HPLC測定雙黃連口服液中連翹苷的含量

劉愛華

哈藥集團三精制藥有限公司 150000

HPLC測定雙黃連口服液中連翹苷的含量

劉愛華

哈藥集團三精制藥有限公司 150000

目的：通過 HPLC的方法來對雙黃連口服液的連翹苷成分進行準確地測定。方法：使用 HPLC法進行測定。結果：在0.187ˉ0.876μg的范圍內，連翹苷的現行關系比較好，平均回收率能夠達到97.8%，RSD=1.6%。結論：HPLC方法用于檢測雙黃連口服液的連翹苷的成分的數值比較準確，操作方法相對比較簡單，是一種可行的檢測方式。

雙黃連口服液；連翹苷；HPLC

雙黃連這種藥品是一種極為常見的藥品，其藥品狀態類型比較豐富，既有口服液又有膠囊，其中口服液在我國的藥品市場中存在的時間比較長，口服液中含有黃岑、金銀花以及連翹等中藥藥材，能夠有效地清熱解毒，緩解感冒，并且有較為明顯的治療效果，屬于一種我國的常用中成藥。為了保證雙黃連口服液的藥品質量，本文對其成分中的連翹苷進行測定，現有實驗過程如下：

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

高速液相色譜儀、紫外線檢測器、數據處理器、色譜柱、雙黃連口服液、連翹苷的對照藥品，將甲醇作為色譜純，實驗用水均為重度蒸餾水，其他的所有實驗中用到的試劑作為分析純。

1.2 方法

在進行色譜系統的條件以及適用性的檢驗時，需要用鍵合性的硅膠作為實驗的填充劑，流動相需要乙腈與水，其中乙腈占總體流動相的四分之一，水占總體流動相的四分之三，流速為每分鐘 1毫升，進行檢測的波長為276nm，從理論上來看連翹苷的處于波峰處的數值應當高于或等于3000。

進行實驗的對照品的制備時，需要將已經準備好的連翹苷稱取15毫克，稱取方法要保證準確性，首先將試樣的連翹苷放置在五氧化二磷的真空環境下進行干燥，干燥的時間為一天，采取經歸法對其含量進行測定，測出含量為 97.53%，將這些連翹苷放置在容量為150毫升的棕色容量瓶中，再適當地加入濃度為50%的甲醇，使用超聲波的方式對其進行溶解，溶解后再放入到較冷的環境中，不斷地對其進行加水稀釋，直到達到刻度，再將棕色容量瓶搖晃均勻，將這個藥品作為對照性的藥品。

進行實驗的供試品制備時，需要通過精密吸取的方法取得雙黃連口服液 5毫升，通過實驗室的蒸發作用，使液體便感，再將其放置在中性的氧化鋁的實驗柱上，使用濃度為 70%的乙醇幫助口服液進行洗脫，再對洗脫后的溶液進行收集，使其逐漸濃縮，直到變干。洗脫后得到的殘渣還需加入濃度為 50%的甲醇進行溶解，溶解完成后將混合溶液轉移到容量為10毫升的實驗量瓶中，不斷對其進行稀釋并搖勻，通過微孔型的濾膜進行過濾，就得到了可以進行測定成分的供試品。

測定雙黃連口服液的連翹苷的含量時，要采取精密吸取的吸取方式吸取10μl供試品溶液以及對照藥品，將其加入到高速液相色譜儀，通過峰面積的方法以及外標法計算其含量，進行 3批數據的測定，多次試驗可以保證其測量結果相對比較穩定。

精密吸取“1.2.2”項下對照品溶液5、10、15、20、25 ml，分別置25 m1量瓶中，加50%甲醇，振搖，用50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45μm）濾過，依次吸取10μl進樣。每一濃度進樣2次，求峰面積平均值，以連翹苷峰面積平均值為縱坐標。

取處方中除連翹以外的其他藥材，按本品制法制得連翹陰性樣品，然后按“1.2.3”項下方法制得陰性供試溶液，進樣測定。

精密吸取連翹苷對照品溶液，重復進樣6次，每次10μl，測定峰面積值。

取同一批號樣品5份，分別按1.2.4”項下方法測定樣品中連翹苷。加樣回收率試驗 分別精密吸取已知含量的樣品5份，每份3 ml，分別加入“1.2.2”項下對照品溶液5 ml，按“1.2.4”項下方法測定含量，再計算加樣回收率。

2 結果

通過測定供試品以及對照品的連翹苷含量后得到的數值分別為0.158、0.145/0.157mg。m l-1。

連翹苷進樣量（μg）為橫坐標，繪制標準曲線，線性回歸得回歸方程：Y= 7.370×106X+ 5.259× 105（r= 0.9991）。結果表明，連翹苷在0.187～ 0.876μg范圍內的線性關系良好。

RSD=1.20%（n= 6）。表明儀器精密度良好。平均含量為 0.155 mg·ml- 1，RSD= 1.77%，表明分析方法精密度良好。

3 討論

HPLC法測定雙黃連口服液中連翹苷的含量，簡便、快速、重復性好，可供修訂雙黃連口服液質量標準時參考。當制備供試溶液時，采用氧化鋁柱進行供試品的前處理，能有效地除去干擾雜質；氧化鋁柱的凈化回收率均超過 98.0%。說明用氧化鋁進行前處理效果較好。

實驗表明待測成分的飽和流出體積主要受溶液極性的影響，而與其濃度無明顯相關性，因為微柱固相萃取相當于一個連續進樣的過程。曾將雙黃連口服液稀釋為含 30%的甲醇的溶液作流出曲線，結果連翹苷在近20mL時才達到流出平衡，改為含40%的甲醇較為合適，有利于連翹苷的平衡流出和弱極性雜質的除去。將供試品濃縮再用甲醇提取或用正丁醇萃取處理制備的色譜圖與本法所得色譜圖比較，雖在前端均較干凈，但在此色譜條件下皆對連翹苷的分離無影響，即 RP-SPE法制備供試品溶液較簡便實用。3.3 因無本品陰性對照樣品，缺其陰性對照圖譜；用 BECKMAN高效液相色譜儀及其 508型二極管陣列檢測器測定對照品溶液和供試品溶液的連翹苷色譜峰，結果在波長 200～ 235nm范圍內兩者的光譜相似性為0.9967，表明本法所分離的連翹苷色譜峰為單一峰，無其它雜質干擾。3.4 從測定結果來看，在不同品牌樣品之間和同一品牌的不同批號樣品之間，連翹苷的含量差異較大，這可能與藥材質量不穩定有關，但均遠小于按藥典中規定連翹含連翹苷的最低含量 0.15%與雙黃連口服液處方含連翹 750（g·（1000mL）- 1）推算的最低含量 11.25（mg·支- 1），因而有必要在質量標準中增加對連翹苷含量的控制。

在流動相為甲醇-水（40∶60）時，黃芩苷無可檢測的色譜峰，但在多次進樣后會抬高基線，影響連翹苷的測定，還會使柱壓不斷增加；將流動相改為甲醇-水-冰醋酸（40∶ 60∶ 1）后，連翹苷色譜峰提前，其后出現黃芩苷色譜峰，表明流動相中加入冰醋酸可避免黃岑苷等成分在分析柱上填積而使柱壓升高和造成基線不穩。

雙黃連口服液是一種能夠有效治療外部感冒傷風引起的頭疼、腦熱等癥狀的藥品，口服液比膠囊更加容易進行吞咽，因此也受到了我國患者的廣泛歡迎，一般雙黃連口服液能夠緩解咳嗽、發熱、咽痛等病癥，并且與其他復合型的重要相比，效果更快，這要得益于其成分中的各種優質的中藥材，連翹苷發揮了重要的作用，連翹苷是木犀科的中藥連翹的提取物，將連翹生長出的干燥果實進行提取，就可以成功地提取到一定數量的連翹苷，一公斤的連翹可以提取出3%的連翹苷，連翹苷可以有效地發揮起解除毒素，緩解發熱，消除腫痛的藥效，因此可知雙黃連口服液中的連翹苷對其總體藥效有著較大的影響。連翹苷這種中藥材所具備的功效要遠遠超出雙黃連口服液本身，即使發生丹毒也可通過連翹苷進行治療。另外連翹苷的服用方式也比較多，既可用于藥用，制成如雙黃連口服液這種藥品，也可直接用水來進行煎制，用途十分廣泛。

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R591.42+2

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1672-5018（2017）02-019-1