不同黑木耳品種鎖狀聯合形成的差異性研究

王妍　姜忠元　董錫文

摘要：為了研究光質、營養因素對黑木耳[Aurieuzaria auricular （L. ex Hook.）Uzderw.]菌絲鎖狀聯合形成的影響，以5個黑木耳品種為研究對象，通過平板插片培養法進行試驗。結果表明，紅光、藍光和紫光對黑木耳品種H29和SL15鎖狀聯合形成有顯著的促進作用；H15、H29、XK1、SL15分別在紫外光照射時間4、4、5、3 min后有利于鎖狀聯合形成；供試的4種碳源中，可溶性淀粉、蔗糖、麥芽糖對5個黑木耳品種鎖狀聯合的形成有促進作用；5個黑木耳品種在以牛肉膏為氮源時，鎖狀聯合顯著高于其他氮源；5個黑木耳品種在加入丙氨酸和谷氨酸的培養基中鎖狀聯合有顯著的提高。

關鍵詞：黑木耳[Aurieuzaria auricular （L. ex Hook.）Uzderw.]；鎖狀聯合；光質；營養因素

中圖分類號：S646.6 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2017）04-0682-04

黑木耳[Aurieuzaria auricular（L. ex Hook.）Uzderw.]是世界上最早實現人工栽培的食用菌，其食用和藥用價值極高，受到消費者的普遍歡迎[1]；目前中國已成為世界上黑木耳的主產國[2]。隨著黑木耳栽培方式的日漸改進，在黑木耳菌絲生長過程中發現很多環境因素會對其產生影響，進而影響黑木耳的產量。光質、紫外光照射、碳源、氮源和氨基酸等外在因素在黑木耳菌絲生長過程中起著重要作用，會影響黑木耳菌絲鎖狀聯合結構的形成[3，4]。形成鎖狀聯合的菌絲再形成耳基的比例為100%，而不形成鎖狀聯合的菌絲形成耳基的比例僅為20%左右；并且形成鎖狀聯合的菌絲形成耳基的時間比不形成鎖狀聯合的菌絲形成耳基的時間提前30 d左右[5-7]。關于黑木耳生長研究的成果已有很多[8-12]，但關于不同黑木耳品種鎖狀聯合形成的差異性比較還鮮有報道。因此，試驗對此進行了探討，以期揭示不同外在因素對黑木耳菌絲鎖狀聯合形成的影響，進而為黑木耳生產提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 供試菌株 供試黑木耳品種的菌株購于黑龍江省科學院微生物研究所，分別是黑微15（H15）、黑微29（H29）、新科1號（XK1）、新科10號（XK10）、神龍15號（SL15）。

1.1.2 培養基 ①PDA固體培養基[13，14]組成為馬鈴薯200 g、葡萄糖20 g、蛋白胨5 g、KH2PO4 3 g、MgSO4 1.5 g、VB1 10 mg、瓊脂20 g、水1 000 mL，pH 5.5。②基礎培養基組成為KH2PO4 3 g、MgSO4 1.5 g、VB1 10 mg、瓊脂20 g、水1 000 mL，pH 5.5。③碳源培養基組成是在基礎培養基中添加0.5%的蛋白胨組成無碳培養基，再在無碳培養基中分別添加2%的葡萄糖、可溶性淀粉、麥芽糖、蔗糖組成不同的碳源培養基。④氮源培養基組成是在基礎培養基中添加2%的葡萄糖組成不同的無氮培養基，再在無氮培養基中分別添加0.5%的蛋白胨、牛肉膏、酵母膏、（NH4）2SO4組成不同的氮源培養基。⑤氨基酸培養基組成是在基礎培養基中加入2%的葡萄糖和0.5%的蛋白胨，再分別添加0.4%的丙氨酸（Ala）、谷氨酸（Glu）、蘇氨酸（Thr）、酪氨酸（Try）組成不同的氨基酸培養基[15]。

1.2 試驗方法

1.2.1 菌種活化與培養 在無菌條件下，將供試黑木耳各品種菌株轉接在經過滅菌的PDA固體斜面培養基中央，置于恒溫培養箱里，于25 ℃恒溫條件下培養。

1.2.2 不同光質處理 光質有LED光源的紅光、藍光、白光、綠光、紫光。將LED光源固定于恒溫培養箱頂部，培養溫度為25 ℃。取活化好的黑木耳各品種菌株，用打孔器在菌落邊緣打取相同菌齡的菌種塊5 mm，轉接在PDA固體平板培養基上，并在菌種塊一定距離處以45°傾斜角插入蓋玻片（插片法）[16]，待蓋玻片上長滿菌絲后用于顯微觀察。光照組實施24 h照射處理，對照組實施24 h黑暗處理[17]，每個處理設置6個重復。

1.2.3 紫外光照射處理 依次將接種3 d后的PDA固體平板培養基（插片）放在超凈工作臺的30 W紫外燈垂直下方約30 cm處，打開培養皿蓋，按照設定的時間1、2、3、4、5 min分別照射紫外光。照射后遮光，防止光復活。不進行紫外光照射的為對照組，都置于恒溫培養箱內25 ℃培養。隔3 d再進行一次上述處理；每處理設置6個重復。

1.2.4 不同營養因素處理 將活化后的菌種分別轉接在含有不同碳源、氮源、氨基酸的固體平板培養基中央（插片），都以基礎培養基（插片）為對照，25 ℃恒溫培養；每處理設置6個重復。

1.2.5 計數及統計 每處理培養12 d后隨機選取5個平板，將插片取出，置于顯微鏡下觀察，記錄鎖狀聯合的個數、菌絲數，并計算出鎖狀聯合菌絲比率，其計算公式為：

鎖狀聯合菌絲比率=鎖狀聯合個數/菌絲數，

處理組鎖狀聯合菌絲比率=處理組鎖狀聯合菌絲比率-對照組鎖狀聯合菌絲比率。

1.3 數據處理

試驗所得數據采用Microsoft Office Excel 2007程序處理，并用其制表和繪圖；運用SPSS11.0軟件進行統計分析。

2 結果與分析

2.1 光質對黑木耳鎖狀聯合形成的影響

光質是一種重要的環境因素，能影響生物的生存、生長和發育；光質對黑木耳品種各菌株鎖狀聯合形成的影響情況見圖1。由圖1可知，黑木耳品種H29在紅光和藍光處理下，鎖狀聯合菌絲比率顯著高于其他4個品種（P<0.05）；5個黑木耳品種在白光處理下鎖狀聯合菌絲比率均較低，相互之間的差異不顯著（P>0.05）；H15和H29在綠光處理下鎖狀聯合菌絲比率明顯高于其他3個品種，其中顯著高于XK1、XK10品種（P<0.05）；SL15在紫光處理下鎖狀聯合菌絲比率達到最高值，明顯高于其他4個品種，其中顯著高于XK1、XK10品種（P<0.05）。可見，不同光質，尤其是紅光、藍光和紫光分別對H29和SL15鎖狀聯合的形成影響顯著。

2.2 紫外光照射對黑木耳鎖狀聯合形成的影響

紫外線是一種不可見光，其照射菌絲體后可引起其發生諸如生長發育、物質轉換、能量代謝等方面的變化，從而影響菌絲體生長，而且不同長短的照射時間對菌絲體產生的影響也不同[18-21]。試驗里紫外光照射對黑木耳鎖狀聯合形成的影響情況見圖2。由圖2可知，H15在紫外光照射4 min后鎖狀聯合菌絲比率達到最高，且明顯高于其他品種；H29隨著照射時間的增長，鎖狀聯合菌絲比率呈現減-增-減的動態變化，在紫外光照射4 min后鎖狀聯合菌絲比率達到最高值；XK1隨著照射時間的增長，鎖狀聯合菌絲比率呈現增-減-增的動態變化，當紫外光照射時間為5 min時，鎖狀聯合菌絲比率達到最高值，且顯著高于其他品種（P<0.05）；XK10鎖狀聯合菌絲比率隨著紫外光照射時間的增長呈現緩慢遞減的變化，其鎖狀聯合的形成受紫外光照射時間的影響并不明顯；SL15在紫外光照射時間為3 min時，鎖狀聯合菌絲的比率達到最高值。因此，H15、H29、XK1、SL15分別在紫外光照射時間為4、4、5、3 min后有利于鎖狀聯合的形成。

2.3 不同碳源對黑木耳鎖狀聯合形成的影響

碳源是真菌菌絲生長發育過程中所需的一種主要營養物[22]。試驗里不同碳源對黑木耳鎖狀聯合形成的影響情況見表1。由表1可知，黑木耳品種H15在以可溶性淀粉為碳源時，鎖狀聯合菌絲比率最高；H29在以蔗糖為碳源時，鎖狀聯合菌絲比率最高，達到0.996，且顯著高于其他品種（P<0.05）；XK1、XK10、SL15均在以麥芽糖為碳源時鎖狀聯合菌絲比率最高，且顯著高于H15（P<0.05），其中XK1、XK10顯著高于H29（P<0.05）。說明黑木耳菌絲對雙糖和多糖的利用較好，以可溶性淀粉、蔗糖、麥芽糖作為碳源對黑木耳鎖狀聯合的形成有促進作用。

2.4 不同氮源對黑木耳鎖狀聯合形成的影響

黑木耳菌絲生長發育過程中能利用的氮源有尿素、氨、銨鹽、硝酸鹽、蛋白胨等，試驗里4種不同氮源對黑木耳鎖狀聯合形成的影響情況見圖3。由圖3可知，5個黑木耳品種在以牛肉膏為氮源的培養基中，鎖狀聯合菌絲比率的形成明顯高于其他氮源，其中H15和H29的鎖狀聯合菌絲比率最突出，對氮源的利用率最高；以牛肉膏為氮源的XK1、XK10和SL15鎖狀聯合菌絲比率也要高于同品種其他氮源。可見，以牛肉膏為氮源的培養基有利于5個黑木耳品種鎖狀聯合的形成。

2.5 不同氨基酸對黑木耳鎖狀聯合形成的影響

氨基酸作為一種營養物，對黑木耳菌絲體生長和子實體形成具有一定的影響[23]；因此，在黑木耳菌絲體生長發育階段添加不同種類氨基酸，可以比較其對黑木耳鎖狀聯合形成的影響。不同氨基酸對黑木耳鎖狀聯合形成的影響情況見圖4。由圖4可知，H29在丙氨酸培養基中鎖狀聯合菌絲比率最高，且顯著高于其他品種（P<0.05）；其次為谷氨酸培養基。在4種不同氨基酸培養基中，丙氨酸和谷氨酸培養基對5個黑木耳品種鎖狀聯合的形成有較明顯的促進作用。

3 小結

試驗結果表明，紅光、藍光和紫光對黑木耳品種H29和SL15鎖狀聯合的形成有顯著促進作用，白光對5個黑木耳品種鎖狀聯合的形成作用不大，因此生產中應盡量避免白光的使用。紫外光不同照射時間處理后，H15、H29、XK1、SL15分別在紫外光照射時間為4、4、5、3 min后促進了鎖狀聯合菌絲比率的提高，因此生產中應根據品種選擇不同的紫外光照射時間。參試的4種碳源中，可溶性淀粉、蔗糖、麥芽糖對5個黑木耳品種鎖狀聯合菌絲比率的提高有促進作用，葡萄糖的促進作用不明顯。以牛肉膏為氮源的培養基有利于鎖狀聯合菌絲比率的提高。培養基中添加丙氨酸和谷氨酸有利于鎖狀聯合菌絲比率的提高，因此，生產上可考慮適當加入這2種氨基酸。

根據試驗結果可知，相同外在因素對不同黑木耳品種鎖狀聯合的形成影響有所不同。生產實踐中，可根據不同黑木耳品種選擇不同的培養條件，進而縮短生產周期、增加產量、節本增效。不過試驗僅進行了單因素比較，各因素、各水平的優化組合綜合效果比較還有待下一步探究。

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