娠期糖尿病和正常組產婦及新生兒體外T細胞增殖水平

刀豆蛋白A具有刺激T細胞增殖作用，體外提取的妊娠期糖尿病和正常組產婦和新生兒的T細胞，在刀豆蛋白A刺激下檢測其T細胞增殖水平。妊娠期糖尿病的產婦和新生兒兩者的T細胞增殖水平低于正常組的產婦和新生兒，差異具有統計學意義(P<0.05)。體外處理給予胰島素后，妊娠期糖尿病的產婦和新生兒T細胞增殖水平有所上升，但與對應的正常組產婦和新生兒的T細胞增殖水平有統計學差異(P<0.05)。亞麻籽油降低各組的T細胞增殖水平，妊娠期糖尿病的產婦和新生兒的T細胞增殖水平與正常組之間無顯著性差異(P>0.05)。而橄欖油卻能反向刺激T細胞增殖，但其水平仍低于正常組的產婦和新生兒(P<0.05)，效果與胰島素相似。見圖1。

圖1 正常和妊娠期糖尿病的產婦及新生兒T細胞增殖水平

2.3 妊娠期糖尿病和正常組產婦與新生兒的IL-2和IL-4分泌水平

刀豆蛋白A具有刺激T細胞增殖作用，體外提取的妊娠期糖尿病和正常組產婦和新生兒的T細胞，IL-2分泌水平代表Th1細胞功能，IL-4分泌水平代表Th2細胞功能。妊娠期糖尿病的產婦和新生兒兩者的IL-2分泌水平低于正常組的產婦和新生兒，差異具有統計學意義(P<0.05)。

體外處理給予胰島素后，提高妊娠期糖尿病的產婦和新生兒IL-2分泌水平，但與對應的正常組產婦和新生兒的IL-2分泌有統計學差異(P<0.05)。亞麻籽油降低各組的TIL-2分泌水平，妊娠期糖尿病的產婦和新生兒的IL-2分泌水平與正常組之間無顯著性差異(P>0.05)。而橄欖油卻能反向刺激IL-2分泌，但其水平仍低于正常組的產婦和新生兒(P<0.05)，效果與胰島素相似，見圖2。而IL-4在妊娠期糖尿病的產婦和新生兒與正常組的產婦和新生兒分泌水平無統計學差異(P>0.05)，僅胰島素處理能增加妊娠期糖尿病和正常組產婦T細胞的IL-4分泌水平，而亞麻籽油和橄欖油均無影響IL-4分泌作用，見圖3。

圖2 正常和妊娠糖尿病的產婦及新生兒體外油脂刺激的IL-2分泌水平

圖3 正常和妊娠糖尿病的產婦及新生兒體外油脂刺激的IL-4分泌水平

3 討論

妊娠期糖尿病指妊娠期間發生或者首次發生的不同程度的葡萄糖不耐受，但不排除妊娠前存在糖代謝異常的可能[1]。妊娠期糖尿病發病機理未闡明，脂肪酸代謝與妊娠期糖尿病或胰島素抵抗等相關研究是一大研究熱點[4]。游離脂肪酸和葡萄糖作用相似，是孕婦和新生兒重要的能量物質，其水平可能影響胰島分泌功能。有關游離脂肪酸和外源性亞麻籽油與橄欖油等對于妊娠期糖尿病的發生發展作用存在一定的爭議。脂肪酸在口服葡萄糖耐量過程中起到一定調控作用，在II型糖尿病和妊娠期糖尿病均有所體現[5]。飲食中的短鏈脂肪酸和ω-3通過GLP-1和PYY分泌調控其代謝[2]，過氧化基、鈣離子下調和Fox-3的調控與脂肪酸代謝維持糖代謝穩態相關[3]。

本研究中亞麻籽油降低娠期糖尿病產婦和新生兒與正常產婦和新生兒的T細胞增殖水平和IL-2，妊娠期糖尿病的產婦和新生兒的T細胞增殖水平與正常組之間無顯著性差異(P>0.05)。而橄欖油卻能反向刺激T細胞增殖和IL-2，但其水平仍低于正常組的產婦和新生兒，效果與胰島素相似。IL-4分泌水平不受亞麻籽油和橄欖油的影響。

總之，橄欖油具有胰島素樣作用升高妊娠期糖尿病產婦和新生兒的T細胞增殖和IL-2分泌水平，而亞麻籽油相反。從營養學角度給予妊娠期糖尿病孕婦飲食指導改善T細胞功能，為臨床上妊娠期糖尿病飲食指導提供理論依據。

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