高效液相色譜法測定藥用輔料苯甲醇中苯甲酸和苯甲醛的含量

徐輝

摘 要：目的：采用高效液相色譜法對苯甲醇中所含有的苯甲酸以及苯甲醛的含量進行檢測，苯甲醇主要應用在藥用輔料中。方法：選取Acclaim120C18柱，規格為4.6mm×250mm，5μm，乙腈-0.02%甲酸作為流動相，使用氨水對pH進行調節，使其達到4.5，比例為30∶70，流速是1.0mL·min-1，所檢測的波長為230nm，將柱溫控制在35℃，此時的進樣量是20μL。結果：結果顯示當苯甲酸在0.5006與15.02μg·mL-1之間時，能夠與峰面積達到良好的線性關系，并且平均回收率在100%以上，RSD的平均值小于1.3%，其中n=3；當苯甲醛在0.5052與15.16μg·mL-1之間時，能夠與峰面積達到良好的線性關系，并且平均回收率在108%以上，此時的RSD平均值小于1.15%，其中n=3。結論：采用高效液相色譜檢測的方法具有較高的準確性，將其應用在苯甲酸以及苯甲醛的含量檢測過程中具有良好的效果。

關鍵詞：高效液相色譜法；苯甲醇；苯甲酸；苯甲醛

中圖分類號：R927 文獻標識碼：A

通常情況下，苯甲醇都是當作藥用輔料使用的，主要是在藥膏或者藥液中應用比較廣泛，可以有效防止藥膏或者藥液變質。想要對其質量進行有效的控制，主要采用了高效液相色譜法進行苯甲醇的檢測。

1.儀器與試藥

LC-30A超高效液相色譜儀（SPD-M20A二極管陣列檢測器、LC Solution色譜數據工作站，島津公司）；ML204分析天平（Mettler Teledo，精度：萬分之一）。苯甲酸、苯甲醛對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號分別為100419-201302、111650-200802，使用前不需干燥處理，含量分別為100%、99.7%）；乙腈為色譜純（默克公司）；水為自制超純水；其余所需化學試劑均為分析純。

2.方法與結果

（1）色譜條件。色譜柱：Acclaim120C18（4.6mm× 250mm，5μm）；流動相：乙腈-0.02%甲酸溶液（用氨水調至pH=4.5）（30∶70）；流速：1.0mL·min-1；檢測波長：230nm；柱溫：35℃；進樣量：20μL。（2）溶液的配制和測定方法。首先對對照品的溶液進行制備，適量的選取苯甲酸與苯甲醛的對照品，將其放入流動相中進行溶解，并且加以稀釋，直到每mL中含有0.5mg的對照品儲備液為止。緊接著稱取對照品儲備液1mL，將其放入容積為50mL的量瓶中，使用流動相進行稀釋，以達到要求的刻度，均勻的搖勻以后得到苯甲酸以及苯甲醛的混合對照品溶液10μg。其次是對供試品的溶液進行制備，先取樣品25mg，加以精密的稱量以后，將其放入容積為25mL的棕色量瓶中，向其中加入適量的流動相進行溶解并且經過均勻的稀釋以后達到相應的刻度，將其搖勻以后得到供試品溶液。（3）專屬性與系統適應性試驗。對專屬性以及系統適應性進行實驗的過程中，先準備好適量的空白溶劑、混合對照品溶劑若干，分別對其進行稱量，保證達到20μL，然后放入液相色譜儀器中檢測，檢測結果表明苯甲醛與苯甲醛以及苯甲醇在理論塔板數上都超過了15000，并且相互譜峰滿足基線分離的要求，從峰形的角度來看，效果理想。（4）線性關系。經過對對照品儲備液的精密稱量，在其中加入適當的流動相以后可以稀釋稱為不同的溶液，滿足實驗標準的相關要求，從標準溶液中稱量出適量的試液，為20μL，同樣將其注入進液相色譜中進行檢測，通過色譜圖顯示出來的內容將苯甲酸還有苯甲醛濃度計算出線性回歸，結果顯示具有良好的線性回歸關系。（5）檢出限與定量限。選取2.4項下的最小濃度溶液進行進樣，并且對進樣的體積加以適當的調整，當SIN為3時，對苯甲酸以及苯甲醛的檢出限進行分析，結果分別是0.41ng以及2.10ng，當SIN為10時，對苯甲酸以及苯甲醛的定量限進行分析，結果為1.38ng以及7.01ng。

3.討論

綜上所述，本文主要以乙腈-乙酸銨溶液為系統，發現苯甲醛以及苯甲醛出現了明顯的拖尾現象，并且基線存在較大的波動，無法達到理想的分離效果，同時又對乙腈-0.02%甲酸（30∶70）進行了考察，結果顯示分離效果良好，基線具有平整性的特點，所以最終選擇乙腈-0.02%甲酸（30∶70）作為流動相。在此基礎上使用氨水對0.02%的甲酸酸堿值進行調節，對苯甲酸、苯甲醛以及苯甲醇的影響進行分析，結果顯示苯甲酸與苯甲醇在pH為4.0時，分離效果不理想，當pH在5.0時，存在明顯的峰拖尾現象，并且峰形呈現不對稱性，當pH為4.5時，對稱因子與1最為接近，分離度能夠超過1.5，并且基線相對比較平滑，因此最終選擇了乙腈-0.02%甲酸（30∶70）作為流動相。在對波長進行選擇的過程中，先選取適當的甲醇樣品適量，將其置于25mL的量瓶之中，在量瓶中再加入適量的苯甲酸以及苯甲醛對照品，在其中加入流動相進行溶解，直到稀釋到相應的刻度上，均勻的搖晃，精密的稱取20μL后將其注入進液相色譜儀中準備檢測，采用3D圖的形式對兩種成分進行觀察，結果兩種成分在峰形為400nm～200nm時觀察分離度以及相應值等情況，結果顯示在230nm時能夠達到最大的吸收波長，以此作為測定波長，該測定波長符合百分比的特點，具有同等的百分比關系，在基線表現的方面具有平滑性的特點。通過本文的試驗結果顯示，如果將其用作普通劑型，那么應該確保苯甲醛的含量在1.5%以下，苯甲酸的含量為0.1%以下。如果應用在注射時，那么苯甲醇中苯甲酸的含量應該控制在0.05%以下，苯甲醛的含量應該控制在0.05%以下。

參考文獻

[1]孫占松.國內苯甲醇生產及應用分析[J].精細與專用化妝品，2012，20（12）：12-14.