RP—HPLC法測定復方威麥靈膠囊中巖白菜素的含量

朱正華++保花艷++羅敏

【摘要】目的：建立反相高效液相色譜法（RP-HPLC）測定復方威麥靈膠囊中巖白菜素含量的方法。方法：采用ODS HYPERSIL C18色譜柱（250mm×46mm，5um）；以乙腈-水（15∶85）為流動相，流速為10mL/min；柱溫：30℃；檢測波長：275nm。結果：巖白菜素濃度在209～2094μg范圍內與峰面積呈良好線性關系，r=09998，平均回收率為9880%（RSD為065%）。結論：本方法操作簡單，結果準確可靠，可用于復方威麥靈膠囊中巖白菜素的含量測定。

【關鍵詞】復方威麥靈膠囊；巖白菜素；反相高效液相色譜法

【中圖分類號】R914【文獻標志碼】 A【文章編號】1007-8517（2017）04-0027-03

Determination of Bergenin in Compound Wei Mailing Capsules by RP-HPLCZHU ZhenghuaBAO HuayanLUO Min

Yunnan qujing city food and drug inspection test center，Qujing 655000，ChinaAbstract：Objective To establish high performance liquid chromatography（HPLC） determination of bergenin in compound Wei Mailing capsulesMethod The determination was performed on ODS HYPERSIL C18（250mm×46mm，5μm）column with mobile phase consisted of acetonitrile-water（15∶85，V/V）at the flow rate of 10 ml/min The column temperature was 30 ℃，and the detection wavelength was set at 275nmResults The linear range of bergenin were 209～2094 μg（r=09998）with an average recovery of 9880%（RSD=065%）.Conclusions The method is simple， the result is accurate and reliableIt can be used for the determination of bergenin in compound Wei Mailing capsules

Keywords：Compound Wei Mailing Capsules； Bergenin；RP-HPLC

復方威麥靈膠囊是曲靖市第一人民醫院研制的院內制劑。由金蕎麥、巖白菜素、絞股藍組成，具有祛邪扶正、清熱解毒、活血化瘀、消瘀散結、鎮咳祛痰的功效，臨床用于咳嗽、慢性支氣管炎、肺膿瘍，肺癌等癥，配合放化療有增效減毒作用。制劑中巖白菜素具有鎮咳祛痰功效，臨床用于慢性支氣管炎。復方威麥靈膠囊現行質量標準中以化學鑒別及浸出物來控制藥品質量，未建立制劑中巖白菜素的含量測定方法。本研究參照文獻[3-5]，以巖白菜素為定量控制指標，采用反向高效液相色譜法對巖白菜素進行含量測定，為有效控制復方威麥靈膠囊質量提供了準確可靠且簡便易行的方法。

1儀器與材料

11儀器Agilent 1260型高效液相色譜儀（包括G1311C系列四元泵，G1314F VMD檢測器，G1316A柱溫箱，G1329B自動進樣器）；KQ-300UDB型雙頻數控超聲清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；METTLE MS205DU電子天平（上海梅特勒-托利多儀器有限公司）；一體式超純水儀（PURELAB FLex 3，英國ELGA公司）

12材料巖白菜素（批號：111532-201203，含量以1000%，中國食品藥品檢定研究院）；甲醇為分析純，乙腈為色譜純，水為二次純化水。復方威麥靈膠囊（批號：150909、151216、160421，曲靖市第一人民醫院制劑室）。

2方法與結果

21色譜條件ODS HYPERSIL C18色譜柱（250mm×46mm，5um）；以乙腈（A）-水（B）（15∶85）為流動相；流速為10mL/min；柱溫：30℃；檢測波長：275nm；進樣量10μL。

22 溶液制備

221供試品溶液制備取本品內容物，混勻，取約05g，精密稱定，置100mL量瓶中，加入甲醇適量，超聲（頻率：45KHz；功率：300W）40min，取出，放冷，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，作為供試品溶液。

222對照品儲備液的制備精密稱取巖白菜素對照品1047mg置50mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，即得巖白菜素2094μg/mL的對照品儲備溶液。

223陰性樣品溶液的制備按復方威麥靈膠囊處方比例，分別稱取除巖白菜素以外的其他藥材，依復方威麥靈膠囊工藝制備不含巖白菜素的陰性樣品，并按“221”項下制備陰性樣品溶液。

23線性關系的考察分別精密吸取“222”項下巖白菜素對照品儲備溶液10、25、50、75、10mL，分別置10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，制得含巖白菜素分別為2090、5235、10470、15705、20940 μg/mL 的系列對照品溶液。在“21”項下色譜條件進樣分析，以對照品濃度為橫坐標（X），峰面積為縱坐標（Y），計算線性回歸方程，得巖白菜素的回歸方程Y=97331X+480052（r=09998）。結果表明：巖白菜素濃度在209～2094μg范圍內具有良好線性關系。

24精密度試驗精密吸取同一巖白菜素對照品溶液（含巖白菜素15705 μg/mL）“21”項下色譜條件連續進樣6次，測定峰面積值，峰面積值的RSD為032%。

25重復性試驗取同1批復方威麥靈膠囊（批號150909）6份，按“221”項下的方法處理，考察方法的重復性。供試品中巖白菜素含量的RSD為12%。

26穩定性試驗取同1份供試品溶液（批號150909），分別于0、2、4、8、12、24h按“21”項下色譜條件進行分析。結果巖白菜素峰面積值的RSD為12%。表明供試品溶液在室溫下放置24h基本穩定。

27回收率試驗分別取已知含量的同一批復方威麥靈膠囊（批號150909）約025g，精密稱定，共6份，分別精密加入對照品溶液（濃度為7011 mg/mL）1mL，按“221”項下的方法處理，制備供試品溶液，分別測定，計算回收率。平均回收率為9880%，RSD為065%。見表1。

28專屬性試驗將陰性樣品溶液按“21”項下色譜條件進樣分析，記錄色譜圖，見圖1。結果色譜圖中在巖白菜素相應出峰位置未出現干擾峰。

表1回收率測定結果（n=6）

序號取樣量/g樣品中巖白

菜素量/mg加入巖白

菜素量/mg測得巖白菜

素總量/mg回收率/%平均回

收率/%RSD/%10250972188701114218199832025037201570111408089812302507721370111413339871402505720727011141673992750250372015701114095498336025087215970111412279851988065

29樣品含量測定取不同批號的供試品3批按“221”項下的方法處理，制備供試品溶液，按“21”項下色譜條件進樣測定，按上述色譜條件測定峰面積積分值，以外標法計算巖白菜素含量。見表2。

表2樣品含量測定結果（n=3）批號巖白菜素含量/mg/g123平均值RSD/

%150909287612853228529285070931503092689326912702527664108160103273212756227726285360713討論

31流動相的選擇實驗先后試用文獻中[3-4]甲醇-水（25∶75）不同比例作為流動相以及文獻中[5]中甲醇-1%醋酸溶液（11∶89）不同比例作為流動相測定，對照品及樣品中巖白菜素的峰形均不理想。結果本文試用了文獻[6]的乙腈-水（10∶90）的不同比例作為流動相，結果以乙腈-水（15∶85）為流動相能得到對稱性較好的巖白菜素峰，并且樣品中巖白菜素與其它雜質能很好地分離，故選用乙腈-水（15∶85）為流動相。

32提取方法的選擇①提取方法的確定：試驗中試用了文獻[6]中樣品處理方法，結果超聲提取效果較好，且加標回收率較高，故選用超聲提取。②超聲時間的確定：精密稱取樣品（批號20150909）5份，每份約05g，置100mL量瓶中，加入甲醇適量，分別超聲（頻率：45KHz；功率：300W）處理10、20、30、40、50 min后測定巖白菜素含量，結果超聲30 min后，巖白菜素含量基本不再改變，證明樣品超聲處理30min后，能將樣品中的巖白菜素提取完全，所以超聲（頻率：45KHz；功率：300W）時間確定為40 min。

綜上，該方法準確、快速、簡便可靠，結果穩定，可用于復方巖白菜膠囊中巖白菜素的含量測定。參考文獻

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（收稿日期：2016-12-09編輯：梁志慶）