高效液相色譜法測定阿卡波糖口崩片的含量

楊國偉

（山西省食品藥品檢驗(yàn)所，山西 太原 030001）

阿卡波糖是一種新型口服降糖藥[1]。在腸道內(nèi)競爭性抑制葡萄糖甙水解酶。降低多糖及蔗糖分解成葡萄糖，使糖的吸收相應(yīng)減緩，因此可具有使飯后血糖降低的作用。中國藥典2015二部年版僅收載了原料、普通片劑[2]。本文采用高效液相色譜法測定阿卡波糖口崩片含量，方法簡便，重復(fù)性好。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

島津20A高效液相色譜儀，帶二極管陣列檢測器；梅特勒MS105du型十萬分一電子天平

1.2 試藥

阿卡波糖對(duì)照品（批號(hào)100808-201203，含量95.8%，中國食品藥品檢定研究院）；阿卡波糖口崩片（三批，規(guī)格為100 mg）；乙腈為色譜純，磷酸二氫鉀、無水磷酸氫二鈉為分析純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

用氨基硅烷鍵合硅膠為填充劑（Welch Ultimate XB-NH2柱，250 mm×4.6 mm×5 μm）；以磷酸鹽緩沖液（取磷酸二氫鉀600 mg與無水磷酸氫二鈉279 mg，加水溶解并稀釋至1000 ml）-乙腈（30∶70）為流動(dòng)相；流速為每分鐘2.0 ml；檢測波長為210 nm；柱溫35℃。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取阿卡波糖對(duì)照品適量，加水溶解并定量稀釋至每1 ml含1 mg的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備

取阿卡波糖口崩片20片，研細(xì)，取適量，精密稱定，加水溶解并定量稀釋制成每1 ml中約含1 mg的溶液，即得。

2.3 系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)

取阿卡波糖原料200 mg，置10 ml量瓶中，加水少量使溶解，加0.1 mol/L氫氧化鈉溶液1 ml，混勻，室溫放置1小時(shí)，加0.1 mol/L鹽酸溶液1 ml，用水稀釋至刻度，搖勻，作為系統(tǒng)適用性溶液。

精密量取上述溶液10 μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，見圖1、2、3

2.4 線性關(guān)系

精密稱取阿卡波糖對(duì)照品100 mg，置10 ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4 ml，分別置10 ml量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，照含量測定色譜條件，精密量取10 μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果表明阿卡波糖質(zhì)量濃度（C）在0.2～1.4 mg·mL-1范圍內(nèi)，與色譜峰面積（A）呈良好的線性關(guān)系，回歸方程：A=907526C+3681.1，r=0.9995。

圖1 系統(tǒng)適用性色譜圖

圖2 阿卡波糖對(duì)照品色譜圖

圖3 阿卡波糖口崩片樣品圖

2.5 精密度實(shí)驗(yàn)

取線性試驗(yàn)項(xiàng)下濃度為1.0 mg/ml的對(duì)照品溶液，平行進(jìn)樣6針，記錄色譜圖，結(jié)果表明對(duì)照品溶液平行進(jìn)樣6針，主峰峰面積的RSD=0.36%，進(jìn)樣精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

照含量測定方法配制對(duì)照品溶液與供試品溶液，室溫放置，于0、2、4、8、12小時(shí)分別精密量取10 μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。計(jì)算主峰峰面積的RSD值，結(jié)果表明對(duì)照品溶液與供試品溶液室溫放置12小時(shí)，主峰峰面積的RSD均小于1.0%，對(duì)照品溶液與供試品溶液室溫12小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 檢出限實(shí)驗(yàn)

取阿卡波糖對(duì)照品適量，用水制成濃度約10 μg/ml的溶液進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)，結(jié)果主藥信噪比約為20∶1，根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，1.5 μg/ml的阿卡波糖對(duì)照品溶液，信噪比（S/N）＞3∶1，檢測線為0.015 μg。

2.8 回收率實(shí)驗(yàn)

按標(biāo)示量的80%、100%、120%制備樣品供試溶液，實(shí)驗(yàn)中稱取阿卡波糖對(duì)照品40 mg、50 mg、60 mg各3份，分別精密稱定，分別置50 ml量瓶中，分別加入空白輔料150 mg，加水適量，振搖使阿卡波糖溶解，用水稀釋至刻度，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；照含量測量方法測定供試品溶液中阿卡波糖的量，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

表1 含量測定回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.9 耐用性實(shí)驗(yàn)

為了研究液相色譜條件的微笑變化對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響程度，進(jìn)行耐用性實(shí)驗(yàn)考察因素有流速、柱溫、流動(dòng)相pH值，精密量取對(duì)照品溶液、供試品溶液與系統(tǒng)適用性溶液分別在不同條件下注入色譜儀，按外標(biāo)法計(jì)算以阿卡波糖為標(biāo)示量的百分含量。結(jié)果見表2。

2.10 樣品含量測定

取三批樣品，照含量測定方法進(jìn)行測定，結(jié)果見表3。

表2 含量測定耐用性試驗(yàn)結(jié)果表

表3 中試批樣品含量測定結(jié)果表

結(jié)果，本品中試樣品含量測定結(jié)果均在95%～105%，符合規(guī)定。

3 討 論

由于阿卡波糖分子式中存在多個(gè)羥基，極性較強(qiáng)，采用傳統(tǒng)的十八烷基鍵合硅膠色譜柱，保留能力較差，故選擇氨基柱，以增強(qiáng)阿卡波糖在色譜柱的保留能力，提高分離能力和理論塔板數(shù)[3]。阿卡波糖只有紫外末端吸收，選擇210 nm波長進(jìn)行檢測。在實(shí)驗(yàn)過程中我們選擇不同比例的流動(dòng)相進(jìn)行分析，磷酸鹽緩沖液：乙腈（30∶70）既滿足系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)的要求，同時(shí)分析時(shí)間最短。該方法可以應(yīng)用與阿卡波糖口崩片的質(zhì)量控制。

[1] 尹靈富.阿卡波糖含量檢測方法的試驗(yàn)分析[J].湖南農(nóng)機(jī),2012,(09).

[2] 梁現(xiàn)蕊,張會(huì)晨,何小嬡,等.阿卡波糖中雜質(zhì)的分離富集方法研究[J].浙江工業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2017,(03).

[3] 耿銀銀,許麗曉,歐定蓮,等.親水作用色譜法測定阿卡波糖含量[J].藥物分析雜志,2017(05).